nghiên cứu thành phần hoá học và tác dụng ức vi sinh vật của cây lá lốt

Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (12.59 MB, 74 trang )

Trang 1<div class="page_container" data-page="1">

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP.HCM

KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC

KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP

NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG ỨC VI SINH VẬT CỦA CÂY LÁ

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg bae

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 2<div class="page_container" data-page="2">

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG ỨC VI SINH VẬT CỦA CÂY LÁ

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 3<div class="page_container" data-page="3">

NHIỆM VỤ KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP

Họ và tên sinh viên: PHẠM TUẤN ANH

MSSV: 18081861 Lớp: DHHC14B

Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ KỸ THUẬT HOÁ HỌC

1. Tên đề tài: NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG ỨC VI

SINH VẬT CỦA CÂY LÁ LỐT

2. Nhiệm vụ:

− Điều và chiết các cao phân đoạn − Phân lập và xác định cấu trúc hợp chất

− Thử hoạt tính kháng khuẩn của các cao chiết phân đoạn.

3. Ngày giao nhiệm vụ đề tài: 25/09/2021 4. Ngày hoàn thành nhiệm vụ: 14/11/2021

5. Họ và tên người hướng dẫn : PGS-TS.TRẦN NGUYỄN MINH ÂN

PGS-TS.LÊ TIẾN DŨNG

Chủ nhiệm bộ môn

Chuyên ngành

TP. Hồ Chí Minh, ngày 25 tháng 09 năm 2021

GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN

Trần Nguyễn Minh Ân

TRƯỜNG ĐH CƠNG NGHIỆP TP. HCM

KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC BỘ MÔN MÁY & THIẾT BỊ

--- // ---

CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM

Độc lập – Tự do - Hạnh phúc --- // ---

ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg bae742413069:47:37 PM9:47:37 PM742413069:47:37 PM9:47:37 PM742413069:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 4<div class="page_container" data-page="4">

chia sẻ kinh nghiệm, tạo mọi điều kiện tốt nhất cho tơi trong suốt q trình thực hiện đề tài. Thứ ba, em cảm ơn các anh chị, các bạn sinh viên, học viên trong phịng thí nghiệm Hóa sinh dược tại Viện Vật liệu ứng dụng - Viên Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã hỗ trợ em trong suốt 3 tháng thực hiện đề tài.

Và cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình lúc nào cũng động viên,chia sẻ, tin tưởng, giúp em có thêm động lực để học tập và thực hiện đề tài.

Tuy nhiên kiến thức chun mơn cịn hạn chế nên khơng tránh khỏi những thiếu sót. Nên em mong nhận được sự góp ý của thầy cơ và mọi người để đề tài của em hoàn thiện hơn.

Em xin chân thành cảm ơn!

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 5<div class="page_container" data-page="5">

NHẬN XÉT CỦA GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN

TRƯỞNG BỘ MÔN

Chuyên ngành

TP. Hồ Chí Minh, ngày 25 tháng 09 năm 2021

GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN

Trần Nguyễn Minh Ân

123docz.net - File bi loi xin lienhe: ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg bae742413069:47:37 PM9:47:37 PM742413069:47:37 PM9:47:37 PM742413069:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 6<div class="page_container" data-page="6">

TP.Hồ Chí Minh, ngày …tháng…năm 2021

Giảng viên phản biện

(Ký ghi họ và tên)

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 7<div class="page_container" data-page="7">

1.5. Phương pháp docking phân tử ... 11

CHƯƠNG 2. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ... 13

2.1. Mục tiêu đề tài... 13

2.2. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu ... 13

2.3. Nội dung nghiên cứu ... 13

2.3.1. Nghiên cứu lý thuyết ... 13

2.4. Phương pháp nghiên cứu... 13

2.4.1. Phương pháp cô lập và tinh chế hợp chất hữu cơ ... 13

2.4.2. Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất ... 16

2.4.3. Phương pháp định lượng kháng sinh vi pha loãng ... 17

2.4.4. Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng viêm ... 18

2.4.5. Phương pháp Docking phân tử trên phần mềm Autodock ... 19

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 8<div class="page_container" data-page="8">

3.3.3. Khảo sát phân đoạn PLEA8 ... 25

3.3.4. Khảo sát phân đoạn PLEA816 ... 26

3.3.5. Khảo sát phân đoạn PLEA8169 ... 27

3.3.6. Khảo sát phân đoạn PLEA81695 ... 28

CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ... 30

4.5.1. Đặc tính hố lý của thuốc ... 42

4.5.2. Tính dược học của thuốc ... 43

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 9<div class="page_container" data-page="9">

Hình 2.4. Phương pháp định lượng kháng sinh vi pha loãng ... 18

Hình 2.5. Quy trình docking của thuốc (ligand) đến DNA của protein ... 20

Hình 3.1. Mẫu lá lốt tươi thu hái ở huyện Tân Hiệp, tỉnh Kiên Giang ... 21

Hình 3.2. Quy trình xử lý nguyên liệu ban đầu ... 22

Hình 3.3. Quy trình phân chia cao tổng thành cao phân đoạn ... 22

Hình 3.4. Sắc kí lớp mỏng (TLC) của cao EA với các hệ dung môi ... 23

Hình 3.5. Quy trình phân lập cao Ea ... 24

Hình 3.6. TLC của các phân đoạn được phân lập từ cao Ea ... 24

Hình 3.7. TLC của phân đoạn PLEA8 với các hệ dung mơi ... 25

Hình 3.8. Quy trình trình phân lập PLEA8 ... 26

Hình 3.9. Quy trình phân lập PLEA816 ... 27

Hình 3.10. Quy trình phân lập PLEA8169 ... 28

Hình 4.6. Tương quan HMBC của hợp chất APL4 ... 36

Hình 4.9. Các liên kết Hydro hình thành giữa các amino acid trên chuỗi xoắn X với các nguyên tử hoạt tính trên ligand cấu dạng bền nhất, ligand (pose 404) ... 38

Hình 4.10. Các tương tác ligand quan trọng hình thành giữa các amino acid hoạt tính và các nguyên tử hoạt đông trên ligand cấu dạng bền nhất, (docking pose 404/500) được trình bày trên một sơ đồ 2D ... 39

Hình 4.11. Bản đồ ligand trình bày các tương tác thứ cấp giữa amino acid của DNA

của protein với các vị trí hoạt động trên ligand trên 1 sơ đồ 2D gồm tương tác Hydrogen

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 10<div class="page_container" data-page="10">

