4 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH GMP WHO

Supplementary Training Modules on
Good Manufacturing Practice

Validation

WHO Technical Report Series,
No. 937, 2006. Annex 4.
Validation

|

Slide 1 of 27

August 2006


Validation
 Part 1. General overview on qualification and validation
 Part 2. Qualification of HVAC and water systems
 Part 3. Cleaning validation
 Part 4. Analytical method validation
 Part 5. Computerized system validation
 Part 6. Qualification of systems and equipment
 Part 7. Non sterile product process validation

Validation

|

Slide 2 of 27

August 2006


Supplementary Training Modules on
Good Manufacturing Practice

Thẩm định phương pháp phân tích
Analytical Method Validation
Part 4
WHO Technical Report Series, No. 937,
2006. Annex 4 Appendix 4
Validation

|

Slide 3 of 27

August 2006


Validation

Mục tiêu Objectives
Để thảo luận về các khía cạnh khác nhau của xác nhận phương pháp
phân tích bao gồm: To discuss various aspects of analytical method
validation including:
 Nguyên tắc thẩm định phương pháp phân tích Principles of analytical
method validation
 Phương pháp dược điển Pharmacopoeia methods
 Phương pháp khơng có trong DĐ Non-pharmacopoeia methods

 Các cách tiếp cận xác nhận phương pháp phân tích Approaches to
analytical method validation
 Đặc trưng của quy trình phân tích Characteristics of analytical procedures

Validation

|

Slide 4 of 27

August 2006


Validation
Ngun tắc Principle
 Hướng dẫn trình bày thơng tin về các đặc điểm được xem xét (có
thể tuân theo các cách tiếp cận khác) Guideline presents
information on the characteristics to be considered (other
approaches may be followed)
 Các nhà sản xuất để chứng minh - quy trình phân tích phù hợp với
mục đích dự kiến của nó (thẩm định) Manufacturers to
demonstrate - analytical procedure is suitable for its intended
purpose (validation)
 Thẩm định các phương pháp phân tích - cho dù chúng có chỉ ra
sự ổn định hay khơng Validate analytical methods - whether they
indicate stability or not
 Được R&D thẩm định trước khi chuyển cho đơn vị kiểm tra chất
lượng khi thích hợp Validated by R&D before being transferred
1.1 – 1.4 to
the quality control unit when appropriate

Validation

|

Slide 5 of 27

August 2006


Validation
General

 Thông số kỹ thuật cho vật liệu và sản phẩm, với các phương pháp
kiểm tra tiêu chuẩn Specifications for materials and products, with
standard test methods
 Nhà sản xuất sử dụng “quy cách và phương pháp dược điển”,
hoặc “quy cách và phương pháp phi dược điển” được phát triển
phù hợp theo sự chấp thuận của cơ quan quản lý dược quốc gia
Manufacturer to use “pharmacopoeial specifications and
methods”, or suitably developed “non-pharmacopoeial
specifications and methods” as approved by the national drug
regulatory authority
 Sử dụng các vật liệu chuẩn được đặc trưng tốt, với độ tinh khiết
đã được ghi chép lại, trong nghiên cứu thẩm định Use wellcharacterized reference materials, with documented purity, in the
validation
study August 2006
Validation
|
Slide 6 of 27
2.1 – 2.3

Validation
General (2)
 Kiểm tra bao gồm: Tests include:
– kiểm tra nhận dạng identification tests
– Phân tích dược chất và dược phẩm assay of drug substances and
pharmaceutical products
– hàm lượng tạp chất và giới hạn kiểm tra tạp chất content of
impurities and limit tests for impurities
– thử nghiệm hòa tan và xác định kích thước hạt dissolution testing
and determination of particle size
 Kết quả phải đáng tin cậy, chính xác và có thể lặp lại Results
should be reliable, accurate and reproducible

2.4 – 2.5

Validation

|

Slide 7 of 27

August 2006


Validation
General (3)
 Khi nào nên xác minh hoặc thẩm định lại? When should verification or
revalidation be done?

