xác định axit hữu cơ từ lá, vỏ quả bứa bằng sắc ký lỏng cao áp

XÁC Đ NH AXIT H U C T LÁ, V QU B A B NGỊ Ữ Ơ Ừ Ỏ Ả Ứ Ằ
S C KÝ L NG CAO ÁPẮ Ỏ
DETERMINATION OF ORGANIC ACIDS FROM LEAVES, RIND FRUITS
OF GARCINIA OBLONGIFOLIA CHAMP. EX BENTH. BY HIGH-
PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY
ĐÀO HÙNG C NGƯỜ
Tr ng Đ i h c S ph m, Đ i h c Đà N ngườ ạ ọ ư ạ ạ ọ ẵ
Đ NG QUANG VINHẶ
HV Cao h c khoá 2004-2007ọ
TÓM T T Ắ
Axit h u c trong lá, v qu b a khô đ c xác đ nh b ng ph ng pháp s c ký l ng cao áp.ữ ơ ỏ ả ứ ượ ị ằ ươ ắ ỏ
Lá t i và v qu b a khô đ c chi t v i n c nhi t đ 127 ươ ỏ ả ứ ượ ế ớ ướ ở ệ ộ
0
C th i gian 30-60 phút d i ápờ ướ
su t 0,15 MPa. Đ ng th i, v qu b a khô đ c chi t b ng dung môi (axeton và metanol)ấ ồ ờ ỏ ả ứ ượ ế ằ
trong b chi t soxhlet nhi t đ 75 ộ ế ở ệ ộ
0
C trong th i gian 8 gi . M u đ c b m vào máy s c kíờ ờ ẫ ượ ơ ắ
l ng cao áp cùng v i axit photphoric 0,01 M và metanol v i t c đ dòng là 0,7 ml/phút sỏ ớ ớ ố ộ ử
d ng đetect 210 nm. Axit h u c ch y u trong lá, v qu b a khô đ c tìm th y là axit (-)ụ ơ ữ ơ ủ ế ỏ ả ứ ượ ấ
hyđroxy xitric hàm l ng l n l t là 2,863 và 15,221 %. Ph n axit còn l i trong lá, v qu b aượ ầ ượ ầ ạ ỏ ả ứ
là l ng nh axit xitric. Đây là k t qu đ u tiên xác đ nh thành ph n các axit h u c t b aượ ỏ ế ả ầ ị ầ ữ ơ ừ ứ
(Garcinia oblongifolia Champ. ex Benth.).
ABSTRACT
Organic acids in fresh leaves and dried rinds fruits of Garcinia oblongifolia Champ. ex Benth
were determined by high-performance liquid chromatography. Fresh leaves and dried rinds
fruits were extracted with water at 127 °C for 30-60 min under 0,15 MPa pressure. Also, dried
rinds were extracted with solvents (acetone and methanol) using a Soxhlet extractor at 75 °C
for 8 h each. The samples were injected to HPLC under gradient elution with 0.01 M
phosphoric acid and methanol with a flow rate of 0.7 mL/min using UV detection at 210 nm.
The major organic acid was found to be (-)-hydroxycitric acid present in leaves and rinds fruits

to the extent of 2.863 and 15.221%, respectively. Citric acids is present in leaves and rinds
fruits in minor quantities. This is the first report on the composition of organic acids from
Garcinia oblongifolia Champ. ex Benth.
1. M đ uở ầ
Trong m t vài năm g n đây, các c u t có kh i l ng nh và ph c t p đ c chi tộ ầ ấ ử ố ượ ỏ ứ ạ ượ ế
t nhi u loài b a (ừ ề ứ Garcinia Cowa, Garcinia cambogia, Garcinia indica, Garcinia
antroViridis) trong đó có axit (-)-hyđroxy xitric (HCA; 1,2-di hydroxy propan-1,2,3 tri
cacboxylic axit; hình 1), lacton c a (-) axit hydroxy citric (hình 1)) có tính sinh h c lý thú đãủ ọ
gây chú ý đ i v i các nhà hoá sinh các bác s chuyên khoa s c kho . Đó là kh năng đi uố ớ ỹ ứ ẻ ả ề
ch nh quá trình t ng h p axit béo, s hình thành lipit, s ngon mi ng, và gi m cân. Đ ngỉ ổ ợ ự ự ệ ả ồ
phân c a (-)-HCA đã góp ph n l n trong lĩnh v c d c h c nh tác nhân có vai trò quanủ ầ ớ ự ượ ọ ư
tr ng trong m c đích gi m cân, b o v tim m ch,ọ ụ ả ả ệ ạ
hi u ch nh tr ng thái b t bình th ng c a các lipid, vàệ ỉ ạ ấ ườ ủ
kh năng ch u đ ng trong luy n t p th thao [3] [4] [5]ả ị ự ệ ậ ể
[6]. V qu b a có tính săn da và h i đ ng, mát, h iỏ ả ứ ơ ắ ơ
đ c, có tác d ng tiêu viêm, h nhi t, làm săn da, hànộ ụ ạ ệ
v t th ng; tr : Loét d dày, loét tá tràng; Viêm d dàyế ươ ị ạ ạ
ru t, kém tiêu hoá; Viêm mi ng, b nh c n răng; Ho raộ ệ ệ ặ
máu. Dùng ngoài tr b ng, m n nh t, sâu qu ng,ị ỏ ụ ọ ả
eczema, d ng m n ng a, rút các v t đ n đâm vàoị ứ ẩ ứ ế ạ
COOHC
H
HO
COOH
HO
C
COOHCH
H
COOHC
H

