Nghiên cứu kỹ thuật làm giàu nhằm xác định salbutamol trong mẫu nước tiểu và thịt lợn bằng phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI
TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN
-----------------------------

Dƣơng Thị Nhàn

NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT LÀM GIÀU NHẰM XÁC ĐỊNH
SALBUTAMOL TRONG MẪU NƢỚC TIỂU VÀ THỊT LỢN
BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN SỬ DỤNG DETECTOR
ĐỘ DẪN KHÔNG TIẾP XÚC

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC

Hà Nội - 2016

1


ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI
TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN
------------------

Dƣơng Thị Nhàn

NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT LÀM GIÀU NHẰM XÁC ĐỊNH
SALBUTAMOL TRONG MẪU NƢỚC TIỂU VÀ THỊT LỢN
BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN SỬ DỤNG DETECTOR
ĐỘ DẪN KHÔNG TIẾP XÚC
Chuyên ngành : Hóa Phân Tích
Mã số

: 60440118

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC

Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS. PHẠM THỊ NGỌC MAI

Hà Nội - 2016

2


LỜI CẢM ƠN
Với lòng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn cô giáo, PGS.TS. Phạm
Thị Ngọc Mai đã giao đề tài, nhiệt tình hướng dẫn và tạo mọi điều kiện thuận lợi
giúp em thực hiện luận luận văn này.
Em xin chân thành cám ơn nghiên cứu sinh Nguyễn Thị Quỳnh Hoa đã hỗ
trợ em trong quá trình thực hiện đề tài này.
Em xin chân thành cảm ơn GS. Peter C. Hauser, TS. Mai Thanh Đức và ThS.
Bùi Duy Anh đã thiết kế lắp đặt và hỗ trợ các trang thiết bị cũng như tư vấn kỹ thuật
trong quá trình thực hiện nghiên cứu này.
Em xin chân thành cám ơn công ty 3SAnalysis đã cung cấp thiết bị CE-C4D
cho nghiên cứu này.
Em xin chân thành cảm ơn các thầy, cô trong bộ môn Hóa Phân tích nói
riêng và trong khoa Hóa học nói chung đã dạy dỗ, chỉ bảo và động viên em trong
suốt thời gian em học tập tại trường Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội.
Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, các anh, chị nghiên cứu sinh, các bạn
học viên, các em sinh viên của Bộ môn Hóa phân tích đã luôn động viên tinh thần,
tận tình giúp đỡ em trong thời gian học tập và thực hiện luận văn này.
Hà Nội, ngày 05 tháng 12 năm 2015
Học viên

Dương Thị Nhàn

3


MỤC LỤC
LỜI MỞ ĐẦU ............................................................................................................ 1
CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN................................... Error! Bookmark not defined.
1.1. Tổng quan về Salbutamol ................................ Error! Bookmark not defined.
1.1.1. Giới thiệu chung về Salbutamol ..................... Error! Bookmark not defined.
1.1.2. Vấn đề sử dụng Salbutamol trên thế giới ........ Error! Bookmark not defined.
1.1.3. Vấn đề sử dụng Salbutamol ở Việt Nam ........ Error! Bookmark not defined.
1.2. Các phƣơng pháp xác định Salbutamol ......... Error! Bookmark not defined.
1.2.1. Phương pháp điện hóa ....................................................................................... 5
1.2.2. Phương pháp ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) ....................... 6
1.2.3. Các phương pháp sắc ký ................................................................................... 7
1.2.3.1. Các phương pháp sắc ký lỏng ........................................................................ 7
1.2.3.2. Phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC-MS) .................................................. 8
1.2.4. Các phương pháp điện di mao quản .................................................................. 8
1.3. Phƣơng pháp xác định Salbutamol bằng CE-C4DError! Bookmark not defined.
1.3.1. Cấu tạo và nguyên tắc hoạt động của hệ CE cơ bảnError! Bookmark not defined.
1.3.2. Giới thiệu về detector đo độ dẫn không tiếp xúc C4DError! Bookmark not defined.
1.3.3. Một số công trình xác định Salbutamol bằng CEError! Bookmark not defined.
1.4. Các phƣơng pháp làm giàu chất phân tích .... Error! Bookmark not defined.
1.4.1. Phương pháp chiết lỏng – lỏng ....................... Error! Bookmark not defined.
1.4.2. Phương pháp chiết pha rắn (SPE) .................. Error! Bookmark not defined.
1.4.2.1. Nguyên tắc của chiết pha rắn ...................... Error! Bookmark not defined.
1.4.2.2. Cơ chế của chiết pha rắn ............................. Error! Bookmark not defined.
1.4.2.3. Các loại cột SPE .......................................... Error! Bookmark not defined.