Hình 4.14. Bản đồ ligand trình bày các tương tác thứ cấp giữa amino acid của DNA

của protein với các vị trí hoạt động trên ligand trên 1 sơ đồ 2D gồm tương tác Hydrogen (đường màu xanh) tương tác lập thể (đường màu nâu đỏ), tương tác phủ lấp đường tròn màu

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 11<div class="page_container" data-page="11">

DANH MỤC BẢNG BIỂU

Bảng 4.1. Kết quả thực nghiệm hoạt tính khống khuẩn ... 30

Bảng 4.2. Bảng so sánh phổ NMR của APL-2 với vanillic acid ... 34

Bảng 4.3. Bảng so sánh phổ NMR của APL-4 với 4-hydroxy benzaldehyde ... 36

Bảng 4.4. Các giá trị quan trọng tính tốn được từ phần mềm Autodock của hai hợp chất APL-2 và APL-4 với protein mã hiệu 2VF5:PDB ... 38

Bảng 4.5. Đặc tính hố lý của APL-2 and APL-4 ... 42

Bảng 4.6. Tính dược học của APL-2 and APL-4 ... 43

Bảng 4.7. Tính hấp thụ APL-2 and APL-4 ... 44

Bảng 4.8. Tính phân phối của APL-2 and APL-4 ... 45

Bảng 4.9. Trao đổi chất của APL-2 and APL-4 ... 46

Bảng 4.10. Độc tính của APL-2 and APL-4 ... 47

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 12<div class="page_container" data-page="12">

CTPT Molecular formula Công thức phân tử

1H-NMR Hydro (1) Nuclear Magnetic Resonance

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1)

Bond Cohenrence

Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết

Quantum Coherence

Phổ tương tác dị hạt nhân qua một liên kết

SKLM Thin layer chromatography Sắc kí lớp mỏng

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 13<div class="page_container" data-page="13">

CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN

1.1. Đặt vấn đề

Bên cạnh rừng và biển thì thực vật cũng là một món quà mà thiên nhiên mang lại cho con người chúng ta. Thực vật được sử dụng với nhiều công dụng khác nhau như làm thuốc chữa bệnh, làm gia vị cho thức ăn, làm vật liệu để xây dựng…Chính vì vậy mà có rất nhiều ngành nghiên cứu đến thực vật ra đời đời tiêu biểu trong số đó phải kể đến ngành dược học y học cổ truyền, một ngành nghề đã bắt đầu phát triển từ lúc con người xuất hiện.

Ngày nay cùng với sự phát triển của khoa học hiện đại con người khơng cịn sử dụng các loại dược liệu một cách kinh nghiệm mà thay vào đó là sự tìm hiểu, nghiên cứu các hợp chất có chứa trong dược liệu có tác dụng sinh học. Các nhà khoa học công nhận rằng hầu hết các cây cỏ đều có tính kháng sinh, đó là khả năng miễn dịch tự nhiên của thực vật. Tác dụng kháng khuẩn do các hợp chất tự nhiên có mặt phổ biến trong thực vật như phenolic, , ancaloid, flavonoid, saponin, [1],[2],[3]... Cho đến nay, nhiều hợp chất tự nhiên đã được giải mã về cấu trúc, những hợp chất này được chiết xuất từ cây cỏ để làm thuốc. Dựa vào cấu trúc được giải mã, người ta có thể tổng hợp nên các chất nhân tạo để chữa bệnh.

Chi hồ tiêu (Piper) thuộc họ hồ tiêu (Piperaceae) có hơn 2000 lồi [4]. Lá lốt (Piper lolot C.DC.)là một loài thuộc chi hồ tiêu (Piper) được tìm thấy hầu như ở

khắp các vùng miền Việt Nam, nó có cơng dụng như một vị thuốc trong y học cổ truyền. Trong y học cổ truyền, lá lốt có vị nồng, hơi cay, tính ấm, cơng dụng ôn trung (làm ấm bụng), giảm đau lưng, đau chân, trị nơn mửa, đầy hơi, khó tiêu, tiêu chảy…Chính vì có nhiều cơng dụng nêu ở trên nên lá lốt đã được nhiều nhà khoa học nghiên cứu phân lập xác định cấu trúc hoá học, đánh giá hoạt tính sinh học. Thơng qua đó có thể tổng hợp nên những loại thước có giá trị sử dụng cao. Để góp phần nhỏ vào cơng trình nghiên cứu này, Trong khố luận tốt nghiệp lần này tơi thực hiện nghiên cứu thành phần hoá học của cây lá lốt tác dụng ức chế vi sinh vật.

1.2. Giới thiệu về cây lá lốt (Piper CD.C)

1.2.1. Nguồn gốc

Cây lá lốt có nguồn gốc từ vùng Tây Ghast, Kerela của Ấn Độ được phân bố khắp vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới nơi có nhiều họ hồ tiêu (Piperaceae) sống ngoài tự nhiện. Lá lốt đã được phát hiện cách đây hơn vài ngàn năm. Sau đó đó chung được con người đem về trồng.

Lá lốt được đem đến vào Đông Dương từ thế kỉ 17 nhưng mà đến đầu thế kỉ 18 mới bắt đầu phát triển mạnh khi mà món gói thịt bầm trong lá nho để nướng có nguồn gốc ở Trung Đơng, đã được đưa đến Ấn Độ bởi người Ba Tư, sau đó đã được giới thiệu bởi những người Ấn Độ đến khu vực Đông Nam Á. Tuy nhiên, nho không phát triển tốt ở vùng khí hậu nhiệt đới, do đó, người Việt Nam bắt đầu sử dụng lá lốt thay vì lá nho. Chính món thịt nướng lá lốt này từ Việt Nam phổ biến sang nhiều nước Đông Nam Á khác.

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 14<div class="page_container" data-page="14">

Ở miền nam Việt Nam, người ta thường gọi là lá lốt hoặc tùy vào từng vùng miền mà tên gọi có sự khác nhau: tất bát, pâu pat, phjăc pat (Tày), anakhia táo, lau khuẩy (Dao). Tên tiếng Anh: Lolot, Lolot Piper, Poivrelolot. Hay tên tiếng Pháp: Cha Plu, La-lot, Lalot, Lolo du Tonkin, Poivre Lolot.

Hình 1.1. Lá lốt (Piper lolot C. DC.) 1.2.3. Vị trí phân loại

− Giới: Plantae;

− Ngành: Ngọc Lan (Magnoliophyta); − Lớp: Ngọc Lan (Magnoliopsida); − Phân lớp: Ngọc Lan (Magnoliidae); − Bộ: Hồ tiêu (Piperales);

− Họ: Hồ tiêu (Piperaceae); Chi: Hồ tiêu (Piper); Loài: Piper lolot [6].

