Tài liệu PHÂN BIỆT CÁC LOẠI THỊT HEO, BÕ, CỪU BẰNG PHƯƠNG PHÁP MULTIPLEX PCR ppt

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
***000***







KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP





PHÂN BIỆT CÁC LOẠI THỊT HEO, BÕ, CỪU BẰNG
PHƢƠNG PHÁP MULTIPLEX PCR








Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC

Khóa: 2003 – 2007
Sinh viên thực hiện: TRỊNH THỊ THANH HUYỀN










Thành phố Hồ Chí Minh
09/2007




BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
***000***






KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

PHÂN BIỆT CÁC LOẠI THỊT HEO, BÕ, CỪU BẰNG
PHƢƠNG PHÁP MULTIPLEX PCR






Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện:
PGS. TS. NGUYỄN NGỌC TUÂN TRỊNH THỊ THANH HUYỀN
KS. LƢƠNG QUÝ PHƢƠNG













Thành phố Hồ Chí Minh
09/2007
iii

LỜI CẢM ƠN

Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến:
Thầy PGS.TS. Nguyễn Ngọc Tuân, Giảng viên khoa Chăn nuôi thú y,
trƣờng Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh.
Cô PGS.TS Trần Thị Dân, Giảng viên khoa Chăn nuôi thú y, trƣờng Đại
Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh.
KS. Lƣơng Quý Phƣơng, Trung tâm Phân tích thí nghiệm hóa sinh trƣờng
Đại Học Nông Lâm
Đã tận tình hƣớng dẫn, ủng hộ và giúp đỡ tôi thực hiện và hoàn thành tốt khóa
luận tốt nghiệp.

Xin chân thành cảm ơn:
- Ban Giám Hiệu trƣờng Đại Học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh, Ban Chủ
Nhiệm Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học, cùng tất cả quý thầy cô đã truyền đạt những
kiến thức quý báu cho tôi trong suốt thời gian học tại trƣờng.

- Ban giám đốc, thầy cô và các cán bộ công chức Trung tâm phân tích thí
nghiệm hóa sinh trƣờng Đại Học Nông Lâm, đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi thực
tập và hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp .

- Thầy Đinh Xuân Phát đã nhiệt tình giúp đỡ, động viên tôi trong quá trình
học tập cũng nhƣ thực hiện khóa luận.

Tập thể các bạn sinh viên lớp Công nghệ sinh học 29 - Trƣờng Đại học
Nông Lâm TP. HCM đã luôn bên tôi những lúc khó khăn, cùng tôi chia sẻ vui buồn
trong quá trình học và quá trình thực hiện khóa luận.

Và đặc biệt con xin thành kính ghi ơn Cha Mẹ đã sinh thành, dƣỡng dục
con nên ngƣời, để con đƣợc nhƣ ngày hôm nay.




Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 09 năm 2007.
Sinh viên: Trịnh Thị Thanh Huyền.
TÓM TẮT KHÓA LUẬN
TRỊNH THỊ THANH HUYỀN, thực hiện khóa luận “Phân biệt ba loại
thịt heo, bò cừu bằng phƣơng pháp multiplex PCR”.
Hƣớng dẫn khoa học: PGS. TS. Nguyễn Ngọc Tuân
KS. Lƣơng Quý Phƣơng
Thời gian thực hiện từ tháng 2/2007 đến tháng 8/2007, tại Trung tâm Phân
tích Thí nghiệm Hóa – Sinh, trƣờng Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh.
Để tạo tiền đề trong việc giải quyết vấn đề gian lận thƣơng mại đối với sản
phẩm thịt tƣơi và thịt chế biến, bƣớc đầu chúng tôi tiến hành thiết lập quy trình
phân biệt ba loại thịt heo, bò, cừu bằng phƣơng pháp multiplex PCR.
Kết quả đạt đƣợc nhƣ sau:
1) Tách chiết DNA từ thịt tƣơi và thịt đã xử lý nhiệt ở nhiệt độ: 80
0
C/15’,
120
0
C/15’, 120
0
C/30’, 130
0
C/15’ với tỷ số OD trung bình là 2,0 (thịt tƣơi), 1,9 (thịt

xử lý nhiệt)- tinh sạch, đạt tiêu chuẩn.
2) Sau khi tiến hành tối ƣu hóa phản ứng multiplex PCR bằng việc thử nghiệm
nhiều quy trình (gồm quy trình của Matsunaga và ctv (1998) và các thử nghiệm điều
chỉnh về thành phần hóa chất, nhiệt độ và thời gian của chu trình nhiệt, nồng độ mồi
trong phản ứng), chúng tôi đã xác định đƣợc quy trình thích hợp, trong đó nồng độ
MgCl
2
2mM, lƣợng FSIM: RP: RB: RS lần lƣợt là 0,4: 0,83: 0,24: 0,17 M, nhiệt
độ và thời gian của chu kỳ nhiệt ở giai đoạn lặp lại là: biến tính (94
0
C/1phút), bắt
cặp (54
0
C/45giây), kéo dài (72
0
C/1phút).
3) Sử dụng quy trình nultiplex PCR vừa tìm đƣợc đối với các hỗn hợp DNA của
cả ba loài trong đó nồng độ DNA bò, cừu giảm dần và đã xác định đƣợc nồng độ
của thịt cừu, bò mà quy trình này còn phát hiện đƣợc là 1ng/ l.
4) Chúng tôi tiếp tục thực hiện quy trình trên đối với các hỗn hợp thịt đã xử lý
nhiệt ở các nhiệt độ khác nhau và rút ra kết luận là ở các nhiêt độ biến tính
80
0
C/15’, 120
0
C/15’, 120
0
C/30’, 130
0
C/15’ vẫn còn phân biệt đƣợc ba loài trên.