1.4.2.4. Một số công trình làm giàu Salbutamol bằng chiết pha rắnError! Bookmark not defin
CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM ............................. Error! Bookmark not defined.
2.1. Mục tiêu và nội dung nghiên cứu.................... Error! Bookmark not defined.
2.1.1. Mục tiêu nghiên cứu........................................ Error! Bookmark not defined.
2.1.2. Nội dung nghiên cứu ....................................... Error! Bookmark not defined.

4


2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu ................................. Error! Bookmark not defined.
2.2.1. Phương pháp phân tích .................................... Error! Bookmark not defined.
2.2.2. Phương pháp lấy mẫu phân tích ...................... Error! Bookmark not defined.
2.2.3. Phương pháp xử lý mẫu .................................. Error! Bookmark not defined.

2.2.4. Quy trình xử lý mẫu nước tiểu bằng phương pháp chiết pha rắnError! Bookmark not de

2.2.5. Quy trình xử lý mẫu thịt bằng phương pháp chiết pha rắnError! Bookmark not defined.
2.3. Trang thiết bị và hóa chất ............................... Error! Bookmark not defined.
2.3.1. Các dụng cụ và thiết bị được sử dụng ............. Error! Bookmark not defined.
2.3.2. Hóa chất .......................................................... Error! Bookmark not defined.
2.3.2.1. Chất chuẩn ................................................... Error! Bookmark not defined.
2.3.2.2. Hóa chất dung môi ....................................... Error! Bookmark not defined.
2.3.2.3. Chuẩn bị các dung dịch hóa chất ................. Error! Bookmark not defined.

2.4. Các thông số đánh giá độ tin cậy của phƣơng pháp phân tíchError! Bookmark not def

2.4.1. Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ)Error! Bookmark not defined.
2.4.2. Độ lặp lại của phương pháp ............................ Error! Bookmark not defined.
2.4.3. Độ đúng (độ thu hồi) của thiết bị, của phương phápError! Bookmark not defined.
CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ......... Error! Bookmark not defined.

3.1. Đánh giá phƣơng pháp phân tích CE-C4D .... Error! Bookmark not defined.
3.1.1. Xây dựng đường chuẩn cho Salbutamol ......... Error! Bookmark not defined.

3.1.2. Giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn phát hiện (LOQ) của thiết bịError! Bookmark not d
3.1.3. Đánh giá độ lặp lại của thiết bị ....................... Error! Bookmark not defined.
3.2. Nghiên cứu, tối ƣu các điều kiện chiết pha rắn làm giàu Sabutamol trong
mẫu nƣớc tiểu .......................................................... Error! Bookmark not defined.
3.2.1. Khảo sát lựa chọn cột chiết ............................. Error! Bookmark not defined.
3.2.2. Khảo sát đệm chiết .......................................... Error! Bookmark not defined.
3.2.3. Khảo sát quá trình rửa tạp ............................... Error! Bookmark not defined.
3.2.4. Khảo sát dung môi rửa giải ............................. Error! Bookmark not defined.
3.2.5. Đánh giá phương pháp phân tích Salbutamol trong mẫu nước tiểu bằng kĩ
thuật CE-C4D kết hợp chiết pha rắn .......................... Error! Bookmark not defined.