1.2.4. Điều kiện sinh trưởng

Cây lá lốt là một loại cây ưa khí hậu nhiệt đới, là loại cây dễ sống và chủ yếu sống tự nhiên. Nhưng do nhu cầu sửa dụng ngày càng cao của con người như dùng các vị thuốc mang tính thực vật, những sản phẩm đậm chất dân dã gắn liền với tự nhiên nên lá lốt đang được gây trồng là sản phẩm kinh tế. Do tính chất hoang dã nên việc gây trồng khơng q khó khăn ta chọn những cây lá lốt sinh trưởng mạnh (lá xanh bóng, mượt, kích thước lá to), tách từng nhánh đã mang rễ hoặc cắt thành từng đoạn dài 20– 30cm để giâm. Giâm những đoạn thân vừa cắt trực tiếp trên luống đã chuẩn bị để trồng, giâm từng hàng vào đất (ngập

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 15<div class="page_container" data-page="15">

2/3 đoạn thân vừa cắt), sau đó tưới nước nhẹ cho cây đủ ẩm. Hàng ngày tưới nước 2 lần cho cây và dùng thêm số loại phân hữu cơ vì lá lốt là lồi cây ít bị bệnh hại [7, 8].

1.2.5. Đặc tính thực vật

Lá lốt thuộc dạng cây thân cỏ, cao 30-40 cm. Thân phồng lên ở các mấu, có vạch dọc đơi khi có màu nâu, hơi phủ lông. Lá đơn, nguyên, mọc so le, hình tim, có màu xanh đậm, mặt lá bóng. Lá có 5 gân chính tỏa ra từ cuống lá, cuống có bẹ ơm lấy thân. Phiến lá dài 6-13 cm, rộng 5-8 cm, có 5-7 gân xuất phát từ gốc lá, cuốn lá dài 2,5 cm. Hoa mọc từ nách lá, cụm hoa bông, hoa đực và hoa cái khác gốc. Bơng cái dài 1cm màu vàng, có lơng, lá bắc trịn, bầu nhẵn hình trứng, vịi nhụy chẻ 3. Quả mọng chứa một hạt. Mùa ra hoa từ tháng 8 đến tháng 10.

1.2.6. Thành phần hoá học

1.2.6.1. Nghiên cứu ngồi nước

Trên thế giới có nhiều nghiên cứu về cây lá lốt và các loài thuộc chi Piper L. Những nghiên cứu này chủ yếu tập trung về thành phần hố học, hoạt tính kháng vi sinh vật, hoạt tính kháng viêm… thơng qua những nghiên cứu này tạo nên cơ sở dữ liệu to lớn để nghiên cứu và tổng hợp hoá dược. Một số cơng trình nghiên cứu tiêu biểu:

Năm 1896 B. Bruke và cơng sự của mình đã phân lập và cơng bố 4 hợp chất từ trái của hai lồi Piper Aduncum and Piper Hispidum gồm, 4-methoxy-3,5-bis(3’-methyl-2’-butenyl)-benzoic acid, 1-allyl-2,3-(methylenedioxy)-4,5-dimethoxybenzene 5-hydroxy-7-methoxyflavanone và 2,6-dihydroxy-4-methoxydihydrochalcone. Trong đó 1-Allyl-2,3-(methylenedioxy)-4,5-dimethoxybenzene và 4-methoxy-3,5-bis(3’-methyl-2’-butenyl)-benzoic acid là hai cấu trúc mới [9].

1-Allyl-2,3-(methylenedioxy)-4,5-dimethoxybenzene

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 16<div class="page_container" data-page="16">

4-methoxy-3,5-bis(3’-methyl-2’-butenyl)-benzoic acid

Năm 1987 Stephen A. Ampofo và các cộng sự đã phân lập và cơng bố ba cấu trúc mới nhóm phenolic từ loài Piper Auritum. Ba hợp chất được công bố gồm Piperoic acid, Piperochromanic acid, 4-Hydroxy-5-(E,E-farnesyl)benzoic acid [10].

Piperochromanic acid Piperoic acid

4-Hydroxy-5-(E,E-farnesyl)benzoic acid

Năm 1988 Sanjay J. Desai cùng các cộng sự của mình đã cơ lập và công bố được 9 hợp chất từ rể của loài Piper longgum, các hợp chất lần lượt là Cepharadione B, Cepharadione A, Cepharanone B, Norcepharadione B, Aristolactam AII, 2-hydroxy-1-methoxyl-4H-dibenzo [de,g]quinolone-4,5(6H)-dione, Piperadione, Piperolactam A, Piperolactam B,. Trong đó 3 hợp chất gồm Piperolactam A, Piperolactam B, Piperadione là cấu trúc mới [11].

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 17<div class="page_container" data-page="17">

Piperolactam A Piperolactam B Piperadione

Năm 1988 S. K. Koul và các công sự của ông đã phân lập và công bố được 3 cấu trúc mới từ loài Piper Species gồm Brachyamide A, Brachyamide B, Brachystine [12].

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 18<div class="page_container" data-page="18">

cyclohexadien-1-one

4-(2-piperonyl-2-hydroxy-1-methylethyl-2,5-dimethoxy-2-(2-propenyl)-3,5-Năm 2000 Craig D. Dodson và các cộng sự của ông đã phân lập và công bố 4 hợp chất từ loài Piper cenocladum gồm dihydropyridone alkaloid, cenocladamide, một dẫn xuất của piplartine, 4’-desmethylpiplartine. Trong đó hai cấu trúc mới là cenocladamide và 4’-desmethylpiplartine [14].

4’-desmethylpiplartine Cenocladamide

Năm 2008 Ninoska Flores và các cộng sự của ông đã phân lập và công bố 13 hợp chất thuộc loại Benzoic acid từ lồi Piper Species trịng đó có 9 cấu trúc mới chưa được cơng bố trước đó [15].

3,4-dihydroxy-5-(2-butenyl)benzoate

methyl-3-butenyl)benzoate

4-hydroxy-3-(2-hydroxy-3-ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg bae4-hydroxy-3-(2-hydroxy-3-ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg bae4-hydroxy-3-(2-hydroxy-3-ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg bae4-hydroxy-3-(2-hydroxy-3-ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg bae

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 19<div class="page_container" data-page="19">

3-[2-(acetoxy)-3-methyl-3-dihydroxybenzoate

methyl-2-butenyl)benzoate

4-Hydroxy-3-(2-hydroxy-3-methyl-2- butenyl)benzoic acid

3-(2-Hydroxy-3-methyl-3-methyl-2- butenyl)benzoic acid

methyl-1-butenyl]-4-methoxy-5-(3-methyl- 2-butenyl)benzoic acid

3-[(1E)-3-Hydroxy-3-hydroxy-3-methyl-3-butenyl)benzoic acid

4-Hydroxy-3,5-bis(2-Năm 2009 Kooi-Mow sim và các cộng sự đã phân lập và cơng một amide alkaloid mới từ lồi Piper sarmentosum với tên gọi là N-(3’,4’,5’-trimethoxy-cis-cinnamoyl) pyrrolidine [16].

