Báo cáo thiết bị công nghệ và kỹ thuật công nghệ sinh học 2.1
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (1.83 MB, 19 trang )
<span class="text_page_counter">Trang 1</span><div class="page_container" data-page="1">
<b>ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH</b>
KHOA KHOA HỌC SINH HỌC
<i><b>PHÁT HIỆN NHANH SALMONELLA SPP., </b></i>
<i><b>SALMONELLA ENTERICA HIỆN DIỆN TRONG </b></i>
<b>THỰC PHẨM BẰNG KỸ THUẬT PCR ĐA MỒI </b>
Môn: Thiết bị và kỹ thuật CNSH
<small>Thủ Đức, ngày 24 tháng 10, 2023</small> GVHD: TS. HUỲNH VĂN BIẾT
</div><span class="text_page_counter">Trang 4</span><div class="page_container" data-page="4"><i><b>I. GIỚI THIỆU SALMONELLA</b></i>
<i>Salmonella enterica thuộc họ Enterobacteriaceae </i>
(vi khuẩn đường ruột) là thực khuẩn Gram âm, hình que, kích thước trung bình 3,0 x 0,5 um, có nhiều lơng xung quanh thân
• Giống: Salmonella lignieres 1900 • Loài : S. enterica và S. bongori
<b>4</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 5</span><div class="page_container" data-page="5"><b>II. VẬT LIỆU </b>
<b>VÀ PHƯƠNG PHÁP</b>
<b>5</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 6</span><div class="page_container" data-page="6"><b>VẬT LIỆU</b>
<sup>Gồm 260 mẫu: thịt heo, thịt gà, lòng trắng, đỏ trứng gà, vỏ trứng gà, </sup>nem chua, chả lụa, ba khía, da heo, sị huyết.
<i>trưng cho Salmonella </i>
cấy sang BHI và TSA ủ qua đêm
Cấy 0,1ml dịch tăng sinh vào môi trường chọn lọc
RV, ủ ở 42oC 24 giờ
Thử nghiệm sinh hóa : KIA/TSI , Urea, Indol, VP Phân lập khuẩn lạc đơn
trên 2 mơi trường XLD và HE
<b>• Chuẩn bị mẫu và tăng sinh</b>
<b>6</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 7</span><div class="page_container" data-page="7"><b>Thiết kế các đoạn mồi PCR từ vi khuẩn Salmonella</b>
<b>7</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 11</span><div class="page_container" data-page="11">• H<sub>2</sub>O nuclease - free water
Cặp mồi invA và cặp mồi spvC
<b>11</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 12</span><div class="page_container" data-page="12"><b>ĐIỆN DI</b>
<sup>2</sup><sub>di trên gel agarose và được chụp lại bằng Biorad UV</sub>
<sup>35</sup><sup> lượng bản sao DNA được khuếch đại bằng PCR được đem đi điện </sup>
<b>12</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 13</span><div class="page_container" data-page="13"><b>III. KẾT QUẢ DỰ KIẾN</b>
<b><small>❖ Kết quả PCR được tiến hành thử trên web Primer- BLAST</small></b>
<small>Kết quả PCR gen spvC được tiến hành trên Primer-BLAST</small>
</div><span class="text_page_counter">Trang 14</span><div class="page_container" data-page="14"><b>III. KẾT QUẢ DỰ </b>
<b>KIẾN</b>
<b><small>❖ Kết quả PCR được tiến hành thử trên web Primer- BLAST</small></b><small>Kết quả PCR gen invA được tiến hành trên Primer-BLAST</small>
<b>14</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 15</span><div class="page_container" data-page="15"><b>❖ Kết quả khuếch đại gen mục tiêu bằng phản ứng PCR dự kiến</b>
<small>Kết quả PCR dự kiên với cặp mồi invA</small>
Mồi invA có tính chun biệt cao đối với dòng vi
<i>khuẩn Salmonella spp.</i>
<b>III. KẾT QUẢ DỰ KIẾN</b>
<b>15</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 17</span><div class="page_container" data-page="17"><b>III. KẾT QUẢ DỰ KIẾN</b>
Cặp mồi invA chỉ đánh giá sơ bộ có kết quả dương tính với
<i>Salmonella chứ khơng cho biết </i>
sự hiện diện của các dòng vi
<i>khuẩn khác như S. enteritica.</i>
Mồi spvC thì kết quả lại âm
<i>tính với Salmonella.</i>
<small>Kết quả PCR dự kiến với 2 cặp mồi invA và spvC</small>
<b>17</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 18</span><div class="page_container" data-page="18"><b>Tài liệu tham khảo</b>
<i><small>Mai, T. T. X., Yến, T. T. H., Bé, N. V., & Phương, V. T. T. 2011. Phát hiện nhanh SALMONELLA SPP., SALMONELLA ENTERICA hiện </small></i>
<i><small>diện trong thực phẩm bằng kỹ thuật PCR đa mồi (MULTIPLEX PCR). Tạp chí Khoa học Đại học cần Thơ.</small></i>
<i><small>Shoba CS, Banhart HM, Lee MD and Dreesen DW. 1996. Virulence determinants inVA and spvC in Salmonella isolated from poultry </small></i>
<i><small>products wastewater and Human sources.</small></i>
<i><small>Swamy, S. C., Barnhart, H. M., Lee, M. D., & Dreesen, D. W. 1996. Virulence determinants invA and spvC in salmonellae isolated from </small></i>
<i><small>poultry products, wastewater, and human sources. Applied and environmental microbiology, 62(10), 3768–3771. </small></i>
<i><small>Sahu, B., Singh, S. D., Behera, B. K., Panda, S. K., Das, A., & Parida, P. K. 2019. Rapid detection of Salmonella contamination in seafoods </small></i>
<i><small>using multiplex PCR. Brazilian journal of microbiology : [publication of the Brazilian Society for Microbiology], 50(3), 807–816.</small></i>
<i><small>Wang, M., Zhang, Y., Tian, F., Liu, X., Du, S., & Ren, G. 2021. Overview of Rapid Detection Methods for Salmonella in Foods: Progress </small></i>
<i><small>and Challenges. Foods (Basel, Switzerland), 10(10), 2402.</small></i>
<i><small>Kurtz, J. R., Goggins, J. A., & McLachlan, J. B. 2017. Salmonella infection: Interplay between the bacteria and host immune </small></i>
<i><small>system. Immunology letters, 190, 42–50.</small></i>