COOH
HO
C
CH
H
C=O
O
H×nh 1: CÊu tróc cña (-) axit hydroxy citric
vµ lacton cña (-) axit hydroxy citric
l p ặ
l i 01 ạ
l nầ
10 g m u (c t nh ) + 100 mL n cẫ ắ ỏ ướ
N i áp su t 0,15 MPa, 30 phútồ ấ
L c b ng v i muslinọ ằ ả
Tr n l n d ch 02 l n chi t + 4g than ộ ẫ ị ầ ế
ho t tính: ngâm trong n c m 30'ạ ướ ấ
L c b ng gi y l c, than ho t tính ọ ằ ấ ọ ạ
đ c r a 02 l n v i 15 mL n c ượ ử ầ ớ ướ
và l c l i n c r aọ ạ ướ ử
Tr n l n d ch l c và r a, cô đ t ộ ẫ ị ọ ử ặ
đ n 20mL, x lý v i 100mL etanol ế ử ớ
đ 15 phút đ k t t a h t pectin.ể ể ế ủ ế
Ly tâm 10 phút, tách ph n d ch n i ầ ị ổ
và k t t a riêng. Ph n k t t a r a ế ủ ầ ế ủ ử
02 l n v i 20mL etanol và ly tâm đ ầ ớ ể
thu h i h t axit.ồ ế
Tr n các d ch n i, cô đ c đ n th ộ ị ổ ặ ế ể
tích 50 mL và l u gi 4ư ữ ở
0

C đ n khi ế
s d ng (chu n đ , ch y HPLC, ử ụ ẩ ộ ạ
IR).
25 g m u+axeton ho c etanol (150 mL)ẫ ặ
Chi t Soxhlet 75 ế ở
0
C trong 8 giờ
L c b ng gi y l c và cô đ cọ ằ ấ ọ ặ
Etanol và axeton chiêt hòa tan trong
20mL n c + 4g than ho t tínhướ ạ
Ngâm trong n c m 30 phút và l c ướ ấ ọ
b ng gi y l c, than ho t tính đ c r a ằ ấ ọ ạ ượ ử
02 l n v i 10 mL n c.ầ ớ ướ
D ch chi t góp chung thành 50 mLị ế
(chu n đ , ch y HPLC, IR)ẩ ộ ạ
l p ặ
l i 01 ạ
l nầ
10 g m u + 150 mL n cẫ ướ
N i áp su t 0,15 MPa, 60 phútồ ấ
L c b ng v i muslinọ ằ ả
Tr n l n d ch 02 l n chi t + 4g than ộ ẫ ị ầ ế
ho t tính: ngâm trong n c m 30'ạ ướ ấ
L c b ng gi y l c, than ho t tính ọ ằ ấ ọ ạ
đ c r a 02 l n v i 15 mL n c ượ ử ầ ớ ướ
và l c l i n c r aọ ạ ướ ử
Tr n l n d ch l c và r a, cô đ t ộ ẫ ị ọ ử ặ
đ n 50mL, x lý v i 100mL etanol ế ử ớ
đ 15 phút đ k t t a h t pectin.ể ể ế ủ ế
Ly tâm 10 phút, tách ph n d ch n i ầ ị ổ