5


3.2.5.1. Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng của phương phápError! Bookmark not defin
3.2.5.2. Đánh giá độ lặp lại của phương pháp ......... Error! Bookmark not defined.
3.2.5.3. Đánh giá độ đúng của phương pháp ............ Error! Bookmark not defined.
3.2.6. Phân tích mẫu thực tế ...................................... Error! Bookmark not defined.
3.3. Nghiên cứu, tối ƣu các điều kiện trong quá trình chiết pha rắn làm giàu
Sabutamol trong mẫu thịt lợn ................................ Error! Bookmark not defined.
3.3.1. Chuẩn bị mẫu .................................................. Error! Bookmark not defined.
3.3.2. Khảo sát lựa chọn cột chiết ............................. Error! Bookmark not defined.
3.3.3. Khảo sát lựa chọn quy trình rửa tạp ................ Error! Bookmark not defined.
3.4. Đánh giá phƣơng pháp phân tích Salbutamol trong mẫu thịt bằng kĩ thuật
CE-C4D ..................................................................... Error! Bookmark not defined.
3.4.1. Đánh giá hiệu suất thu hồi ............................... Error! Bookmark not defined.

3.4.2. Đánh giá độ lặp của phương pháp phân tích Salbutamol bằng CE-C4DError! Bookmark
3.4.3. Kết quả phân tích mẫu thịt lợn thực tế ............ Error! Bookmark not defined.

3.5. Kết quả phân tích đối chứng với phƣơng pháp LC/MS/MSError! Bookmark not defin
KẾT LUẬN .............................................................. Error! Bookmark not defined.
TÀI LIỆU THAM KHẢO ...................................................................................... 11

6


DANH MỤC BẢNG
Bảng 1.1. Các phương pháp phân tích Salbutamol ... Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.1. Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ của Salbutamol.................. Error!
Bookmark not defined.
Bảng 3.2. Giới hạn phát hiện của Salbutamol xác định bằng phương pháp điện di
mao quản CE-C4D .................................... Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.3. Kết quả xác định độ lặp lại của phương pháp CE-C4D trong định lượng
Salbutamol ................................................ Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.4. Kết quả hiệu suất thu hồi của từng loại cột chiếtError! Bookmark not
defined.
Bảng 3.5. Kết quả khảo sát độ lặp lại của phương pháp dựa trên thêm chuẩn
Salbutamol ................................................ Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.6. Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp dựa trên thêm chuẩn
Salbutamol ................................................ Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.7. Kết quả phân tích hàm lượng Salbutamol trong 08 mẫu nước tiểu được
cung cấp. ................................................... Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.8. Kết quả hiệu suất thu hồi của từng loại cột chiếtError! Bookmark not
defined.
Bảng 3.9. Kết quả hiệu suất thu hồi của từng quy trình rửa tạpError!

Bookmark

not defined.
Bảng 3.10. Khảo sát đánh giá độ thu hồi .................. Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.11. Kết quả khảo sát độ lặp lại của phương pháp dựa trên thêm chuẩn
Salbutamol ................................................ Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.12. Kết quả phân tích đối chứng với phương pháp LC/MS/MS........... Error!
Bookmark not defined.

7


DANH MỤC HÌNH
Hình 1.1. Sơ đồ cấu tạo của một hệ thiết bị phân tích điện di mao quản .......... Error!
Bookmark not defined.
Hình 2.1. Các bước chiết pha rắn .............................. Error! Bookmark not defined.
Hình 2.2. Ảnh chụp hệ thiết bị CE-C4D triển khai tại Việt NamError!

Bookmark

not defined.
Hình 3.1. Đường chuẩn của Salbutamol ................... Error! Bookmark not defined.
Hình 3.2. Điện di đồ so sánh kết quả phân tích khi sử dụng (1) cột C18,(2) cột SCX
3ml và (3) cột SCX 6ml ............................. Error! Bookmark not defined.
Hình 3.3. Điện di đồ so sánh kết quả phân tích khảo sát đệm chiết (1) đệm photphat
pH = 6, (2) đệm axetat pH=5,2. ................. Error! Bookmark not defined.
Hình 3.4. Điện di đồ kết quả khảo sát với các quy trình rửa tạp khác nhau (1; 2; 3; 4
tương ứng với quy trình 1; 2; 3; 4) ............ Error! Bookmark not defined.
Hình 3.5. Điện di đồ kết quả khảo sát với các quy trình rửa giải (1; 2; 3 tương ứng
với quy trình 1; 2; 3) .................................. Error! Bookmark not defined.

