BÁO cáo NUÔI cấy mô tế bào VI NHÂN GIỐNG CHUỐI

BÁO CÁO
NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO
VI NHÂN GIỐNG CHUỐI

Giảng viên hướng dẫn:

Sinh viên thực hiện:

TS. NGUYỄN THỊ PHA

1. Lý Quốc Diễn

B1303646

2. Trần Phát Đạt

B1303653

3. Hồ Nhã Tuấn

B1303750

4. Trương Ngọc Vinh

B1303757

5. Nguyễn Minh Nghĩa B1303687


IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
V. KẾT

LUẬN
NỘI
DUNG

2


I. SƠ LƯỢC

Vài nét về cây chuối:
- Về mặt dinh dưỡng: quả chuối có giá trị rất cao, được coi là loại thực phẩm lý tưởng
cho mọi lứa tuổi. So với các loại cây trồng khác, toàn bộ sản phẩm của cây chuối đều
có thể tận dụng làm lương thực, thực phẩm cho chăn nuôi gia súc, gia cầm và thức ăn
cho cá…
- Thị trường tiêu thụ sản phẩm chuối tươi và chế biến đang ngày càng được mở rộng.
Vì vậy, trồng chuối sẽ đem lại hiệu quả kinh tế khá cao cho người nông dân.

3


I. SƠ LƯỢC

Hình 1. Chuối La Ba.

4


II. ĐẶT VẤN ĐỀ

Chi phí cho quá trình vi nhân giống chuối cũng như quá trình vận chuyển cây con còn

khá cao. Làm giá thành cây giống ở mức cao, hạn chế sự phát triển của nghề trồng
chuối ở Việt Nam.

Làm thế nào để giải quyết vấn đề trên?

5


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

- Thí nghiệm được

tiến hành trên giống chuối tiêu (Cavendish sp.), giống La Ba.

- Môi trường nuôi cấy gồm có:
+ Khoáng đa lượng MS. Như sau (mg/l): KNO 3 1900, NH4NO3 1650, KH2PO4 170,
CaCl2.2H2O 440, MgSO4.7H2O 370.

6


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

 

+ Chất điều hòa sinh trưởng được sử dụng là BA 5mg/l, L-tyrosine 100mg/l, IAA

0.5mg/l và Adenine sulfate 100mg/l. Vi lượng và Fe-EDTA theo môi trường MS.
Thyamine HCl 100mg/l,
m-inositol 100mg/l. Nước dừa 20%. pH 5.8. Đường 30gr/l. Agar 8gr/l.

- Giai đoạn nuôi trong phòng được chiếu sáng 2000 lux bằng đèn huỳnh quang. Thời
0
gian chiếu sáng 8 giờ mỗi ngày. Nhiệt độ 28 C 3.

7


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

Quy trình :
Thí nghiệm 1:
- Bước 1: Chọn lọc cây mẹ và giám định bệnh.
+ Chọn lọc cây mẹ khỏe mạnh, năng suất cao, chất lượng quả tốt, đúng giống.
+ Cây mẹ sau đó được kiểm định các bệnh do virus bằng các kĩ thuật PCR và ELISA.
+ Các cây sạch bệnh sau đó được trồng trong nhà lưới để thu hồi nhân giống.

8


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

- Bước 2: Tạo chồi ban đầu.
+ Tách mẫu: cây chuối con có chiều cao 0.5-1m lấy từ cây mẹ đầu dòng, tách lấy đỉnh
sinh trưởng nằm giữa củ.
+ Khử trùng bằng cồn 70% hoặc H2O2 30%
+ Kích thước mẫu khoảng 1.5x1.5x1.0cm, được đưa vào môi trường tái sinh chồi.

9

III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

- Bước 3: Nhân chồi in vitro
Khoảng 4-5 tuần sau khi được đưa vào môi trường tái sinh, khoảng 10-12 chồi/mẫu
cấy sẽ được tái sinh.
+ Tách mẫu cấy đã được tái sinh ra từng cụm nhỏ mang 2-3 chồi, cấy sang môi trường
nhân nhanh cụm chồi.
+ Cấy chuyển sau 4-5 tuần 1 lần. Số lần cấy chuyển không quá 6 lần.