N-(3’,4’,5’-trimethoxy-cis-cinnamoyl) pyrrolidine

Năm 2011 Candy Tuiz và các cộng sự đã phân lập và công bố 4 hợp chất gồm (3’,4’,5’-trimethoxyphenyl)-2-hydroxybenzamide,2’-hydroxy-3’,4’,6’-trimethoxyphenyl-chalcon, cardamonin, Pinocembrin. Từ loài Piper hispidum [17].

N-2-ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeN-2-ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeN-2-ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeN-2-ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg bae742413069:47:37 PM9:47:37 PM742413069:47:37 PM9:47:37 PM742413069:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 20<div class="page_container" data-page="20">

N-2-(3’,4’,5’-trimethoxyphenyl)-2-hydroxybenzamide

Năm 2013 Thanakorn Damsud và các cộng sự đã phân và công bố ba cấu trúc mới thuộc loại Phenylpropanoyl amides là chaplupyrrolidones A, chaplupyrrolidones B, deacetylsarmentamide B từ loài Piper Sarmentosum [18].

Chaplupyrrolidones A Chaplupyrrolidones B

N-(3’,4’,5’-trimethoxy-cis-cinnamoyl) pyrrolidine

1.2.6.2. Nghiên cứu trong nước

Năm 1995 Nguyễn xuân Dũng và các cộng sự của mình đã chưng cất để thu được tinh dầu từ các bộ phận trên cây lá lốt. Kết quả chỉ ra 𝛽-caryophyllene là thành chủ yếu của tinh dầu lá lốt. Tính dầu ở thân cho hàm lượng 𝛽-caryophyllene cao nhất 30.9%, tiếp theo là 27.6% và 26.1% tương ứng với ở lá và ở rễ. Ngoài thành phần chình là 𝛽-caryophyllene tinh dầu của cây lá lốt còn chứa 𝛼-muurolene, 𝛾-cadinene và caryophyllene oxide [19].

Năm 2013 Đặng Thị Thanh Nhàn tiến hành đo GC-MS cho dịch chiết cây lá lốt với dung môi n-Hexan từ cao methanol ở tỉnh Thừa Thiên Huế có 18 cấu tử. Trong đó có 5 cấu tử chiếm hàm lượng cao hơn 8% [20].

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 21<div class="page_container" data-page="21">

Hình 1.2. Các hợp chất có thể có trong dịch chiết lá lốt

Tên gọi Công thức

𝛽-asaron C12H16O3

Guineesine C24H33NO3

Caryophyllene C15H24

Isobutyl metyl cacbinol (4-

pentanol)

Methyl-2-C6H14O

Metyl hidrocinamat

(Methyl phenylpropionate)

Brachystamide B C26H37NO3

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 22<div class="page_container" data-page="22">

Pellitorine C14H25NO

1.2.7. Công dụng

Bộ phận thường dùng là toàn thân và lá. Lá lốt được sử dụng để ăn sống như là các loại rau mùi hoặc là dùng làm rau, gia vị nêm trong nhiều món ăn như: ốc, lươn, ếch… vì đặc tính của lá có mùi thơm, nồng cay nên dùng lá lốt trong các món ăn để khử mùi tanh và chống được dị ứng. Ngồi các món có vị tanh thì lá lốt cũng dùng ăn kèm với các loại thịt nhằm tăng hương vị của món ăn [5], [6], [21].

Ngoài ra, lá lốt và thân cây đều là vị thuốc, thường dùng tươi hay phơi khơ. Lá lốt có vị cay thơm, tính ấm, làm tan hơi lạnh giúp tiêu hóa tốt, trị bệnh tê thấp, đau cơ, đau thắt ngực, nôn mửa, nhức đầu, bụng đầy hơi, đau bụng, đau nhức răng [21],…

1.3. Hoạt tính sinh học

1.3.1. Hoạt tính kháng khuẩn

Năm 2011 Huỳnh Kim Diệu và Nguyễn Thành Văn đã thu thập 30 mẫu là lốt từ các tỉnh Đồng Tháp, Cần Thơ để thực hiện thử hoạt tính kháng khuẩn trên 8 chủng vi khuẩn gồm Salmonella spp, Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli Aeromonas hydrophila, Edwardsiella ictaluri tarda và Edwardsiella ictaluri. Kết quả là khả năng kháng khuẩn trên hầu hết các dòng vi khuẩn trên đều giống nhau và cho kết quả kháng khuẩn yếu. chỉ duy nhất tác động rất mạnh trên chủng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri [22].

1.3.2. Hoạt tính kháng viêm

Năm 2007 Wibool Ridtitid và các cộng sự chiết xuất cao methanol từ lá của cây lá lốt và nghiên cứu về hoạt động chống viêm và hạ sốt đối với chứng phù chân do carrageenan gây ra và chứng nhiệt miệt do men bia ở chuột. Kết quả cho thấy chiết xuất ở liều thử nghiệm tạo ra hoạt tính chống viêm đáng kể sau 3 giờ với khả năng ức chế phù chân là 8,6% (P <0,05), 18,6% (P <0,01) và 24,7% (P <0,01) tương ứng, so với thuốc tham chiếu aspirin 200 mg / kg p.o. với mức ức chế là 33,3% (P <0,01). Chỉ chiết xuất ở liều 200 mg / kg p.o. cho thấy sự ức chế đáng kể chứng phù chân chuột do carrageenan gây ra bắt đầu từ 2 giờ là 11,8% (P <0,01) và ở 3, 4 và 5 giờ là 24,7% (P <0,01), 14,1% (P <0,01) và 11,9% (P <0,01), tương ứng, trong khi thuốc tham chiếu aspirin 200 mg / kg p.o. thể hiện sự ức chế phù nề

đáng kể bắt đầu từ 1 giờ là 15,6% (P <0,05) và ở 2, 3, 4 và 5 giờ là 31,8% [23]. ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg bae

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 23<div class="page_container" data-page="23">

1.3.3. Hoạt tính kháng oxi hố

Trong nghiên cứu của Hồ Bá Vương trong và Nguyễn Xuân Duy “Hoạt tính chống oxi hóa và ức chế enzyme polyphenoloxidase của một số loại thực vật ăn được ở Việt Nam’” đã xác định được dịch chiết của lá lốt với dung mơi là nước có hàm lượng polyphenol là 39.3 mg GAE/g chất khơ. Phân tích chỉ ra rằng khả năng khử gốc tự do DPPH của lá lốt thấp hơn so với lá khoai lang và cao hơn lá nhàu với giá trị IC50 lần lượt là 13.52, 10.08 và 14.08 µg chất khơ/ml. Năng lực khử cũng là một phép phân tích nhằm đánh giá khả năng chống oxi hóa trong vitro. Kết quả cho thấy lá lốt (IC50 = 16,45 µg chất khơ/ml) có hoạt tính chống oxi hóa cao hơn lá nhàu (IC50 = 43,84 µg chất khô/ml) và lá khoai lang (IC50 = 112,99 µg chất khô/ml) [24].