và k t t a riêng. Ph n k t t a r a ế ủ ầ ế ủ ử
02 l n v i 20mL etanol và ly tâm đ ầ ớ ể
thu h i h t axit.ồ ế
Tr n các d ch n i, cô đ c đ n th ộ ị ổ ặ ế ể
tích 50 mL và l u gi 4ư ữ ở
0
C đ n khi ế
s d ng (chu n đ , ch y HPLC, ử ụ ẩ ộ ạ
IR).
th t; Lá b a có v chua th ng đ c dùng thái nh n u canh chua; H t có áo h t chua, ănị ứ ị ườ ượ ỏ ấ ạ ạ
đ c, cũng dùng n u canh chua. Nh a b a dùng tr b ng ượ ấ ự ứ ị ỏ [1]. Các nghiên c u chi t táchứ ế
ngu n HCA ch th c hi n trên các loài b a c a n Đ . Vì v y, s khám phá axit h u cồ ỉ ự ệ ứ ủ Ấ ộ ậ ự ữ ơ
trong cây b a t i Vi t Nam là h t s c c n thi t, cây b a có tên khoa h c là Garciniaứ ạ ệ ế ứ ầ ế ứ ọ
oblongifolia Champ. ex Benth., thu c h B a (h măng c t) - Clusiaceae.ộ ọ ứ ọ ụ
Bài báo này trình bày ph ng pháp chi t tách, xác đ nh thành ph n axit h u c chínhươ ế ị ầ ữ ơ
có trong lá, v qu b a và các thông s v t lý khác.ỏ ả ứ ố ậ
2. Nguyên li u và ph ng pháp nghiên c uệ ươ ứ
2.1. Nguyên li u ệ
Lá, v qu c a cây b a (Garcinia oblongifolia Champ. ex Benth.) t i xã Hòa Liên,ỏ ả ủ ứ ạ
huy n Hòa Vang, TP. Đà N ng và t thành ph H Chí Minh.ệ ẵ ừ ố ồ
Nguyên li u nghiên c u lá, v qu b a đ c chu n b theo s đ ph n 2.2.1. ệ ứ ỏ ả ứ ượ ẩ ị ơ ồ ở ầ
2.2. Ph ng pháp nghiên c uươ ứ
2.2.1. S đ nghiên c uơ ồ ứ
Lá b a:ứ lo i b lá già, lá sâu, r a s ch, hong khô ti n hành đo đ m và th c hi nạ ỏ ử ạ ế ộ ẩ ự ệ
chi t tách axit theo s đ sau.ế ơ ồ
Qu b a:ả ứ lo i b qu h , d p, qu ch a chín, r a s ch, hong khô, tách b ph n ru tạ ỏ ả ư ậ ả ư ử ạ ỏ ầ ộ
qu , c t nh ti n hành xác đ nh đ m và s y khô nhi t đ 80ả ắ ỏ ế ị ộ ẩ ấ ở ệ ộ
0
C, xoay nh làm nguyênỏ
li u đ chi t tách axit theo 02 ph ng pháp s đ sau.ệ ể ế ươ ở ơ ồ