Hình 3.6. Điện di đồ giới hạn phát hiện Salbutamol trong mẫu nước tiểu ....... Error!
Bookmark not defined.
Hình 3.7. Điện di đồ so sánh kết quả phân tích khi sử dụng(1) cột C 18 , (2) cột SCX
3ml và (3) cột SCX 6ml. ............................ Error! Bookmark not defined.
Hình 3.8. Điện di đồ so sánh kết quả phân tích khi sử dụng các dung dịch rửa tạp
khác nhau (1; 2; 3 tương ứng với quy trình 1; 2; 3).Error! Bookmark not
defined.
Hình 3.9. Điện di đồ so sánh kết quả phân tích khi sử dụng các dung dịch rửa tạp
khác nhau (4; 5; 6 tương ứng với quy trình 4; 5; 6).Error! Bookmark not
defined.
Hình 3.10. Điện di đồ kết quả phân tích mẫu thịt thực tếError!
defined.

8

Bookmark

not


DANH MỤC CHỮ CÁI VIẾT TẮT
Tên viết tắt

Tên đầy đủ

Ace

Acetic

Arg

L- arginin

C4D

Detector đo độ dẫn kết nối kiểu tụ điện

CE

Phương pháp điện di mao quản

EOF

Dòng điện di thẩm thấu

GC

Sắc ký khí

GC-MS

Sắc ký khí khối phổ

HPLC

Sắc ký lỏng hiệu năng cao

HPLC-MS

Sắc ký lỏng hiệu năng cao – khối phổ…

LOD

Giới hạn phát hiện

LOQ

Giới hạn định lượng

LC-MS/MS

Sắc ký lỏng khối phổ ba tứ cực

LC-ESI-MS/MS

Sắc ký lỏng ghép với ion hóa khối phổ

MeOH

Methanol

Ppm

Parts per million: phần triệu

%RSD

% độ lệch chuẩn tương đối

Sal

Salbutamol

SD

Độ lệch chuẩn

UPLC

Sắc ký lỏng siêu hiệu năng

9


LỜI MỞ ĐẦU
Sử dụng chất tạo nạc mà phổ biến là Salbutamol trong chăn nuôi hiện nay
đang là vấn đề nóng của nước ta. Lợn ăn thức ăn có chứa Salbutamol sẽ tăng trọng
nhanh, tỉ lệ nạc cao, thịt có màu đỏ tươi. Tuy nhiên thịt lợn chứa dư lượng
Salbutamol gây ảnh hưởng xấu tới sức khỏe người tiêu dùng như làm tăng huyết áp,
tim đập nhanh, nhức đầu, tay chân run, buồn nôn, rối loạn tiêu hóa... Mặc dù vậy,
một số người chăn nuôi và các thương lái vì lợi nhuận đã bất chấp sức khỏe của
người tiêu dùng, sử dụng Salbutamol trong chăn nuôi gây hoang mang trong dư
luận,. Để đảm bảo sức khỏe cho người dân, lấy lại niềm tin của người tiêu dùng vào
ngành chăn nuôi lợn cũng như đảm bảo tính công bằng cho những người chăn nuôi
chân chính, việc nghiên cứu phát triển quy trình phân tích, kiểm tra hàm lượng
Salbutamol có trong thức ăn chăn nuôi và các đối tượng chăn nuôi, thực phẩm... là
cần thiết. Việc xác định Salbutamol ở nước ta chủ yếu được thực hiện tại các phòng
thí nghiệm bằng phương pháp HPLC với quy trình phân tích phức tạp, giá thành
phân tích cao. Phương pháp điện di mao quản sử dụng detector đo độ dẫn không
tiếp xúc (CE-C4D) gần đây được biết đến là một phương pháp phân tích mới với

