Phương pháp nhuộm giemsa – chẩn đoán ký sinh trùng đường máu

PHƯƠNG PHÁP NHUỘM GIEMSA – CHẨN ĐOÁN KÝ SINH TRÙNG ĐƯỜNG MÁU
1. Ứngdụng
Tìmkýsinhtrùngđườngmáu: Lêdạngtrùng ở bò, chó; Biêntrùng ở bò; Theileria ở bò;
Tiênmaotrùng.
2. Dụngcụchuẩnbị
Độngvậtthínghiệmđểlấymáu
Xi-lanh, kim, daomổ/kéo, panh
Phiếnkínhsạch, lamen, KHV, dầusoikính, giáphơiphiếnkính
ThuốcnhuộmGiemsa, Cồntuyệtđốihoặc 90° (cồnMetanol)
3. Tiếnhành
a. Cáchlấymáu
i. Nênlấymáukhi con vậtbịsốt. (bệnhTheileriathìlấymáusaungàythứ 3 từkhi
con vậtsốt)
ii. TrướcvàsaukhilấymáuphảisáttrùngnơilấymáubằngEtehoặccồn 70°.
iii. Lấymáutĩnhmạch tai đốivớitrâu, bò, ngựa, lợn, thỏ; lấy ở
cánhđốivớigiacầm; Vớitrâu, bò, dêcừucóthểlấy ở tĩnhmạchcổ;
Vớichuộtbạchcóthểlấymáubằngcáchcắtchópđuôi.
b. Dànmáu
i. Lấymộtgiọtmáuđườngkínhkhoảng
2
–
4mm
nhỏlênbềmặtphiếnkínhcáchmộtđầuchừng0,5cm.
(trườnghợpkínhmàithìcầnxácđịnhchínhxácmặtkính)
ii. Dùngmépmộtlákínhphẳngđặt
ở
phíatráigiọtmáu,
đẩyngượctrênphiếnkínhvớigócgiữaphiếnkínhvàlákínhkhoảng 40 - 45°
sauđóđểmáukhôtựnhiên.
iii. Cốđịnhtiêubảnbằngcồntuyệtđốitrongkhoảng 2 – 5 phút
iv. Dùngbútmựcviếtnhãnlênphiếnkính.

c. Nhuộmtiêubảnđãphếtkính
i. NhỏthuốcnhuộmGiemsa
(cầnphaloãngthuốcnhuộmtheochỉdẫncủanhàsảnxuấtnếucầnthiết)
lênbềmặttiêubảnđãđượcphiếtkính. Để 15 – 20 phút (Giemsađặc) hoặc 1h
(Giemsaloãng).
d. Rửa
i. Dùngnướccấttrungtínhđểrửa.
Khôngđổmạnhnước,
khônggiộinướctrựctiếpvàochỗphiếtkính.
ii. Đểtiêubảnkhôtựnhiên, tránhbụi, nắng.
4. Kiểmtratiêubảnphiếtkính
Sửdụngkínhhiểnvivớivậtkính
40x
hoặc
100x
kếthợpvớidầusoikínhđểkiểmtravàtìmkýsinhtrùng.
Thaotácphiếtkính