Lá: V qu khô: ỏ ả
Ph ng pháp 1:ươ Ph ng pháp 2:ươ
2.2.2. Ph ng pháp chi t táchươ ế
Ch ng ninh trong n i áp su t:ư ồ ấ Lá, v qu b a t i ho c khô đ c c t nh r iỏ ả ứ ươ ặ ượ ắ ỏ ồ
cho vào c c thu tinh 500 ml, ch ng ninh trong n i áp su t áp su t 0,15 MPa, nhi t đố ỷ ư ồ ấ ở ấ ệ ộ
127
o
C trong th i gian 30-60 phút và l p l i 02 l n đ chi t tách h t l ng axit h u c cóờ ặ ạ ầ ể ế ế ượ ữ ơ
trong m u v i dung môi là n c.ẫ ớ ướ
Chi t soxhlet:ế V qu b a khô xoay nh cho vào b chi t soxhlet ti n hành chi t ỏ ả ứ ỏ ộ ế ế ế ở
nhi t đ 75 ệ ộ
o
C, trong vòng 8 gi v i dung môi là axeton ho c methanol.ờ ớ ặ
2.2.3. Ph ng pháp tr ng l ngươ ọ ượ
Cân kho ng 10g lá, v qu B a t i cho vào c c thu tinh đã đ c s y khô và bi tả ỏ ả ứ ươ ố ỷ ượ ấ ế
kh i l ng chính xác. Cho c c thu tinh có ch a lá, v qu B a vào t s y và s y 80ố ượ ố ỷ ứ ỏ ả ứ ủ ấ ấ ở
o
C.
Sau khi s y kho ng 3 gi , ta l y c c ra cho vào bình hút m cho đ n khi c c thuấ ả ờ ấ ố ẩ ế ố ỷ
tinh ngu i h n thì ti n hành cân tính kh i l ng trên cân phân tích. Sau đó, c kho ng 30ộ ẳ ế ố ượ ứ ả
phút ta l i ti n hành quá trình trên m t l n cho đ n khi kh i l ng gi a hai l n cân liên ti pạ ế ộ ầ ế ố ượ ữ ầ ế
là không đ i hay có sai s kho ng 0.005g thì d ng quá trình s y.ổ ố ả ừ ấ
D a vào các k t qu thu đ c, ta tính đ c kh i l ng lá, v qu B a tr c và sauự ế ả ượ ượ ố ượ ỏ ả ứ ướ
khi s y. T đó, ta tính đ c đ m lá d a vào công th c sau:ấ ừ ượ ộ ẩ ự ứ

Trong đó: H: đ m (%); mộ ẩ
0
: kh i l ng lá ho c v qu t i tr c khi s y (g); mố ượ ặ ỏ ả ươ ướ ấ
1
:

kh i l ng lá ho c v qu sau khi s y (g).ố ượ ặ ỏ ả ấ
2.2.4. Ph ng pháp chu n đ ươ ẩ ộ [2]
Xác đ nh hàm l ng axit t ng s trong lá, v qu b a theo tiêu chu n TCVN 4589-ị ượ ổ ố ỏ ả ứ ẩ
88.
Nh NaOH 0,1N t buret xu ng, cho đ n khi d ch th có màu h ng nh t b n v ng.ỏ ừ ố ế ị ử ồ ạ ề ữ
100.
10
m
mm
H
−
=
Tính k t qu : Đ axit toàn ph n theo ph n trăm (Xế ả ộ ầ ầ
1
) tính b ng công th c:ằ ứ
trong đó: n: s ml NaOH 0,1N s d ng đ chu n đ V ml d ch th ;ố ử ụ ể ẩ ộ ị ử Vcd: thể
tích m u cô đ c;ẫ ặ P: tr ng l ng m u th , tính b ng gam; K: h s c a lo i axit, K =ọ ượ ẫ ử ằ ệ ố ủ ạ
0,006904.
2.2.5. Ph ng pháp xác đ nh c u trúc hoá h c b ng quang ph (IR)ươ ị ấ ọ ằ ổ
Các phân t luôn dao đ ng không ng ng. T n s dao đ ng c a các phân t phử ộ ừ ầ ố ộ ủ ử ụ
thu c vào h ng s l c c a liên k t và kh i l ng c a chúng, do đó các nhóm ch c khácộ ằ ố ự ủ ế ố ượ ủ ứ
nhau s có t n s h p th khác nhau n m trong vùng t 5000 – 200 cmẽ ầ ố ấ ụ ằ ừ
-1
. M i nhóm nguyênỗ
t (nhóm ch c) xác đ nh có t n s xác đ nh và không đ i trong b t kỳ h p ch t nào có ch aử ứ ị ầ ố ị ổ ấ ợ ấ ứ
nhóm nguyên t đó. Vì v y, khi phân tích trên quang ph h ng ngo i ta có th xác đ nhử ậ ổ ồ ạ ể ị
đ c các nhóm nguyên t mà ch t đem phân tích có đ c.ượ ử ấ ượ
2.2.6. Ph ng pháp s c ký l ng cao áp (HPLC) [3] [4]ươ ắ ỏ
Ch t chu n là (-)-Calcium threo-hydroxycitrate tribasic hydrate, cung c p b i hãngấ ẩ ấ ở
Sigma-Aldrich, công th c Cứ

