Các ký thuật cơ bản trong điện di

§ iÖn di
Chu Hoang Mau Ph.D
Molecular Biologist

Department of Education, Genetics and Modern Biology

Faculty of Biology and Agrotechnology


Điện di
là gì?


Hiện tợng các phân tử dịch chuyển trên giá
thể trong môi trờng có dòng điện chạy qua.



Giá thể có thể là:





Giấy



Gel (acrylamide, agar, agarose, tinh bột)

Kỹ thuật điện di cho phép tách đợc các tiểu

phần có khối lợng phân tử khác nhau, dùng
cho các nghiên cứu, phân tích những tiểu
phần đó.


Nguyên tắc điện di


Tốc độ dịch chuyển khác nhau theo khối l
ợng phân tử của các tiểu phần.



Điện di một chiều: (-)



Các tiểu phần có thể tích điện (-) hoặc
(+) cho nên phải làm cho tất cả các tiểu
phần tích điện (-) bằng cách phủ lên các
tiểu phần chất SDS (Soudium dedoxyl
sunphate)

(+)


Thiết bị và vật liệu điện
di

Máy điện di



Bộ nguồn điện



Kỹ thuật chế gel điện di bao gồm các
bớc:


(1) Lắp ráp khuôn gel



(2) tạo gel



(3) đổ gel


Điện di DNA
Đặc điểm cấu trúc của ADN


DNA đợc cấu tạo từ các nucleotide

DNA mạch kép có các cặp base liên kết với
nhau bằng các cầu nối hydrro



Để tính kích thớc phân tử DNA ngời ta
dùng đơn vị bp (base pair)- cặp base,
cặp nucleotide. 1 Kb (kilo base) = 1000
bp


T¸ch chiÕt ADN


T¸ch chiÕt ADN tõ m« sèng



KiÓm tra b»ng quang phæ hÊp thô ë
260 nm



Ph©n tÝch diÖn di ®Ó kh¼ng ®Þnh
dung dÞch chøa ADN


Chế tạo bản gel agarose

Bột agarose đợc đun cùng với dung dịch
đệm chứa SDS 0,8%; 1,0%; 1,5%.



Đổ bản gel



Lắp ráp vào máy điện di



Chạy điện di



Chụp ảnh để phân tích


Preparation of an agarose


H×nh ¶nh ®iÖn di ADN


H×nh ¶nh ®iÖn di ADN

§iÖn di Protein

Ph¬ng ph¸p


Cấu trúc và đặc tính của protein



Cấu tạo từ khoảng 20 loại acid amin



Cấu trúc bậc I, II, III, IV. Bậc IV gồm nhiều
chuỗi polypeptid



Chuỗi polypeptid có thể tích điện (+)
hoặc (-)


Quy tr×nh ®iÖn di protein

DiÖn di
ChiÕt
protein

BiÕn
tÝnh

ë thÕ
hiÖu
kh¸c

protein

nhau

Chôp
anh vµ
ph©n
tÝch kÕt
qua
thµnh
phÇn
®iÖn di
protein


Chiết protein


Protein chiết từ mẫu tơi bằng dung dịch
đệm ở 40C (NaCl, H2O, Tris.HCl) trong
24h.



Ly tâm thu dịch chứa protein.

Dịch chứa protein đợc bảo quản ở 200C.


T¹o b¶n gel, tra mÉu vµ ch¹y
®iÖn di
ChÕ gel (gel c« vµ gel t¸ch)


§æ gel gåm 2 líp.



§a b¶n gel vµo bé phËn ®iÖn di



Tra mÉu vµo giÕng



Ch¹y ®iÖn di



Chôp ¶nh ®Ó ph©n tÝch

Hinh anh phæ ®iÖn di protein chiÕt b»ng níc cÊt
cña c¸c dßng ®Ëu xanh ®ét biÕn (M. marker; 1. Mì
gièng gèc; 2. MX10; 3. MXU21; 4. MXE01; 5. MX1608, 6.
MX1103; 7. Tiªu gièng gèc; 8. TXU21; 9. TX16012. (

: bang mÊt ®i
(Chu Hoµng MËu,2000)

: bang xuÊt hiÖn )


H×nh ¶nh ®iÖn di protein ë lóa


H×nh ¶nh ®iÖn di protein ë l¹c