– Thay đổi trong quy trình tổng hợp dược chất changes in the process for
synthesis of the drug substance
– Thay đổi trong thành phần của sản phẩm cuối cùng changes in the
composition of the finished product
– Thay đổi quy trình phân tích changes in the analytical procedure
– Chuyển giao phương pháp từ phòng TN này sang phòng TN khác transfer
of methods from one laboratory to another
– những thay đổi trong các phần chính của dụng cụ thiết bị changes in
major pieces of equipment instruments
 Mức độ phụ thuộc vào bản chất của sự thay đổi Extent depends on the
nature of the change(s)
 Bằng chứng về “sự thành thạo của nhà phân tích” Evidence of “analyst
2.6 – 2.8
proficiency”
Validation

|

Slide 8 of 27

August 2006


Validation

Pharmacopoeial/Non-pharmacopoeial methods

 Pharmacopoeial methods:
– chứng minh rằng các phương pháp này phù hợp để sử dụng thường
xun trong phịng thí nghiệm (xác minh) prove that the methods are

suitable for routine use in the laboratory (verification)
– để xác định hàm lượng hoặc tạp chất trong sản phẩm, hãy chứng
minh rằng phương pháp đó dành riêng cho chất đang được xem xét
(khơng có sự can thiệp của giả dược) for determination of content or
impurities in products, demonstrate that method is specific for the
substance under consideration (no placebo interference)
 Non-pharmacopoeial methods:
– Cần được thẩm định một cách thích hợp Should be appropriately
validated
3. – 4.

Validation

|

Slide 9 of 27

August 2006


Validation
Method validation
 Đề cương: Bao gồm quy trình và tiêu chí chấp nhận Protocol: includes
procedures and acceptance criteria
 Báo cáo: Hồ sơ kết quả Report: documented results
 Cần có sự biện minh khi sử dụng các phương pháp không dùng dược điển (nếu
có các phương pháp trong dược điển). Biện minh để bao gồm dữ liệu, ví dụ: so
sánh với dược điển hoặc các phương pháp khác Justification needed when nonpharmacopoeial methods are used (if pharmacopoeial methods are available).
Justification to include data, e.g. comparisons with the pharmacopoeial or other
methods

 Chi tiết phương pháp kiểm tra tiêu chuẩn gồm: Detailed standard test methods
include:
– điều kiện sắc ký, thuốc thử và các điều kiện khác chromatographic conditions,
reagents and others
5.1 – 5.3

Validation

|

Slide 10 of 27

August 2006


Validation
Các đặc điểm cần được xem xét trong quá trình xác nhận các
phương pháp phân tích bao gồm: Characteristics that should be
considered during validation of analytical methods include:
–
–
–
–
–
–
–
–

Tính đặc hiệu specificity
Tính tuyến tính linearity

Khoảng xác định range
Độ đúng accuracy
Độ chính xác precision
Giới hạn phát hiện detection limit
Giới hạn định lượng quantitation limit
Độ thô robustness
6.1

Validation

|

Slide 11 of 27

August 2006


Validation
Độ đúng: là mức độ phù hợp của kết quả thử
nghiệm với giá trị thực, hoặc mức độ gần của kết
quả thu được của quy trình với giá trị thực. Nó
thường được thiết lập trên các mẫu vật liệu cần
kiểm tra đã được chuẩn bị với độ chính xác định
lượng. Độ đúng phải được thiết lập trong phạm vi
quy định của quy trình phân tích. Accuracy: is the
degree of agreement of test results with the true
value, or the closeness of the results obtained by
the procedure to the true value. It is normally
established on samples of the material to be
examined that have been prepared to quantitative

accuracy. Accuracy should be established across
the specified range of the analytical procedure.
Note: it is acceptable to use a “spiked” placebo
where a known quantity or concentration of a
reference material is used.
Validation

|

Slide 12 of 27

August 2006

Accurate but
imprecise
6.1.1


Validation
Độ chính xác: là mức độ thống nhất giữa các
kết quả riêng lẻ. Quy trình hồn chỉnh phải
được áp dụng nhiều lần để tách các mẫu
giống hệt nhau được lấy từ cùng một lơ vật
liệu đồng nhất. Nó phải được đo bằng sự phân
tán của các kết quả riêng lẻ từ giá trị trung
bình (phân nhóm tốt) và được biểu thị bằng độ
lệch chuẩn tương đối (RSD).
Precision: is the degree of agreement among
individual results. The complete procedure
should be applied repeatedly to separate,

identical samples drawn from the same
homogeneous batch of material. It should be
measured by the scatter of individual results
from the mean (good grouping) and expressed
as the relative standard deviation (RSD).