12
H
10
Ca
3
O
16
.xH
2
O.
Chu n b HCA t do:ẩ ị ự Calcium threo-hydroxycitrate tribasic hydrate (50 mg) cho vào
c c 50-mL ch a 5.0 mL n c, và x lý v i 500 mg Dowex 50 [H+]. H n h p đ c khu yố ứ ướ ử ớ ỗ ợ ượ ấ
trong th i gian 10 phút s d ng kh y t . Tách l y ph n dung d ch, và nh a đ c r a v iờ ử ụ ấ ừ ấ ầ ị ự ượ ử ớ
n c có pH trung tính. N c r a và dung d ch d c tr n l n và làm thành 25 mL, khu yướ ướ ử ị ượ ộ ẫ ấ
tr n, và l c s d ng gi y l c. Chu n b 05 dung d ch chu n HCA có n ng đ thay đ i t 10ộ ọ ử ụ ấ ọ ẩ ị ị ẩ ồ ộ ổ ừ
ppm đ n 320 ppm. ế
Chu n b dung d ch chu n axit xitric cho HPLC:ẩ ị ị ẩ Dung d ch chu n axit xitricị ẩ
đ c chu n b riêng bi t có n ng đ t 2 đ n 30 ppm s d ng n c c t 3 l n c t.ượ ẩ ị ệ ồ ộ ừ ế ử ụ ướ ấ ầ ấ
HPLC phân tích: H th ng s c ký l ng cao áp đ c s d ng đ nghiên c u g mệ ố ắ ỏ ượ ử ụ ể ứ ồ
máy s c kí l ng cao áp hãng Knauer trang b v i b m lo i low pressure hãng Knauer, và l pắ ỏ ị ớ ơ ạ ắ
c t s c kí Knauer C18: 250 mm x 4,6 ID x 5ộ ắ µm. B t ng h p dung môi: quaternary LPộ ổ ợ
Gradient, hãng Knauer. Quá trình dò đ c th c hi n b ng đetect Knauer UV: kho ng b cượ ự ệ ằ ơ ả ướ
sóng 190-740 nm. Pha đ ng g m (A) metanol MeOH và (B) là axit photphoric 0,01 M v iộ ồ ớ
t c đ dòng 1,5 ml/m. Quá trình tách các pic t t khi ch t A trong B thay đ i t 10-30% trongố ộ ố ấ ổ ừ
th i gian 0-25 phút, 90% A trong B trong th i gian 30 phút, sau 5 phút cân b ng v i 90% A.ờ ờ ằ ớ
Ch t chu n và m u đ c l c qua Millipore l c 0,45 ấ ẩ ẫ ượ ọ ọ µm và tiêm vào HPLC.
Xây d ng đ ng chu n:ự ườ ẩ Ph ng pháp xây d ng đ ng chu n đ c th c hi nươ ự ườ ẩ ượ ự ệ
b ng cách d a vào k t qu phân tích m t chu i các m u HCA chu n. Năm m u dung d chằ ự ế ả ộ ỗ ẫ ẩ ẫ ị
chu n ch a 10-320 ppm HCA t do đ c tiêm vào HPLC, thao tác r a gi i đ c th c hi nẩ ứ ự ượ ử ả ượ ự ệ
nh ph n th o lu n trên, và k t qu thu đ c các di n tích pic. Đ ng cong HCA đ cư ầ ả ậ ở ế ả ượ ệ ườ ượ

