Chủ đề lactate dehydrogenase

CHỈ THỊ PHÂN TỬ

Chủ đê

lactate dehydrogenase

TS. Nguyễn Thị Thu Liên

Nhóm 1


NỘI DUNG CHÍNH

II. Ứng dụng của isoenzyme LDH

III. Ví dụ

I. Giới thiệu tổng quan về LDH


GIỚI THIỆU TỔNG QUAN


LACTATE DEHYDROGENASE LÀ GÌ

•

Enzym lactat đehdrogenase (LDH) là tên quen dùng, trong hệ thống danh pháp
hoá học nó thuộc loại enzym oxy-hoá khử và có tên là L-lactat NAD-oxydoreductase. LDH là tên chung của các loại enzym xúc tác phản ứng khử hydro (H)
của axit lactic.

CẤU TẠO PHÂN LOẠI

•  LDH có phân tử lượng từ 130.000 đến 140.000 

•Do 4 đơn vị nhỏ cấu tạo nên
•Các chuỗi polipeptid này gồm 2 loại có cấu tạo phân tử sinh tổng được sinh tổng hợp nên từ 2 loại gen khác nhau và được ký hiệu 
là H (H=Heart=tim) và M (M=Muscle=cơ xương).  .

•Các chuỗi này kết hợp với nhau thành 5 dạng phân tử tetrame: LDH1, LDH2, LDH3, LDH4 và LDH5.


CẤU TẠO PHÂN LOẠI

•
•

Các tiểu đơn vị M được mã hóa bởi gen LDHA
Các tiểu đơn vị H được mã hóa bởi gen LDHB

Lactate dehydrogenase A
( tiểu đơn vị M )

Lactate dehydrogenase B
( tiểu đơn vị H )


CẤU TẠO PHÂN LOẠI

VAI TRÒ


VAI TRÒ

Kiểm tra của một loạt các bệnh liên quan đến tim, gan, cơ, thận, phổi, và máu

Ý nghĩa lâm sàn LDH

Giám sát sự thay đổi trong khối u sau khi hóa trị


ỨNG DỤNG CỦA LDH ISOZYMES
TRONG CHỈ THỊ PHÂN TỬ


ĐIỆN DI LDH


ĐIỆN DI LDH

Chuẩn bị gel agarose 1,2% trong 50 mM Tris-HCl đệm pH
8,2.

Điện di LDH

H 2 O 18,4 ml, 1 M Tris 4 ml, tetrazolium-xanh
12 ml, phenazine-methosulphate 4 ml,

Cho 20 ml từ huyết thanh mẫu vật vào giếng gel khác nhau.

Na-lactat 4 ml và NAD 1,3 ml

Sử dụng bromophenol xanh.

Đổ bể đệm vào và kết nối các dây cáp điện. Điện di tại 170 V.
Phát hiện LDH isoenzymes Tắt điện, và đặt gel vào buồng phát màu đó.


ĐIỆN DI LDH

Gel có thể được lưu trữ trong
dung dịch destain chuẩn chứa
10% methanol và 5% acid

Rửa gel với nước và quan sát
chúng dưới ánh sang tử
ngoại.

acetic.

Lượng màu nâu là tỷ lệ với số lượng

Xác định vị trí các băng chứa

một isoenzyme LDH hiện trong một

isozyme LDH.

băng.

www.themegallery.com


ĐIỆN DI LDH


ĐIỆN DI LDH

Giá trị tham khảo cho các mức độ bình thường của isoenzymes LDH khác nhau từ phòng thí nghiệm đến phòng thí nghiệm nhưng có thể được tìm thấy trong
phạm vi sau đây:


ĐIỆN DI LDH

Để phát hiện các isozyme LDH trong một gel agarose sau khi điện di, các phản ứng enzym nói trên được nối với một sản xuất phản ứng màu:


ĐỊNH LƯỢNG LDH

Một đơn vị gây ra quá trình oxy hóa của một micromole của NADH mỗi phút ở 25 ° C và pH 7.3, theo các điều kiện quy định.

Thuốc thử

30 mM sodium pyruvate trong trên 0.2 Tris⋅HCl
đệm, pH 7.3

0,2 M Tris⋅HCl, pH 7.3

Enzyme

6.6 mM NADH ở trên đệm 0,2 M Tris⋅HCl,

1 mg / ml trong 0,2 M Tris⋅HCl đệm

pH 7.3


ĐIỆN DI LDH

•

Quy trình:

Thiết lập quang phổ ở 340 nm và 25 ° C.
Pipette vào cuvette như sau:


Video


ĐIỆN DI LDH

MỨC độ LDH là trong các mô cao hơn trong huyết thanh
LD-1, LD-2 đang chiếm ưu thế trong cơ tim, thận, hồng cầu
LD-4, LD-5 đang chiếm ưu thế trong cơ xương, gan

Cơ quan

Mức độ

Gan

145U / g

Tim

124U / g

Thận

106U / g

Xương cơ bắp

147U / g

Hồng cầu

36U / g


MỘT SỐ THÔNG TIN QUAN TRỌNG CỦA LDH

LDH hoạt động khác nhau trong
huyết thanh khác nhau

Các hoạt động LDH vốn có hiện diện
trong huyết thanh gây ra tín hiệu nền
trong khảo nghiệm.

MỘT SỐ THÔNG TIN QUAN TRỌNG CỦA LDH

 Luyện tập thể thao cũng có thể làm tăng 

Vitamin C (acid ascorbic) có thể làm giảm nồng 

nồng độ LDH. 

độ LDH.

Các loại thuốc có thể can thiệp
với một thử nghiệm LDH chính xác

Rượu, thuốc mê, thuốc aspirin, florua, mithramycin, procainamide và có thể làm tăng nồng độ LDH.


Triệu chứng bệnh dựa vào LDH


Triệu chứng bệnh dựa vào LDH

- Xác định hoạt độ LDH ở bệnh nhân đã xuất hiện từ 12 - 24h trước khi vào viện hoặc bệnh nhân có tiền sử và điện tim gợi ý là
nhồi máu cơ tim cấp.
- Nếu lấy máu xét nghiệm vào ngày thứ 2 (24 - 48h) mà LDH đều tăng cao thì gần như chắc chắn bệnh nhân bị nhồi máu cơ tim
mà không cần làm các xét nghiệm chẩn đoán khác nữa.


Triệu chứng bệnh dựa vào LDH

- Các bệnh nhân bị nhồi máu cơ tim vào viện muộn thì xét nghiệm LDH toàn phần thì không cần làm các xét nghiệm khác.
- Bình thường: LDH = 230 - 460 U/l
- Nếu LDH toàn phần tăng cao hơn 2000 U/l thì ít có giá trị chẩn đoán vì nhiều bệnh khác cũng có thể làm tăng LDH