1.4. Sàng lọc ảo in silico

Hiện nay, với những thành tựu vượt bậc trong khoa học máy tính và những hiểu biết sâu hơn trong lĩnh vực sinh học phân tử, nhiều lĩnh vực nghiên cứu dựa trên sự trợ giúp của máy tính đã được hình thành và cho kết quả ứng dụng cao. Có một phương pháp được nhiều khoa học áp dụng cho quá trình nghiên cứu và phát triển thuốc trong những năn gần đây là

phương pháp sàng lọc ảo in silico. Phương pháp này với sự hỗ trợ bởi máy tính được ứng

dụng vào nhiều khâu của quá trình nghiên cứu và phát triển thuốc, từ khâu tìm kiếm các hợp chất hóa học có tác dụng sinh học, đến tối ưu hóa cấu trúc các hợp chất này nhằm tăng hoạt tính sinh học, giảm độc tính, tăng các tính chất dược động học của thuốc, đến các khâu nghiên cứu tiền lâm sàng và lâm sàng.

So với các phương pháp thực nghiệm truyền thống, sàng lọc ảo có ưu thế giúp thiết kế những phân tử thuốc mới với những ưu thế vượt trội, giải thích bản chất phân tử của các tương tác thuốc, điều mà khơng một thí nghiệm nào có khả năng làm được. Ngồi ra chúng cho phép dự đốn hoạt tính sinh học sử dụng các mơ hình tốn học, nghiên cứu dự đoán cơ chế tác dụng, cơ chế gây độc của các hợp chất. Các phương pháp này giúp tiết kiệm đáng kể cả thời gian và tiền bạc trong việc phát triển một thuốc mới.

1.5. Phương pháp docking phân tử

Docking phân tử (Molecular Docking Model) là kĩ thuật mơ hình hóa nhằm dự đốn vị trí và cấu hình thuận lợi mà phân tử cơ chất có thể gắn kết trên phân tử protein. Phân tử cơ chất được cho dịch chuyển trong không gian bao quanh phân tử protein để tìm vị trí có năng lượng gắn kết âm nhất sử dụng các hàm đánh giá và phương pháp tìm kiếm cực trị tồn cục khác nhau. Docking có vai trị rất quan trọng trong việc dự đốn ái lực và hoạt tính của các ngun tử trong công thức của thuốc đối với protein, từ đó dự đốn khả năng hoạt hóa hoặc ức chế một protein chức năng. Bên cạnh đó docking cũng giúp dự đốn tâm hoạt động và vị trí, cấu hình thuận lợi của cơ chất tham gia phản ứng khi xem xét cơ chế xúc tác của enzyme (cũng là một loại protein chức năng). Docking trở thành bài toán tối ưu, tìm vị trí và cấu hình phù hợp nhất của một cơ chất gắn kết lên protein. Về mặt nhiệt động lực học, mục tiêu của docking là tìm ra cấu hình mà năng lượng tự do của tồn hệ là thấp nhất. Để tìm cấu hình phù hợp nhất cần phải liên hệ khơng gian cấu hình với các giá trị số đánh giá được khả năng gắn kết của cơ chất lên protein rồi mới áp dụng được các thuật tốn tìm kiếm.

AutoDock 4. là hỗ trợ docking đối với các hợp chất cần phân tích.

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 24<div class="page_container" data-page="24">

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 25<div class="page_container" data-page="25">

CHƯƠNG 2. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1. Mục tiêu đề tài

− Phân lập và xác định cấu trúc của hợp chất có trong cây lá lốt; − Xác định hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết cây lá lốt.

2.2. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu

− Cây lá lốt được thu hái từ huyện Tân Hiệp, tỉnh Kiên Giang

2.3. Nội dung nghiên cứu

− Thu hái cây lá lốt và chiết với dung môi cồn 96o thu được cao tổng; − Phân bố cao tổng thành các cao phân đoạn: Hexan, Ety axetat, Methanol; − Đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật của dịch chiết cây lá lốt;

− Phân lập hợp chất của các cao phân đoạn có hoạt tính tốt; − Xác định cấu trúc hợp chất phân lập được;

− Đánh giá hoạt tính kháng sinh của các hợp chất đã phân lập được. − Docking phân tử hai hợp chất phân lập được với tế bào 2VF5:PDB − ADMET của hai hợp chất phân lập được

2.3.1. Nghiên cứu lý thuyết

− Thu thập tài liều trong và ngoài nước liên quan đến đề tài − Trao đổi với giảng viên hướng dẫn

2.4. Phương pháp nghiên cứu

2.4.1. Phương pháp cô lập và tinh chế hợp chất hữu cơ

2.4.1.1. Phương pháp chiết ngấm dầm

Ngâm bột cây trong bình chứa có nắp đậy. Rót dung mơi vào bình chứa sao cho dung môi ngập trên bề mặt bột cậy , khuấy đều đểu tăng hiệu quả tiếp xúc, sau đó để n ở nhiệt độ phịng, dung mơi sẽ ngấm dần vào nguyên liệu và hòa tan các chất tự nhiên. Sau 1 hoặc 2 ngày , dung môi trong bình được lấy ra và cho thêm dung môi mới vào. Đây được gọi là phương pháp chiết ngấm dầm

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 26<div class="page_container" data-page="26">

Hình 2.1. Ngâm dầm cây lá lốt với dung môi ethanol 96o

2.4.1.2. Phương pháp sắc ký lớp mỏng

Sắc ký lớp mỏng (SKLM) là kỹ thuật phân bố rắn-lỏng: trong đó pha động là chất lỏng được cho đi ngang qua một chất hấp phụ trơ như silicagel hoặc oxyd alumin. Chất hấp phụ này được tráng thành một lớp mỏng, đều, phủ lên một nền phẳng như tấm kiếng, tấm nhôm hoặc tấm plastic. Do chất hấp phụ được tráng thành lớp mỏng nên phương pháp này được gọi là SKLM.

