NGHIÊN CỨU SỰ TẠO DỊCH TREO TẾ BÀO CÂY ĐINH LĂNG POLYSCIAS FRUTICOSA L. HARMS.

ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH
ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH
CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC VẬT
CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC VẬT
ĐỀ TÀI:
ĐỀ TÀI:
NGHIÊN CỨU SỰ TẠO DỊCH TREO
NGHIÊN CỨU SỰ TẠO DỊCH TREO
TẾ BÀO CÂY ĐINH LĂNG
TẾ BÀO CÂY ĐINH LĂNG
POLYSCIAS FRUTICOSA
POLYSCIAS FRUTICOSA
L. HARMS
L. HARMS
.
.
GV: Th.S PHAN NGÔ HOÀNG
GIỚI THIỆU:
GIỚI THIỆU:


•
Đinh lăng
Đinh lăng
hay
hay
cây gỏi cá
cây gỏi cá
,
,
nam dương

nam dương
sâm
sâm
(danh pháp khoa học:
(danh pháp khoa học:
Polyscias
Polyscias
fruticosa
fruticosa
, đồng nghĩa:
, đồng nghĩa:
Panax fruticosum
Panax fruticosum
,
,
Panax fruticosus
Panax fruticosus
) là một loài cây nhỏ
) là một loài cây nhỏ
thuộc chi Đinh lăng (
thuộc chi Đinh lăng (
Polyscias
Polyscias
) của họ
) của họ
Cam tùng (
Cam tùng (
Araliaceae
Araliaceae
). Cây được trồng

). Cây được trồng
làm cảnh hay làm thuốc trong y học cổ
làm cảnh hay làm thuốc trong y học cổ
truyền.
truyền.
Thành phần hoá học:
Thành phần hoá học:
Trong rễ có
Trong rễ có
glucosid, alcaloid, saponin triterpen,
glucosid, alcaloid, saponin triterpen,
tanin, 13 loại acid amin, vitamin B1.
tanin, 13 loại acid amin, vitamin B1.
Trong thân và lá cũng có nhưng ít hơn.
Trong thân và lá cũng có nhưng ít hơn.
Với mục đích thu nhận một lượng lớn
Với mục đích thu nhận một lượng lớn
saponin thông qua con đường công
saponin thông qua con đường công
nghệ sinh học bằng phương pháp nuôi
nghệ sinh học bằng phương pháp nuôi
cấy dịch treo tế bào.
cấy dịch treo tế bào.
Saponin là gì?
Saponin là gì?
•
Saponin là một glicozit tự nhiên thường
Saponin là một glicozit tự nhiên thường
gặp trong nhiều loài thực vật

gặp trong nhiều loài thực vật
•
Saponin có tính chất chung là khi hoà tan
Saponin có tính chất chung là khi hoà tan
vào nước có tác dụng làm giảm sức căng
vào nước có tác dụng làm giảm sức căng
bề mặt của dung dịch tạo nhiều bọt, có
bề mặt của dung dịch tạo nhiều bọt, có
tính chất phá huyết, độc đối với động vật
tính chất phá huyết, độc đối với động vật
máu lạnh nhất là đối với cá
máu lạnh nhất là đối với cá
•
Dưới tác dụng của enzym có trong thực vật hay vi
Dưới tác dụng của enzym có trong thực vật hay vi
khuẩn hoặc do axít loãng, saponin bị thuỷ phân
khuẩn hoặc do axít loãng, saponin bị thuỷ phân
thành các phần gồm genin gọi là sapogenin và
thành các phần gồm genin gọi là sapogenin và
phần đường gồm một hoặc nhiều phân tử đường.
phần đường gồm một hoặc nhiều phân tử đường.
Các đường phổ biến là D-glucoza, D-galactoza, L-
Các đường phổ biến là D-glucoza, D-galactoza, L-
arabinoza, axít galactunoic, axít D-glucuronic
arabinoza, axít galactunoic, axít D-glucuronic
Phần genin có thể có cấu trúc cholan như
Phần genin có thể có cấu trúc cholan như
sapogeninsteroi hoặc sapogenintritecpen dạng β-
sapogeninsteroi hoặc sapogenintritecpen dạng β-

amirin (axít olenoic), dạng α-amirin (axít asiatic),
amirin (axít olenoic), dạng α-amirin (axít asiatic),
dạng lupol (axit buletinie) hoặc tritecpen bốn vòng.
dạng lupol (axit buletinie) hoặc tritecpen bốn vòng.
tác dụng:
tác dụng:

Đinh lăng có tác dụng kháng Entamoeba
Đinh lăng có tác dụng kháng Entamoeba
histolytica, làm đơn bào co thành kén và có tác
histolytica, làm đơn bào co thành kén và có tác
dụng kích thích miễn dịch gây chuyển dạng
dụng kích thích miễn dịch gây chuyển dạng
lympho bào trong thí nghiệm nuôi cấy in vitro.
lympho bào trong thí nghiệm nuôi cấy in vitro.