Validation

|

Slide 13 of 27

August 2006

6.1.2

Inaccurate but
precise


Validation
Độ chính xác Precision:
 Độ lặp lại: Tối thiểu chín phép xác định bao gồm phạm vi quy định cho
quy trình, ví dụ: Repeatability: A minimum of nine determinations
covering the specified range for the procedure, e.g.
– mỗi lần ba nồng độ / ba lần lặp lại, hoặc tối thiểu sáu lần xác định ở
100% nồng độ thử nghiệm three concentrations/three replicates each,
or a minimum of six determinations at 100% of the test concentration
 Độ chính xác trung bình: Các biến thể trong phịng thí nghiệm
Intermediate precision: Within-laboratory variations

– thường vào những ngày khác nhau, các nhà phân tích khác nhau và
thiết bị khác nhau. (Nếu độ tái lập được đánh giá, thì khơng cần đo độ
chính xác trung gian.) usually on different days, different analysts and
different equipment. (If reproducibility is assessed, a measure of
intermediate precision is not required.)
6.1.2.1 – 6.1.2.3
 Độ tái lập: Độ chính xác giữa các phịng thí nghiệm Reproducibility:
Precision between laboratories

Validation

|

Slide 14 of 27

August 2006


Validation
Accurate and Precise

Validation

|

Slide 15 of 27

August 2006

Validation
Độ thơ Robustness (or ruggedness):
là khả năng của quy trình cung cấp các kết quả phân tích có độ
chính xác và độ chính xác chấp nhận được trong nhiều điều kiện
khác nhau. Kết quả từ các mẫu riêng biệt bị ảnh hưởng bởi những
thay đổi trong điều kiện hoạt động hoặc môi trường. Độ thô cần
được xem xét trong giai đoạn phát triển và phải cho thấy độ tin cậy
của phân tích khi các biến thể có chủ ý được thực hiện trong các
tham số phương pháp. is the ability of the procedure to provide
analytical results of acceptable accuracy and precision under a
variety of conditions. The results from separate samples are
influenced by changes in the operational or environmental
conditions. Robustness should be considered during the
development phase, and should show the reliability of an analysis
6.1.3
when deliberate variations are made in method parameters.
Validation

|

Slide 16 of 27

August 2006


Validation
Các yếu tố có thể ảnh hưởng đến độ thơ khi thực hiện phân tích sắc ký
bao gồm: Factors that can have an effect on robustness when performing

chromatographic analysis include:

– độ ổn định của các mẫu và dung dịch thử nghiệm và tiêu chuẩn stability of test
and standard samples and solutions
– thuốc thử (ví dụ: các nhà cung cấp khác nhau) reagents (e.g. different
suppliers)
– các cột khác nhau (ví dụ: các lô và / hoặc nhà cung cấp khác nhau different
columns (e.g. different lots and/or suppliers)
– thời gian khai thác extraction time
– sự thay đổi của pH của pha động variations of pH of a mobile phase
– sự thay đổi trong thành phần pha động variations in mobile phase composition
– Nhiệt độ temperature
– Lưu lượng dòng chảy flow rate
6.1.3.1
Validation

|

Slide 17 of 27

August 2006


Validation

Sự tuyến tính Linearity:

cho biết khả năng tạo ra kết quả tỷ lệ thuận với nồng độ của chất
phân tích trong mẫu indicates the ability to produce results that
are directly proportional to the concentration of the analyte in
samples
– Một loạt mẫu phải được chuẩn bị trong đó nồng độ chất phân tích

nằm trong khoảng cơng bố của quy trình. Nếu có mối quan hệ tuyến
tính, kết quả thử nghiệm cần được đánh giá bằng các phương pháp
thống kê thích hợp A series of samples should be prepared in which
the analyte concentrations span the claimed range of the procedure.
If there is a linear relationship, test results should be evaluated by
appropriate statistical methods
– Nên sử dụng tối thiểu năm nồng độ A minimum of five
concentrations should be used
Validation

|

Slide 18 of 27

August 2006

6.1.4


Validation

Table of values (x,y)