10


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

Hình 2. Tạo protocorm cây chuối.

11


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

Hình 3. Nhân chồi trong phòng sáng dưới ánh sáng đèn.

12


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

- Bước 4: Tái sinh cây hoàn chỉnh.

+ Sau khi nhân đủ số lượng theo mục đích sử dụng thì tiến hành chọn các chồi có chiều
cao khoảng 2-3cm, có đỉnh sinh trưởng đầy đủ đưa vào môi trường tạo rễ để tạo cây
hoàn chỉnh in vitro.
+ Môi trường tạo rễ: MS, 30g/l sucrose, than hoạt tính, 10-15% nước dừa.

13


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

- Bước 5: Thí nghiệm thực hiện cho giai đoạn cấy cây lớn, cấy lần cuối cùng chuẩn bị
đưa ra vườn ươm. Cây giống có kích thước trung bình 6cm, đo cả lá, cấy 15 cây/bình.
Mỗi bình cấy mô chứa 65ml môi trường. Riêng bước này được thực hiện trên 2 nghiệm
thức. Mỗi nghiệm thức gồm 30 bình.

14


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

 

+ NT1: Nhân cây trong điều kiện nhiệt độ và ánh sáng tự nhiên
Bình cấy để ngoài hành lang hoặc nhà plastic sử dụng ánh sáng tự nhiên (thay đổi liên
0
tục từ 500-7000 lux), nhiệt độ dao động nhiều (29 C 8). Cây được trồng trong điều
kiện tự nhiên ít nhất 20 ngày trước khi đưa ra vườn ươm.
+ NT2: Nhân cây trong điều kiện ánh sáng đèn & nhiệt độ máy lạnh.

15

III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

- Bước 6: Ươm trên bột dừa.
+ Số lượng: 150 cây/nghiệm thức x 3 lần lặp lại.
+ Sau khi lấy cây khỏi bình, cây được rửa sạch và ngâm 10 phút trong dd Dithane M455gr/l. Giai đoạn này kéo dài khoảng 1 tháng.

16


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

Hình 4. Cây chuối lúc lấy ra khỏi bình cấy mô.

17


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

Hình 5. Cây chuối cấy mô ươm trên bột dừa.

18


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

Thí nghiệm 2:
Sử dụng tiếp tục cây có nguồn gốc được nuôi trong điều kiện ánh sáng và nhiệt độ tự
nhiên, chia đều làm 2 nghiệm thức.

19


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

- NT1:
+ Sau 1 tháng, nhổ cây lên và trồng ngay vào bầu trong 2 tháng.
+ Bầu trồng gồm bột dừa, tro trấu, phân bò và đất tỉ lệ bằng nhau.Cường độ chiếu sáng từ
25% lúc trong giai đoạn vườn ươm tăng dần lên 100% giai đoạn vào bầu.

20


III. NGUYÊN LIỆU & PHƯƠNG PHÁP

- NT2:
Tương tự NT1 nhưng khi cây được nhổ khỏi bột dừa thì chúng ta trữ cây trong thùng
xốp kín 2 ngày rồi mới trồng.

21


IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Hình 4. A, B cây nuôi trong ánh sáng đèn.
C, D cây nuôi trong ánh sáng tự nhiên.
22

IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Kết quả thu được từ thí nghiệm 1.

23


IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Kết quả thu được từ thí nghiệm 2

24


V. KẾT LUẬN

Quy trình trong bài báo cáo này là một bước cải tiến quan trọng cho phép nhân giống ở
quy mô công nghiệp.

- Cây chuối nhân giống bằng cấy mô được nuôi giai đoạn cuối trong điều kiện ánh
sáng và nhiệt độ tự nhiên khi trồng ra mau thích nghi với điều kiện vườn ươm hơn là
cây đối chứng (cây chuối nuôi hoàn toàn chỉ trong phòng máy lạnh ánh sáng đèn).

25