v d a trên bi u di n s ph thu c gi a n ng đ c a HCA và di n tích pic (trung bình c aẽ ự ể ễ ự ụ ộ ữ ồ ộ ủ ệ ủ
03 l n ch y). T ng t , đ ng chu n c a axit xitric đ c tiêm vào HPLC, đ c th c hi nầ ạ ươ ự ườ ẩ ủ ượ ượ ự ệ
nh cách th o lu n trên, và k t qu thu đ c các di n tích pic. ư ả ậ ế ả ượ ệ
Kho ng n ng đ m u chu n c n đ xây d ng đ ng chu n đ c xác đ nh d a vàoả ồ ộ ẫ ẩ ầ ể ự ườ ẩ ượ ị ự
n ng đ th c c a HCA có trong m u. Kho ng n ng đ này tính t giá tr gi i h n d iồ ộ ự ủ ẫ ả ồ ộ ừ ị ớ ạ ướ
(LLOQ) đ n giá tr gi i h n trên (ULOQ).ế ị ớ ạ
Xác đ nh giá tr gi i h n:ị ị ớ ạ Giá tr gi i h n (LOQ) đ c đ nh nghĩa nh n ng đị ớ ạ ượ ị ư ồ ộ
th p nh t c a HCA mà có th xác đ nh v i đ tin c y và chính xác <20%. ấ ấ ủ ể ị ớ ộ ậ
Xác đ nh axit h u c có trong m u:ị ữ ơ ẫ M u đ c chu n b b ng cách pha loãng theoẫ ượ ẩ ị ằ
t l 1:100 v i n c c t 02 l n c t, ngo i tr d ch chi t lá b a pha loãng v i t l 1:25, quỉ ệ ớ ướ ấ ầ ấ ạ ừ ị ế ứ ớ ỉ ệ ả
P
100
.
V
Vcd
.n.KX
1
=
chi t b ng methanol t l 1:50. Th tích c a m i m u đ c tiêm vào HPLC là 20 ế ằ ỉ ệ ể ủ ỗ ẫ ượ µL, HCA,
axit xitric thu đ c tr c ti p d a vào di n tích pic, b ng cách áp d ng h s pha loãng vàượ ự ế ự ệ ằ ụ ệ ố
s d ng đ ng chu n. N ng đ c a HCA và axit xitric trong m u đ c trình bày b ngử ụ ườ ẩ ồ ộ ủ ẫ ượ ằ
g/100 g m u.ẫ
Ph ng pháp chu n đ axit-baz có th s d ng đ xác đ nh axit h u c trong d chươ ẩ ộ ơ ể ử ụ ể ị ữ ơ ị
chi t, ph ng pháp này giúp ta xác đ nh đ c t ng l ng axit có trong d ch chi t. Tuyế ươ ị ượ ổ ượ ị ế
nhiên, trong ph ng pháp này không th đ nh l ng axit (-) hyđroxy xitric và axit xitric m tươ ể ị ượ ộ
cách riêng bi t. Ta cũng có th xác đ nh các axit b ng ph ng pháp s c kí khí, trongệ ể ị ằ ươ ắ
ph ng pháp s c kí khí ta ph i s y m u. Nh ng axit HCA s b lacton hoá khi có tác nhânươ ắ ả ấ ẫ ư ẽ ị
nhi t. Trong ph ng pháp s c kí l ng cao áp, ta có th đ nh l ng HCA và các axit h u cệ ươ ắ ỏ ể ị ượ ữ ơ
khác mà không c n ph i cô đ c, s y, hoá h i dung d ch chi t. Đây là đi m thu n l i đ cóầ ả ặ ấ ơ ị ế ể ậ ợ ể
th đ nh l ng (-)-HCA và các axit h u c m t cách riêng bi t.ể ị ượ ữ ơ ộ ệ

3. K t qu và th o lu n ế ả ả ậ
3.1. K t qu xác đ nh đ m trong lá v qu b aế ả ị ộ ẩ ỏ ả ứ
K t qu xác đ nh đ m trong lá, v qu b a đ c trình bày trong b ng 1 sau đây:ế ả ị ộ ẩ ỏ ả ứ ượ ả
B ng 1. K t qu xác đ nh đ m trong lá, v qu B aả ế ả ị ộ ẩ ỏ ả ứ
M uẫ Stt
m uẫ
Kh i l ng láố ượ
tr c khi s y (g)ướ ấ
Kh i l ng lá sauố ượ
khi s y (g)ấ
Kh i l ng n cố ượ ướ
trong lá (g)
Đ mộ ẩ
(%)
Lá b aứ
1 9.726 2.789 6.937 71.32
2 9.96 2.898 7.062 70.9
3 10.172 3.022 4.17 70.49
Vỏ
quả
b aứ
1 10.6012 1.6767 8.9245 84.18
2 9.7521 1.547 8.2051 84.14
3 10.5966 1.6458 8.9508 84.47
T k t qu trên cho th y đ m trong lá B a t i kho ng 70,70 ± 0,62 %, đ mừ ế ả ấ ộ ẩ ứ ươ ả ộ ẩ
trung bình trong lá là 70,70 %. Đ m trong lá B a cao, chi m kho ng 70% kh i l ng lá.ộ ẩ ứ ế ả ố ượ
Đ m trong v qu b a kho ng 84,31 ± 0,16 %, đ m trung bình trong v qu là 84,31ộ ẩ ỏ ả ứ ả ộ ẩ ỏ ả
%. Đ m trong v qu b a là r t cao, chi m kho ng 84 % kh i l ng v qu . ộ ẩ ỏ ả ứ ấ ế ả ố ượ ỏ ả
3.2. K t qu xác đ nh c u trúc b ng ph h ng ngo i (IR)ế ả ị ấ ằ ổ ồ ạ
K t qu ch p ph IR cho th y xu t hi n pic có b c sóng t 3300 – 3600 cmế ả ụ ổ ấ ấ ệ ướ ừ