nhiều ưu điểm, đã được nghiên cứu, ứng dụng để phân tích Salbutamol trong mẫu
thức ăn chăn nuôi [9, 20]. Tuy nhiên, do nền mẫu nước tiểu, mẫu thịt lợn khá phức
tạp và thường có hàm lượng Salbutamol thấp mà giới hạn phát hiện, giới hạn định
lượng của phương pháp CE-C4D còn hạn chế nên việc phân tích Salbutamol bằng
phương pháp CE-C4D trong các nền mẫu này gặp khó khăn [12, 14]. Vì vậy, việc
nghiên cứu kỹ thuật làm sạch mẫu và làm giàu Salbutamol trong mẫu nước tiểu,
mẫu thịt lợn sẽ làm tăng độ nhạy của phương pháp, giúp xác định được hàm lượng
nhỏ của Salbutamol trong mẫu nước tiểu, mẫu thịt lợn bằng phương pháp CE-C4D,
góp phần quản lý việc sử dụng Salbutamol trong chăn nuôi. Do đó chúng tôi đã lựa
chọn đề tài “Nghiên cứu kỹ thuật làm giàu nhằm xác định Salbutamol trong
mẫu nƣớc tiểu và thịt lợn bằng phƣơng pháp điện di mao quản sử dụng
detector độ dẫn không tiếp xúc”.

10


TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tiếng Việt
1. Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn (2002) - 54/2002/QĐ-BNN – ngày
20/06/2002 – Một số loại kháng sinh, hóa chất cấm sử dụng trong sản xuất và
kinh doanh thức ăn chăn nuôi.
2. Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn (2012) - 649/BNN-CN – ngày
15/03/2012- Kiểm soát chất cấm trong chăn nuôi.
3.

Nguyễn Thị Ánh Hường (2010), Nghiên cứu xác định các dạng asen vô cơ
trong nước ngầm bằng phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn
không tiếp xúc, Luận án Tiến sĩ Hóa học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên ĐHQGHN.

4. Phạm Luận (2005), Cơ sở lý thuyết của Sắc kí điện di mao quản hiệu năng cao,

Giáo trình giảng dạy dành cho sinh viên chuyên ngành Hóa Phân tích, Trường
ĐH Khoa học Tự Nhiên Hà Nội.
5. Phạm Luận, Xử lý mẫu phân tích, Giáo trình giảng dạy dành cho sinh viên
chuyên ngành Hóa Phân tích, Trường ĐH Khoa học Tự Nhiên Hà Nội.
6. Nguyễn Văn Ri (2011), Các kỹ thuật phân tích Điện di, Sách chuyên đề cao
học, Đại học khoa học Tự nhiên - ĐHQG Hà Nội.
7. Nguyễn Văn Ri (2011), Các phương pháp tách sắc ký, Sách chuyên đề cao
học, Đại học khoa học Tự nhiên-ĐHQG Hà Nội.
8. Tạ Thị Thảo (2010), Bài giảng chuyên đề thống kê trong hóa phân tích, ĐH
Quốc gia Hà Nội.
9. Đoàn Thị Tươi, Nguyễn Thị Hằng, Nguyễn Thị Quỳnh Hoa, Phạm Thị Ngọc
Mai, Nguyễn Thị Ánh Hường, Mai Thanh Đức (2015), “Xác Định salbutamol và
ractapamine bằng phương pháp điện di mao quản sử dụng derector độ dẫn không
tiếp xúc (CE-C4D)”, Tạp chí phân tích Hóa, Lý và Sinh học, Tập 20, Số 2.
Tiếng Anh
10. Andy Zhai Agilent Technologies Co.Ltd, “Determination of β2-Agonists in
Pork with SPE Cleanup and LC-MS/MS Detertion”, Food Safety.