Đinh lăng đã được nghiên cứu tác dụng kích
Đinh lăng đã được nghiên cứu tác dụng kích
thích miễn dịch không đặc hiệu
thích miễn dịch không đặc hiệu

Đinh lăng còn có tác dụng giảm chứng tăng
Đinh lăng còn có tác dụng giảm chứng tăng
cholesterol trong máu gây theo cơ chế nội sinh
cholesterol trong máu gây theo cơ chế nội sinh
bằng Tween 80.
bằng Tween 80.

Đinh lăng còn có tác dụng kích thích tăng sinh
Đinh lăng còn có tác dụng kích thích tăng sinh

lực ở động vật gây mệt mỏi, tác dụng kéo dài và
lực ở động vật gây mệt mỏi, tác dụng kéo dài và
bền vững.
bền vững.
Theo nghiên cứu của Học viện Quân sự Việt Nam, dung
Theo nghiên cứu của Học viện Quân sự Việt Nam, dung
dịch cao đinh lăng có tác dụng:
dịch cao đinh lăng có tác dụng:
- Tăng biên độ điện thế não, tăng tỉ lệ các sóng alpha,
- Tăng biên độ điện thế não, tăng tỉ lệ các sóng alpha,
bêta và giảm tỉ lệ sóng delta. Những biến đổi này diễn
bêta và giảm tỉ lệ sóng delta. Những biến đổi này diễn
ra ở vỏ não mạnh hơn so với ở thể lưới.
ra ở vỏ não mạnh hơn so với ở thể lưới.
- Tăng khả năng tiếp nhận của các tế bào thần kinh vỏ
- Tăng khả năng tiếp nhận của các tế bào thần kinh vỏ
não với các kích thích ánh sáng.
não với các kích thích ánh sáng.
- Tăng nhẹ quá trình hưng phấn khi thực hiện phản xạ
- Tăng nhẹ quá trình hưng phấn khi thực hiện phản xạ
trong mê lộ.
trong mê lộ.
- Tăng hoạt dộng phản xạ có điều kiện gồm phản xạ
- Tăng hoạt dộng phản xạ có điều kiện gồm phản xạ
dương tính và phản xạ phân biệt.
dương tính và phản xạ phân biệt.
- Nhìn chung, dưới tác dụng của cao đinh lăng, vỏ não
- Nhìn chung, dưới tác dụng của cao đinh lăng, vỏ não
được hoạt hóa nhẹ và có tính đồng bộ, các chức năng
được hoạt hóa nhẹ và có tính đồng bộ, các chức năng

của hệ thần kinh về tiếp nhận và tích hợp đều tốt hơn.
của hệ thần kinh về tiếp nhận và tích hợp đều tốt hơn.
NGUYÊN LIỆU:
NGUYÊN LIỆU:
•
Các mẫu cây con Đinh lăng nuôi trong môi
Các mẫu cây con Đinh lăng nuôi trong môi
trường MS có 2,4 -D 2mg/l là vật liệu để
trường MS có 2,4 -D 2mg/l là vật liệu để
tạo mô sẹo.
tạo mô sẹo.
PHƯƠNG PHÁP
PHƯƠNG PHÁP
•
Mô sẹo 14 tuần tuổi có nguồn gốc từ lá
Mô sẹo 14 tuần tuổi có nguồn gốc từ lá
non
non
Polyscias fruticosa
Polyscias fruticosa
L. Harm được
L. Harm được
chuyển sang môi trường MS có bổ sung
chuyển sang môi trường MS có bổ sung
20% nước dừa và 2,4 –D 1mg/l
20% nước dừa và 2,4 –D 1mg/l
KẾT QUẢ
KẾT QUẢ
•
Sau 8 tuần thu được dịch treo tế bào. Sự

Sau 8 tuần thu được dịch treo tế bào. Sự
tăng trưởng của dịch treo tế bào tốt và
tăng trưởng của dịch treo tế bào tốt và
tạo được rễ khi trong môi trường nuôi cấy
tạo được rễ khi trong môi trường nuôi cấy
có sự hiện diện của saccharose 30g/l, 2,4
có sự hiện diện của saccharose 30g/l, 2,4
– D 1mg/l và BA 2,0 mg/l.
– D 1mg/l và BA 2,0 mg/l.
•
Từ vật liệu này có thể tiến hành việc li
Từ vật liệu này có thể tiến hành việc li
trích saponin
trích saponin
THẢO LUẬN
THẢO LUẬN


•
Sự tăng trưởng của dịch treo tế bào chịu
Sự tăng trưởng của dịch treo tế bào chịu
ảnh hưởng của nhiều yếu tố vật lý (nhiệt
ảnh hưởng của nhiều yếu tố vật lý (nhiệt
độ, ánh sáng, độ thong khí…) cũng như
độ, ánh sáng, độ thong khí…) cũng như
thành phần và hàm lượng các chất trong
thành phần và hàm lượng các chất trong
môi trường nuôi cấy như saccharose, các
môi trường nuôi cấy như saccharose, các
chất điều hòa sinh trưởng thực vật, các