-1
, đó
là ph dao đ ng c a nhóm –OH có liên k t hiđro, và pic có b c sóng t 1600 – 1800 cmổ ộ ủ ế ướ ừ
-1
,
là ph c a nhóm C=O trong nhóm – COOH (hình 2, 3). ổ ủ
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
0.40
0.45
0.50
0.55
0.60
0.65
Absorbance
500
1000
1500
2000
2500
3000

3500
4000

Wavenumbers (cm-1)
0.00
0.02
0.04
0.06
0.08
0.10
0.12
0.14
0.16
0.18
0.20
0.22
0.24
Absorbance
500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
4000
Wavenumbers (cm-1)
Hình 2: Ph IR m u v qu b a chi t trongổ ẫ ỏ ả ứ ế
n cướ
Hình 3: Ph IR m u lá b a chi t trong n cổ ẫ ứ ế ướ
T nh ng ph h ng ngo i trên, có th k t lu n trong m u chi t t n c c aừ ữ ổ ồ ạ ể ế ậ ẫ ế ừ ướ ủ
lá và v qu b a có s t n t i c a axit h u c có nhóm –OH.ỏ ả ứ ự ồ ạ ủ ữ ơ
3.3. K t qu xác đ nh axit h u c trong lá, v qu b aế ả ị ữ ơ ỏ ả ứ

B ng 2: So sánh axit h u c trong lá, v qu b a b ng HPLC và ph ng pháp chu n đả ữ ơ ỏ ả ứ ằ ươ ẩ ộ
Axit h u c xác đ nhữ ơ ị
b ng HPLC (g/100 g)ằ
M uẫ Dung môi chi tế HCA Axit xitric Chu n đ axit-baz (g/100g)ẩ ộ ơ
Lá b aứ N cướ 2,863 0 3,554
V qu b aỏ ả ứ
khô
N cướ 15,221 0,406 17,468
V qu b aỏ ả ứ
khô
Axeton 12,999 0,239 13,711
V qu b aỏ ả ứ
khô
Metanol 9,508 0,078 10,492
S m u n=3, k t qu tính trung bìnhố ẫ ế ả
Thành ph n axit h u c xác đ nh b ng ph ng pháp s c kí l ng cao áp và ph ngầ ữ ơ ị ằ ươ ắ ỏ ươ
pháp chu n đ đ c th hi n trong b ng 2. T ng axit xác đ nh b ng ph ng pháp chu nẩ ộ ượ ể ệ ả ổ ị ằ ươ ẩ
đ axit-baz có k t qu l n h n t ng axit xác đ nh b ng HPLC. T b ng trên cho th y,ộ ơ ế ả ớ ơ ổ ị ằ ừ ả ấ
chi t b ng dung môi n c cho l ng axit là l n nh t, ti p đ n là axeton và metanol. Giá trế ằ ướ ượ ớ ấ ế ế ị
thu đ c ch y u c a ph ng pháp HPLC đ c tính đ n ch là HCA, b i vì giá tr thuượ ủ ế ủ ươ ượ ế ỉ ở ị
đ c t di n tích pic c a HCA l n nh t. Axit ch y u đ c tìm th y trong lá, v qu b aượ ừ ệ ủ ớ ấ ủ ế ượ ấ ỏ ả ứ
b ng HPLC là HCA, đ c th hi n trên s c kí đ hình 5, 6, 7, 8. Pic th y u đ c xácằ ượ ể ệ ắ ồ ứ ế ượ
đ nh là pic c a axit xitric. Trên s c kí đ , HCA cho pic đ n trong t t c các m u chi t.ị ủ ắ ồ ơ ấ ả ẫ ế
Riêng đ i v i m u lá b a chi t trong n c không xu t hi n pic c a axit xitric. Xác đ nh picố ớ ẫ ứ ế ướ ấ ệ ủ ị
HCA đ c d a vào pic c a axit HCA chu n xu t hi n th i gian l u là 4,939 phút, t ngượ ự ủ ẩ ấ ệ ở ờ ư ươ
t pic c a axit xitric xác đ nh nh pic axit chu n xu t hi n th i gian l u là 5,623 phútự ủ ị ờ ẩ ấ ệ ở ờ ư
(hình 4). Th i gian l u c a HCA và axit xitric đ c tìm th y trong t t c các m u l n l tờ ư ủ ượ ấ ấ ả ẫ ầ ượ
là 4,992 ± 0,065, 5,609 ± 0,010 phút.
Đ ng chu n đ c xác đ nh b ng cách thay đ i n ng đ c a 05 m u chu n.ườ ẩ ượ ị ằ ổ ồ ộ ủ ẫ ẩ
Đ ng chu n đ c xây d ng v i n ng đ t 10 đ n 320 ppm, ph ng trình đ ng chu n:ườ ẩ ượ ự ớ ồ ộ ừ ế ươ ườ ẩ