Muốn thực hiện sắc ký, người ta cho mẫu phân tích hịa tan hồn tồn vào trong một dung mơi dễ bay hơi, dùng vi quản để chấm một ít dung dịch mẫu, chấm 1 vết nhỏ gọn lên lớp mỏng. Sấy nhẹ để đuổi phần dung mơi hịa tan mẩu, như vậy mẫu chỉ cịn là dạng bột khơ bám trên lớp mỏng. Đặt lớp mỏng theo chiều thẳng đứng vào trong một bình có dung mơi thích hợp, dung mơi sẽ bị lực mao quản hút lên phía trên, mẫu chất sẽ được phân chia thành những vết riêng biệt. Các vết sẽ được phát hiện bằng phương pháp vật lý như nhìn bằng mắt, soi dưới đèn tử ngoại…hoặc bằng phương pháp hóa học (phun lên bảng mỏng các loại dung mơi hay thuốc thử..).

Hình 2.2. Phương pháp sắc ký lớp mỏng

Mục tiêu của việc sử dụng sắc kí lớp mỏng giúp ta tham dị hệ dung mơi. Từ đó chọn được hệ dung mơi thích hợp. Đồng thơi cũng là phương pháp để đối chưng với chất ban đầu.

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 27<div class="page_container" data-page="27">

2.4.1.3. Phương pháp sắc ký cột

Sắc ký cột là phương pháp tách chất dựa vào sự hấp phụ của chất phân tích với chất hấp phụ và được thực hiện trên cột với chất hấp phụ là pha tĩnh, dung môi rửa cột là pha động chảy qua chất hấp phụ.

Tuỳ theo khả năng hấp phụ và khả năng hòa tan của hợp chất đối với dung môi rửa cột mà các hợp chất trong hỗn hợp được lấy ra lần lượt trước hoặc sau.

Pha tĩnh thường dùng trong sắc ký cột là silicagel, CaCO3 , than hoạt tính,, …Các chất này phải được tiêu chuẩn hóa theo quy định.

• Phương pháp tiến hành

Chuẩn bị cột

• Rửa sạch cột, tráng với Axeton và sấy khơ. • Cho một miếng bơng gịn vừa đủ vào cột. • Kẹp cột trên giá thẳng đứng

Nhồi cột: Sử dụng dung mơi thích hợp silicagel và cho vào cột Đưa chất phân tích vào cột:

• Cho chất phân tích hồ tan vào dung mơi và đưa vào cột

• Trộn hỗn chất cần phần tách với một lượng chất hấp phụ và đưa vào cột

Rửa cột: cho hệ dung môi giải ly chạy qua cột. 2.4.1.4. Phương pháp sắc ký lớp mỏng điều chế

Sắc ký lớp mỏng điều chế là phương pháp được sử dụng tương tác giữ hợp chất với TLC thông qua dung môi để tách một lượng nhỏ đơn chất (10 - 1000 mg) từ một hỗn hợp đơn giản chỉ gồm một vài chất.

❖ Các bước tiến hành sắc kí lớp mỏng điều chế − Đưa hỗn hợp cấu tứ đơn giản lên TLC − Chuẩn bị hệ dung môi phù hợp

− Tiến hành sắc ký lớp mỏng

− Tiến hành cạo phần silicagel mà tại đó đó tồn tại duy nhất chất cần phân tách.

− Sử dụng sắc kí côt thường để giải hấp chất cần phân tách trên silicagel.

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 28<div class="page_container" data-page="28">

Hình 2.3. Phương pháp sắc ký lớp mỏng điều chế 2.4.2. Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất

2.4.2.1. Phổ cộng hưởng từ hạt nhân

Theo thuyết cấu tạo nguyên tử, nguyên tử gồm có hạt nhân và lớp vỏ điện tử. Giả thiết rằng hạt nhân có đạng hình cầu có điện tích dương và mật độ điện tích phân bố đồng đều trên mặt cầu. Một số loại hạt nhân hoạt động bằng cách tự quay quanh trục của nó và vì hạt nhân mang điện tích dương nên chúng sẽ giống như những thanh nam châm nhỏ, vì vậy chúng sẽ tương tác với từ trường bên ngồi. Khơng phải tất cả các hạt nhân mà chỉ các hạt nhân có số spin lẻ (1H, 13C, ...) mới có đặc trưng này.

Khi mẫu chất khảo sát có chứa những hạt nhận này và được được đặt trong từ trường, Các hạt nhân này sẽ định hướng theo hướng của từ trường. Khi đó ta chiếu bức xạ điện từ có tần số thích hợp, lúc này sự hấp thụ năng lượng xảy ra và spin ở trang thái năng lượng thấp sẽ nhảy lên spin trạng thái năng lượng cao hiện tượng nhảy chuyển spin như thế gọi là cộng hưởng từ hạt nhân.

Do độ dịch chuyền hóa học của mỗi hạt nhân phụ thuộc vào cầu tạo hóa học và vào vị trí khơng gian của nó trong phân tử nên mỗi hạt nhân có hiệu ứng chắn khác nhau. chúng cho các tín hiệu khác nhau trên phổ 1H-NMR. Dựa vào các tín hiệu trên phổ đồ cùng với các kĩ thuậtt DEPT, COSY, HMBC, HSQC có thể xác định được số lượng proton và carbon và vị trí của chúng trong phân tử.

2.4.2.2. Thiết bị phân tích

Phổ 1H-NMR (500 MHz) và 13C-NMR (125 MHz) với các kỹ thuật DEPT, COSY, HMBC, HSQC được ghi trên máy BRUKER Avante 500 với chất chuẩn nội TMS tại Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam, số 18 Hồng Quốc Việt, quận Cầu Giấy, Hà Nội.

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 29<div class="page_container" data-page="29">

Phổ khối được ghi trên máy Agilent 1260 series single quadrupole LC/MS tại Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam.

2.4.3. Phương pháp định lượng kháng sinh vi pha loãng

Kỹ thuật kháng sinh đồ pha loãng là kỹ thuật kháng sinh đồ định lượng. Nó khơng chỉ trả lời được câu hỏi chủng vi khuẩn thử nghiệm nhạy cảm, đề kháng trung gian hay đề kháng với kháng sinh mà nó cịn cho biết chủng vi khuẩn nhạy cảm, đề kháng trung gian hay đề kháng với kháng sinh ở nồng độ kháng sinh nào.

