KỸ THUẬT DI TRUYỀN - PHẦN 2 ppt

13
PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯNG
NUCLEIC ACID
1. ĐIỆN DI
- Gel agarose
- Gel polyacrylamide
2. QUANG PHỔ KẾ : Đo mật độ quang (OD – Optical
density)
14
ĐIỆN DI DNA TRÊN GEL AGAROSE
- Điện di theo phương nằm ngang
- Giá thể là gel agarose
- Phát hiện với màu nhuộm
ethidium bromide, … phát huỳnh
quang dưới đèn tử ngoại
- Khả năng phân giải trung bình,
phụ thuộc vào nhiều yếu tố, đặc
biệt là nồng độ agarose
15
Ñ
IEÄN DI TRONG TR
Ö
Ô
Ø
NG XUNG (PULSED-FIELD
ELECTROPHORESIS)
16
ĐIỆN DI TRÊN GEL POLYACRYLAMIDE
- Điện di theo phương thẳng đứng
- Giá thể là gel polyacrylamide
- Phát hiện với màu nhuộm

Coomassie blue, nhuộm bạc, phát
hiện trên phim tín hiệu đồng vò
phóng xạ
- Khả năng phân giải cao, phân
biệt được những trình tự chỉ cách
nhau 1 nucleotide
17
ÑIEÄN DI PROTEIN TREÂN GEL
POLYACRYLAMIDE
18
ÑIE
Ä
N DI 2 CHIE
À
U PROTEIN TREÂN GEL
POLYACRYLAMIDE
19
KỸ THUẬT RFLP (RESTRICTION FRAGMENT
LENGTH POLYMORPHISM – ĐA HÌNH KÍCH
THƯỚC CÁC TRÌNH TỰ CẮT GIỚI HẠN
20
VNTR (VARIABLE NUMBER OF
TANDEM REPEATS)
Phân tích VNTR để nhận biết tính đa hình di truyền ở cá
thể. Sử dụng mẫu dò kết hợp với RE để phân tích VNTR
21
Ư
ÙNG DU
Ï
NG KỸ

THUẬT ĐIỆN DI
TRONG NGHIÊN CỨU
PHẢ HỆ
Ví dụ về việc sử dụng PCR và điện
di trong xác đònh phả hệ.
Đây là phả hệ của Sa hoàng, vợ, 3
con, bác só gia đình và các người
hầu
22
KỸ THUẬT “ELECTROPHORETIC MOBILITY SHIFT
ASSAY : PHÁT HIỆN NHÂN TỐ TRANS
Các phân đọan protein được ủ với một đoạn DNA đã được đánh dấu phóng xạ và
có mang một trình tự CIS. Các tổ hợp trên sau đó sẽ được phân tích bằng điện di
không biến tính (đối với protein). Các phân đọan DNA không gắn protein sẽ di
chuyển xa hơn các phân đọan trong đó trình tự CIS liên kết với protein (7, 8 trong
hình). Như vậy các phân đọan protein tương ứng với các tổ hợp 7 và 8 sẽ được xác
đònh.
23
CÂU HỎI - PHẦN 2
1. Các điểm khác biệt trong phương pháp tiến hành điện di trên gel agarose và gel
polyacrylamide
2. Các ứng dụng của điện di trên gel agarose, điện di trên gel polyacrylamide
3. Phương pháp đo mật độ quang (OD) :
- Nguyên lý và cách xác đònh hàm lượng nucleic acid
- Nguyên lý và cách xác đònh độ sạch của nucleic acid
4. Nguyên lý và cách tiến hành phương pháp RFLP (Restriction Fragment Length
Polymorphism)
5. Nguyên lý và cách tiến hành phương pháp VNTR (Variable Number of Tandem
Repeats)
6. Nguyên lý và cách tiến hành phương pháp Electrophoretic Mobility Shift Assay