chất điều hòa sinh trưởng thực vật, các
chất chống oxy hoá các hợp chất phenol
chất chống oxy hoá các hợp chất phenol
do tế bào tiết ra môi trường nuôi cấy (acid
do tế bào tiết ra môi trường nuôi cấy (acid
citric, acid ascorbic…)
citric, acid ascorbic…)
Hệ thống Bioreactor trong sản
Hệ thống Bioreactor trong sản
xuất
xuất
•
Bioreactor với hệ thống cung cấp và xả
Bioreactor với hệ thống cung cấp và xả
môi trường, hệ thống cấp và thoát khí vô
môi trường, hệ thống cấp và thoát khí vô
trùng được thiết kế có khả năng tạo ra
trùng được thiết kế có khả năng tạo ra
một môi trường nuôi cấy vô trùng, kiểm
một môi trường nuôi cấy vô trùng, kiểm
soát các yếu tố môi trường bên trong như
soát các yếu tố môi trường bên trong như
sự lắc, sự thoáng khí, nhiệt độ, oxy hòa
sự lắc, sự thoáng khí, nhiệt độ, oxy hòa
tan, pH ).
tan, pH ).
Bioreactor có ba loại chính
Bioreactor có ba loại chính
được phân biệt như sau:
được phân biệt như sau:

Loại dùng để sản xuất sinh khối (sản
Loại dùng để sản xuất sinh khối (sản
phẩm là khối tế bào, các đơn vị phát sinh
phẩm là khối tế bào, các đơn vị phát sinh
phôi, phát sinh cơ quan, chồi, rễ)
phôi, phát sinh cơ quan, chồi, rễ)
- Loại dùng để sản xuất các chất chuyển
- Loại dùng để sản xuất các chất chuyển
hóa thứ cấp, enzyme
hóa thứ cấp, enzyme
- Loại dùng cho việc chuyển hoá sinh học
- Loại dùng cho việc chuyển hoá sinh học
các chất chuyển hóa ngoại sinh (là các
các chất chuyển hóa ngoại sinh (là các
chất tiền thân trong quá trình trao đổi
chất tiền thân trong quá trình trao đổi
chất)
chất)
Hệ thống nuôi cấy tế bào thực vật (Bioreactor and
Hệ thống nuôi cấy tế bào thực vật (Bioreactor and
Control System for Plant Cell) ()New Brunswick
Control System for Plant Cell) ()New Brunswick
Scientific, USA.
Scientific, USA.


tách chiết saponin
tách chiết saponin
Muốn thu nhận các hợp chất có trong
Muốn thu nhận các hợp chất có trong

nhân sâm người ta thường sử dụng
nhân sâm người ta thường sử dụng
phương pháp chiết tách (extraction), hiện
phương pháp chiết tách (extraction), hiện
nay người ta hay sử dụng phương pháp
nay người ta hay sử dụng phương pháp
microwave extraction do hiệu suất tách
microwave extraction do hiệu suất tách
cao hơn
cao hơn
KẾT LUẬN
KẾT LUẬN
•
Ứng dụng dịch treo tế bào :
Ứng dụng dịch treo tế bào :
•
Giảm sự khai thác quá mức các loại thực vật
Giảm sự khai thác quá mức các loại thực vật
quý hiếm gây mất cân bằng sinh thái.
quý hiếm gây mất cân bằng sinh thái.
•
Thu nhận với lượng lớn các hợp chất có giá trị
Thu nhận với lượng lớn các hợp chất có giá trị
cao trong y học như: nuôi cấy tế bào nhân
cao trong y học như: nuôi cấy tế bào nhân
sâm(ginsenoside), shikonin, taxol được chiết
sâm(ginsenoside), shikonin, taxol được chiết
xuất từ taxus wallichiana zucc (có trong cây
xuất từ taxus wallichiana zucc (có trong cây
thông đỏ) thuốc trị bệnh ung thư…

thông đỏ) thuốc trị bệnh ung thư…
•
Trong sản xuất số lượng lớn cây dược liệu và
Trong sản xuất số lượng lớn cây dược liệu và
hoa cảnh.
hoa cảnh.
•
Chọn nhanh dòng tế bào kháng bệnh.
Chọn nhanh dòng tế bào kháng bệnh.
•
Chuyển gen và lai thể hệ.
Chuyển gen và lai thể hệ.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
TÀI LIỆU THAM KHẢO
•
o/index.php/JSTD/article/view
o/index.php/JSTD/article/view
/658
/658
•
/> />%C4%83ng
%C4%83ng
•
/> />1462.html
1462.html
•
/> />•
/> />thong-bioreactor-trong-san-xuat-so-luong-lon-
thong-bioreactor-trong-san-xuat-so-luong-lon-
cay-duoc-lieu-va-hoa-ca

cay-duoc-lieu-va-hoa-ca
•
Tham khảo nghiên cứu của Phạm Thị Tố Liên, Võ
Tham khảo nghiên cứu của Phạm Thị Tố Liên, Võ
Thị Bạch Mai
Thị Bạch Mai
Khoa Sinh - Trường Đại học Khoa học Tự
Khoa Sinh - Trường Đại học Khoa học Tự
nhiên
nhiên
LỜI CẢM ƠN
LỜI CẢM ƠN