Validation

|

Slide 19 of 27

August 2006

x

y

 
#

Reference
material mg/ml

Calculated
mg/ml

1

0.0100

0.0101

2

0.0150

0.0145

3

0.0200

0.0210

4

0.0250

0.0260

5

0.0300

0.0294

6

0.0400

0.0410


Validation
Khoảng xác định Range:

là biểu hiện của mức thấp nhất và cao nhất của chất
phân tích đã được chứng minh là có thể xác định được
đối với sản phẩm is an expression of the lowest and
highest levels of analyte that have been demonstrated
to be determinable for the product
Phạm vi được chỉ định thường được lấy từ các nghiên

cứu tuyến tính The specified range is normally derived
from linearity studies
6.1.5

Validation

|

Slide 20 of 27

August 2006


Validation
Tính đặc hiệu Specificity (selectivity):

là khả năng đo lường rõ ràng chất phân tích mong muốn khi
có mặt các thành phần như tá dược và tạp chất cũng có thể
có mặt. is the ability to measure unequivocally the desired
analyte in the presence of components such as excipients
and impurities that may also be expected to be present.
Một cuộc điều tra về tính đặc hiệu phải được tiến hành trong
q trình thẩm định các phép thử nhận biết, xác định tạp
chất và thử nghiệm. An investigation of specificity should
be conducted during the validation of identification tests,
the determination of impurities and assay
6.1.6

Validation

|

Slide 21 of 27

August 2006


Giới hạn phát hiện Detection limit (limit of detection):

Validation

là lượng nhỏ nhất của chất phân tích có thể được phát hiện, và
không nhất thiết phải xác định, theo cách định lượng is the smallest
quantity of an analyte that can be detected, and not necessarily
determined, in a quantitative fashion
Phương pháp tiếp cận (công cụ hoặc không công cụ): Approaches
(instrumental or non-instrumental):
– Đánh giá trực quan visual evaluation
– tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu signal to noise ratio
– độ lệch chuẩn của đáp ứng và độ dốc standard deviation of the response
and the slope
– độ lệch chuẩn của khoảng trống standard deviation of the blank
– Đường chuẩn calibration curve


6.1.7
Validation

|

Slide 22 of 27

August 2006


Validation

Giới hạn định lượng

Quantitation limit (limit of quantitation):

là nồng độ thấp nhất của chất phân tích trong mẫu có thể được
xác định với độ chính xác và độ chính xác chấp nhận được is
the lowest concentration of an analyte in a sample that may be
determined with acceptable accuracy and precision
 Phương pháp tiếp cận (công cụ hoặc không công cụ):
Approaches (instrumental or non-instrumental):
– Đánh giá trực quan visual evaluation
– tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu signal to noise ratio
– độ lệch chuẩn của đáp ứng và độ dốc standard deviation of the
response and the slope
– độ lệch chuẩn của khoảng trống standard deviation of the blank
– Đường chuẩn calibration curve
6.1.8

Validation

|

Slide 23 of 27

August 2006


Validation
LOQ, LOD and SNR

 Limit of Quantitation
 Limit of Detection

Peak B
LOQ

 Signal to Noise Ratio

Peak A
LOD
Baselin
e
Validation

|

Slide 24 of 27

noise

August 2006

Validation

Bảng 1. Các đặc điểm cần xem xét trong quá trình xác nhận phân tích Table 1. Characteristics to consider during analytical validation

Loại quy trình phân tích

Định tính

Thử tạp chất

Định lượng
- Độ hòa tan (chỉ đo lường)
Các chỉ tiêu
 
Định lượngGiới hạn
- Hàm lượng/hoạt lực
Độ đúng
+
+
Độ chính xác
 
 
 
 
Dấu (-) nhằm chỉ các chỉ tiêu này thường không cần phải đánh giá
Độ lặp lại
+
+
Dấu (+) nhằm achỉ các chỉ tiêu này cần phải đánh giá
Độ chính xác trung gian

 
+
+
a
Trong TH đã tiến hành
cần độ chính xác trung
Tính đặchiệu
+ một nghiên cứu
+ về độ tái+lặp, thì khơng
+
Giới hạngian.
phát hiện
-b
+
Giới hạnđịnh
b có thể
lượng
+
cần thiết trong -một số trường hợp
Tính tuyến tính
+
+
Khoảng xác định
+
+

6.2
Validation

|

Slide 25 of 27

August 2006