11


11. AOAC International (2007), How to meet ISO 17025 requiremments for
method varification, USA
12. ChangYing Guo, Hong Zheng, Li-Gang Deng, Xiao Lu, Shan-Cang Zhao,
Jiang-Sheng Mao, Yu-Tao Wang, Guo-Sheng Yang, Hassan Y.Aboul-Enein
(2010), “UPLS-ESI-MS-MS Determination of three β2-Agonists in Pork”
Chromatography, 72, pp.79-84.
13. Chen Huijing, Fan Sai, Miao Hong, Zhao Yunfeng, Wu Yongning (2012),
“Simultaneous Detection of Residues of 25β-Agonists and 23β2-Blockers in
Animal Foods by High Performance Liquid Chromatography Coupled with

Linear Ion Trap Mass Spectrometry”, Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 60, pp. 1898−1905.
14. Dujuan Zhang, Yanni Teng, Keguang Chen, Sha Liu, Chunmin Wei, Benjie
Wang, Guiyan Yuan, Rui Zhang, Xiaoyan Liu and Ruichen Guo (2011),
“Determination of β β2-Agonists in Pork Using Agilent SampliQ SCX SolidPhase Extraction Cartridges and Liquid Chromatography-Tandem Mass
Spectrometry”, Biomedical Chromatography.
15. Fabiana S. Felix, Maria S.M. Quintino, Alexandre Z. Carvalho, Lúcia H.G.
Coelho, Claudimir L. do Lago, Lúcio Angnes (2006), “Determination of
Salbutamol in syrups by capillary electrophoresis with contactless conductivity
detection (CE-C4D)”,Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 40,
pp. 1288–1292.)
16. J. Pleadin, A. Vulic, N. Persi, S. Terzic, M. Andrisic and I. Zarkovic (2013),
“Rapid Immunoassay Method for the Determination of Clenbuterol and
Salbutamol in Blood”, Journal of Analytical Toxicology, pp.1-5.
17. Mukesh Maithani and ranjit singh (2011), “Development and validation of a
stability- Indicating HPLC method for the simultaneous determination of
salbutamol sulphate and theophylline in pharmaceutical dosage forms”, J Anala
Bioanal Techniques, pp.1-5

12


18. Niyazi yilmaz, Sibel a.ozlan, Bengi usluz, uhre senturk and Inci biryol (1998),
“Voltammetric Determination of Salbutamol Based on Electrochemical Oxidation
at Platinum and Glassy Carbon Electrodes” Tr. J. of Chemistry, pp. 175-182.
19. Peter Mikus, Iva Valaskova , Emil Havranek (2005), “Determination of
Salbutamol in Pharmaceuticals by Capillary Electrophoresis”, Arch. Pharm.
Chem. Life Sci, 338, 498−501.
20. Thi Anh Huong Nguyen, Thi Ngoc Mai Pham, Thi Tuoi Doan, Thi
Thao Ta, Jorge Sáiz, Thi Quynh Hoa Nguyen, Peter C. Hauser, Thanh

Duc Mai (2014) “Simple semi-automated portable capillary electrophoresis
instrumentwith contactless conductivity detection for the determination of βagonists

in

pharmaceutical

and

pig-feed

samples.” Journal

of

Chromatography A, 1360 (2014) 305–311).
21. Tianshu Zhou, Qin Hu, Hui Yu, Yuzhi Fang (2001), “Separation and
determination of β -agonists in serum by capillary zone electrophoresis with
amperometric detection”, Analytica Chimica Acta , 441, pp. 23–28)
22. Tomasz „Sniegocki, Andrzej Posyniak and Jan Zmudzki (2005), “Improved gas
chromatography – mass spectrometry method for the determination of
clenbuterol and salbutamol in animal urine”, Bull vet Inst Pulawy 49,443-447.
23. Weiyu Wang, Yulian Zhang, Jinyan Wang, Xue Shi, Jiannong Ye (2010),
“Determination of β-agonists in pig feed, pig urine and pig liver using capillary
electrophoresis with electrochemical detection”, Meat Science, 85, pp. 302–305.)
24. Wu bugang and Melinda meador (2011), List of veterinary drugs banned for
use foof animals, global agricultural information network, Beijing.
25. Yung Yang, Noella Rosales-Cỏnrado, Vanesa Gullé-Casla, María Eugenla
León-González, Luls Vlcente Pérez-Arrlbas, Luls Marfa Plo-Dfez(2012),
“Chiral Determination of Salbutamol, Salmeterol and Atenololby TwoDimensional LC–LC: Application to Urine Samples”, Chromatographia 75,

pp.1365-1375.

13


26. />f_14_01.html
27. />
14