− Bước 1: Chuẩn bị và bảo quản dung dịch kháng sinh − Bước 2: Chuẩn bị huyền dịch vi khuẩn

− Bước 3: Tiến hành thử nghiệm

Chuẩn bị đủ số lượng ống canh thang Mueller-Hinton 0,5 ml theo các nồng độ kháng sinh cần thử nghiệm. Thêm một ống canh thang không cấy vi khuẩn và khơng có kháng sinh để làm chứng vơ trùng cho môi trường và một ống canh thang cấy vi khuẩn nhưng không chứa kháng sinh để làm chứng cho sự phát triển của vi khuẩn.

Hút 0,5 ml dung dịch kháng sinh thử nghiệm chuyển vào ống chứa 0,5 ml canh thanh Mueller-Hinton, trộn đều rồi chuyển 0,5 ml hỗn dịch sang ống 0,5 ml canh thanh thứ 2, trộn đều rồi tiếp tục chuyển 0,5 ml hỗn dịch sang ống 0,5 ml canh thanh thứ 3. Cứ tiếp tục như vậy cho đến ống canh thanh cuối cùng thì hút bỏ 0,5 ml hỗn dịch của ống cuối cùng đi. Như vậy, nồng độ kháng sinh trong các ống canh thang được pha loãng giảm dần theo bậc 2.

Cho vào mỗi ống canh thang chứa kháng sinh 0,5 ml canh khuẩn 106 CFU/ml, một ống canh thang chỉ có 0,5 ml canh khuẩn 106 CFU/ml và một ống canh thang không bổ sung canh khuẩn. Nồng độ vi khuẩn trong mỗi ống còn 5 x 105 CFU/ml.

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 30<div class="page_container" data-page="30">

Hình 2.4. Phương pháp định lượng kháng sinh vi pha lỗng

Xác định MIC: Tính từ bên phải qua, giếng chứa mẫu thử tại nồng độ nào trong (khơng

cịn bị đục) đầu tiên chính là nồng độ ức chế tối thiểu (MIC), với điều kiện chứng dương phải trong (do khơng có mơi trường nên vi khuẩn không phát triển được) và chứng âm phải đục (do không chứa chất thử ức chế vi khuẩn). Sự sai lệch giá trị MIC có thể chấp nhận được ở 2 giếng kế tiếp nhau, khi giá trị MIC đọc được ở 3 giếng kế tiếp nhau ta phải thực hiện lại thí nghiệm.

Xác định MBC: lấy dịch từ những giếng trong tính từ bên phải qua xung quanh giá trị

MIC, thường sẽ lấy 1 mẫu sau giá trị MIC (mẫu không ức chế được khuẩn) và 2 mẫu trước giá trị MIC (mẫu ức chế được khuẩn), sau đó cấy lần lượt các vi khuẩn của từng giếng trên đĩa petri đã có sẵn mơi trường, ni cấy trong vòng 18-24h. Nồng độ nhỏ nhất mà tại đó vi khuẩn khơng mọc được xác định là nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC).

2.4.4. Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng viêm

Gốc tự do nitric oxide (•NO) được sản sinh ở nhiều loại tế bào khác nhau. Dạng •NO xuất tiết có mặt ở các tế bào như đại thực bào, nguyên bào sợi hay tế bào gan thường được sản sinh với lượng lớn khi xuất hiện các đáp ứng viêm. Vì vậy, việc xác

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 31<div class="page_container" data-page="31">

định khả năng kháng viêm được đánh giá thơng qua phương pháp xác định hoạt tính ức chế sản sinh nitric oxit (NO) trên tế bào RAW264.7.

Phương pháp thực hiện: Tế bào RAW 264.7 được đưa vào 96 giếng ở nồng độ 1x104 tb/giếng và nuôi trong tủ ấm ở 37 ºC và 5 % CO2 trong 24 giờ. Tiếp theo, môi trường nuôi cấy được loại bỏ, thay bằng mơi trường DMEM khơng có FBS trong 3 giờ. Tế bào sau đó được ủ mẫu nghiên cứu ở các nồng độ khác nhau trong 2 giờ trước khi được kích thích sản sinh yếu tố NO bằng LPS (1 μg/mL) trong 24 giờ. Một số giếng không được ủ mẫu mà chỉ sử dụng dung dịch pha mẫu được coi là đối chứng âm. Trong khi đối chứng dương được sử dụng là NG - Methyl-Larginine acetate (L-NMMA) (Sigma). Nitrite (NO2- ), được xem là chỉ thị cho việc tạo NO, sẽ được xác định nhờ bộ Griess Reagent System (Promega Cooperation, WI, USA). Cụ thể là. 100 μl môi trường nuôi tế bào (ủ mẫu) được chuyển sang đĩa 96 mới và được thêm vào 100 μl Griess reagent: 50 μl của 1% (w/v) sulfanilamide trong 5% (v/v) phosphoric acid và 50 μl 0,1% (w/v) N-1- naphthylethylenediamine dihydrochloride ph trong nước. Hỗn hợp này được ủ tiếp ở nhiệt độ phòng trong 10 phút và hàm lượng nitrite sẽ được đo bằng máy microplate reader ở bước sóng 540 nm. Mơi trường DMEM không FBS được sử dụng như giếng trắng (blank). Hàm lượng nitrite của từng mẫu thí nghiệm được xác định nhờ vào đường cong hàm lượng chuẩn NaNO2 và được so sánh % với mẫu chứng âm (LPS).

Khả năng ức chế sản sinh NO của mẫu được xác định nhờ công thức: % Ức chế = 100% - [hàm lượng NOsample/hàm lượng NOLPS] * 100

2.4.5. Phương pháp Docking phân tử trên phần mềm Autodock

Mơ hình tính tốn docking phân tử in silico ding model được nhóm nghiên cứu chúng

tơi tham khảo tài liệu [26-32]và mơ tả thành một chương trình tổng quát trong sơ đồ Hình 3.6. Đánh giá hoạt tính kháng viêm dựa trên tài liệu [31]và thực hiện trên mục tiêu đích là receptor, một enzyme có tên 2VF5: PDB, được thu nhận từ ngân hàng dữ liệu protein. Để việc tính tốn có giá trị đối với chất nhận hay receptor phải xác định được tâm hoạt tính[4]. Đối với chất nhận enzyme, 2VF5 này có 1 tâm hoạt tính là chuỗi X và tâm hoạt tính tương ứng là(X=26.57, Y=22.69, Z=8.11). Tính tốn với một ligand đã xác định chí có tâm hoạt tính của ligand C tồn tại trong enzyme đích 2VF5 là có năng lượng tự do Gibbs, ΔGo ở 25oC của 1 ligand docking hay còn gọi là pose với 2VF5 là âm nhất tương ứng với tương tác bền nhất. Để đánh giá giá trị của phương pháp phải xem xét các pose ligand có được liên kết đến cùng một túi hoạt động của enzyme hay còn gọi là liên kết đến emzyme pocket hay còn gọi