C = 1,37A-6,88 v i A là di n tích pic c a HCA, C là n ng đ HCA, h s t ng quanớ ệ ủ ồ ộ ệ ố ươ
R
2
=0,999698.
Hình 4. S c kí đ m u axit HCA và axit xitric chu nắ ồ ẫ ẩ Hình 5. S c kí đ m u v qu b a khô chi t trong metanolắ ồ ẫ ỏ ả ứ ế
Hình 6: S c kí đ m u v qu b a khô chi t trong n cắ ồ ẫ ỏ ả ứ ế ướ Hình 7: S c kí đ m u v qu b a khô chi t trong axetonắ ồ ẫ ỏ ả ứ ế
Hì
nh 8: S c kí đ m u lá b a chi t trong n cắ ồ ẫ ứ ế ướ
4. K t lu nế ậ
B ng ph ng pháp s c kí l ng cao áp (HPLC) đã xác đ nh đ c hàm l ng axit h uằ ươ ắ ỏ ị ượ ượ ữ
c trong lá, v qu b a. K t qu cho th y axit (-) hyđroxy xitric là thành ph n axit ch y uơ ỏ ả ứ ế ả ấ ầ ủ ế
có trong lá, v qu b a. Hàm l ng HCA tìm th y trong lá, v qu b a khô là khá cao, cỏ ả ứ ượ ấ ỏ ả ứ ụ
th HCA trong lá, v qu b a khô l n l c là 2,863 và 15,221 %. ể ỏ ả ứ ầ ượ
T k t qu này có th ti p t c nghiên c u sâu đ s n xu t th c ph m ch a tr béoừ ế ả ể ế ụ ứ ể ả ấ ự ẩ ữ ị
phì t cây b a Vi t nam.ừ ứ ệ
TÀI LI U THAM KH OỆ Ả
[1]
Đ T t L i (2005), ỗ ấ ợ Nh ng cây thu c và v thu c Vi t Namữ ố ị ố ệ , Nhà xu t b n Y h c, Hà N i.ấ ả ọ ộ
[2]
TCVN 4589-88: Đ h p-Ph ng pháp xác đ nh hàm l ng axit t ng s và axit bay h i.ồ ộ ươ ị ượ ổ ố ơ
[3]
Bhabani S. Jena, Guddadarangavvanahally. Jayaprakasha, Kunnumpurath K. Sakariah*.
(2002), "Organic Acids from Leaves, Fruits, and Rinds of Garcinia cowa", Journal of
Agricultural and Food chemistry, Vol 50, No. 12, 2002.
[4]
Jayaprakasha GK, Sakariah KK. (2002 Apr 15), "Determination of organic acids in leaves and
rinds of Garcinia indica (Desr.) by LC", Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis, 28(2):379-84.
[5]
Jena BS, Jayaprakasha GK, Singh RP, Sakariah KK. (2002 Jan 2), "Chemistry and

biochemistry of (-)-hydroxycitric acid from Garcinia", Journal of Agricultural and
Food chemistry, 50(1):10-22.
[6]
Shara M, Ohia SE, Schmidt RE, Yasmin T, Zardetto-Smith A, Kincaid A, Bagchi M,
Chatterjee A, Bagchi D, Stohs SJ. (2004 May), "Physico-chemical properties of a
novel (-)-hydroxycitric acid extract and its effect on body weight, selected organ
weights, hepatic lipid peroxidation and DNA fragmentation, hematology and clinical
chemistry, and histopathological changes over a period of 90 days", Molecular and
Cellular Biochemistry, 260(1-2):171-86.