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 32<div class="page_container" data-page="32">

Hình 2.5. Quy trình docking của thuốc (ligand) đến DNA của protein

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 33<div class="page_container" data-page="33">

3.2. Xử lý nguyên liệu ban đầu

Cây lá lốt được thu hái và rửa để loại bỏ bụi bẩn, sau đó để khơ trong bóng râm tránh ánh nắng mặt trời trực tiếp

Cây lá lốt sau khi khô được xay nhỏ được đem đi ngâm với cồn 96o trong 3 ngày. Sau đó dịch ngâm được lấy ra bằng phương pháp lọc. Phần bã được tiếp tục ngâm với cồn 96o

trong 3 ngày. Lập lại quá trình này 3 lần tính từ lần đầu tiên ta thu được dịch chiết lá lốt. Cô quay dịch chiết lá lốt ở máy quay chân không ta thu được cao toàn phần (cao tổng).

− Khối lượng cây lá lốt tươi: 20kg − Khối lượng bột lá lốt khô: 3kg − Khối lượng cao tổng: 230g

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 34<div class="page_container" data-page="34">

Xay nhỏ

Lọc, cô quayNgâm tĩnhEthanol

230 g cao tổng lá lốt

Hình 3.2. Quy trình xử lý nguyên liệu ban đầu 3.3. Phân lập và tinh chế hợp chất từ cây lá lốt

3.3.1. Phân chia cao tổng thành cao phân đoạn

Cao toàn phần cây lá lốt được tiến hành chiết rắn-lỏng và được giải ly với lần lượt các dung môi Hexan, Ety axetat, Methanol. Các phân đoạn ứng với các dung môi này được đem đi cô quay ở máy cô quay chân không để thu được cao phân đoạn.

230 g cao tổng lá lốt

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 35<div class="page_container" data-page="35">

− Khối lượng cao là 50 g.

Cao EA được tiến hành sắc kí cột pha thuận với hệ dung môi giải ly Hexan : Ety axetat : methanol với tỉ lệ lần lượt là 20:1:0.2, 16:1:0.2, 10:1:0.2, 4:1:0.2 và cuối cùng là methanol 100%.

Hình 3.4. Sắc kí lớp mỏng (TLC) của cao EA với các hệ dung môi

Dung dịch giải ly được chứa trong các hũ bi thuỷ tinh. Dung dịch của giải ly này được gom lại với nhau bằng cách sử dụng sắc lý lớp mỏng (TLC). Những lọ cho các vết giống nhau trên TLC được gom chung lại. Sắc kí lớp mỏng TLC ở đây hiện hình bằng thuốc thử 2% H2SO4/EtOH 50%. Kết quả sắc kí cột trên cao Ea của cây lá lốt thu được 18 phân đoạn kí hiệu lần lượt từ PLE A1-PLEA18.

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 36<div class="page_container" data-page="36">

(0.1838 g)PLEA2(4.6853 g)

PLEA3(5.8085 g)

PLEA4(10.6518 g)

PLEA11(0.1963 g)

PLEA12(0.5861 g)

PLEA9(9.8034 g)

PLEA13(0.6176 g)

PLEA14(2.87 g)

PLEA8(4.6964 g)

PLEA7(3.4709 g)

PLEA5(1.2003 g)

PLEA6(3.1538 g)

PLEA15(0.1925 g)

PLEA16(0.8486 g)

PLEA17(0.6993 g)

PLEA18(0.4899 g)

PLEA10(0.0124 g)

Hình 3.5. Quy trình phân lập cao Ea

Hình 3.6. TLC của các phân đoạn được phân lập từ cao Ea

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>Trang 37<div class="page_container" data-page="37">

3.3.3. Khảo sát phân đoạn PLEA8

Sau khi triển khai sắc kí cột trên cao phân đoạn Ea và thu được 18 phân đoạn nhỏ. Sử dụng TLC ta thấy PLEA8 có vết to, rõ, khối lượng lớn nên ta tiến hành hành khảo sát TLC để tìm hệ dung dung mơi thích hợp và tiến hành sắc kí cột trên hệ dung mơi thích hợp.

− Khối lượng PLEA8 là 4.6964 g.

Hệ dung môi giải ly là ete dầu hỏa : ethyl acetate : methanol với tỉ lệ lần lượt là 15:1:0.2, 12:1:0.2 và cuối cùng là methanol 100%.

Hình 3.7. TLC của phân đoạn PLEA8 với các hệ dung môi

Dung dịch giải ly được chứa trong các hũ bi thuỷ tinh. Dung dịch của giải ly này được gom lại với nhau bằng cách sử dụng sắc lý lớp mỏng (TLC). Những lọ cho các vết giống nhau trên TLC được gom chung lại. Sắc kí lớp mỏng TLC ở đây hiện hình bằng thuốc thử 2% H2SO4/EtOH 50%. Sau khi triển khai sắc kí cột trên phân đoạn PLEA8 của cây lá lốt thu được 17 phân đoạn kí hiệu lần lượt từ PLEA81-PLEA817.

74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM74Thursday, June 13, 20249:47:37 PM9:47:37 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM74Thursday, June 13, 20249:47:38 PM9:47:38 PM

74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM74Thursday, June 13, 20249:47:39 PM9:47:39 PM

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

</div>

nghiên cứu thành phần hoá học và tác dụng ức vi sinh vật của cây lá lốt

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP.HCM

<b>KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC </b>

<b>KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP </b>

<b>NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG ỨC VI SINH VẬT CỦA CÂY LÁ </b>

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

<b>KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP </b>

<b>NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG ỨC VI SINH VẬT CỦA CÂY LÁ </b>

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

<b>NHIỆM VỤ KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP </b>

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

<b>NHẬN XÉT CỦA GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN</b>

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

DANH MỤC BẢNG BIỂU

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

<b>CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN </b>

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

<b>CHƯƠNG 2. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU </b>

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

74ket pua eohg tae gico dat gico ruhg tai eohg ty traeh hhiem huu hah mot thahh vieh lam hghieu dohg baeThursday, June 13, 2024

Tài liệu liên quan

Tài liệu bạn tìm kiếm đã sẵn sàng tải về