Điện Di Trên Agarose gel
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (1.14 MB, 18 trang )
Ứng dụng của Điện di
!"
#!$
%&'()*
)+,!-./ 0(12#/ 3*
4567 * 47
8.9:56 ;<=
"- * >7!9
)? ;<
* ( @9A42&
B
•
C62D27
•
* 4&"E)
* ( @9
•
FGHI;9
•
FG49J)G"!B
* :4IK2*
L##*9.
/ -H:, @9"L9I
2M;2J#!$J92"$
L#N G*
O"O 9"L9E
!PB56Q 9
8O!94IR S#:T
U- 9;VWX56
#!$!VYX
Ở mọi cơ thể sinh vật, vật chất sống được cấu tạo từ các đại phân tử sinh học, trong đó quan trọng nhất là
nucleic acid và protein Vì vậy việc *m hiểu, phân +ch các phân tử DNA, RNA là rất cần thiết. Khi hiểu rõ cấu
trúc, đặc điểm của các đại phân tử này, chúng ta có thể kết hợp với sự phát triển các kỹ thuật, các công
nghệ hiện đại để =ến hành lai tạo, chọn giống mới, sản xuất các hợp chất thứ cấp dùng trong y học, sản xuất
các chất kháng sinh…
IR < * 5,<294/ IZ
* 4& @94!IK
)+,4IR M4<#* 564G)4<7
* 47#04= :"6 * #!$56 * "$
9 ! ;[)/ IZ )"IRJ4/ 56 -
\ @9 L
Nguyên tắc
thực hiện
F],474&K56"N )^ @94!IK* 4&56 *
#0/ 456)/ IZ"_ @9<B`$"a
Các phân tử âm hay dương trong một điện trường sẽ di chuyển trong gel với vận tốckhác nhau nhờ vào sự
khác nhau của:
•Lực điện trường tác động lên chúng(nếu các phân tử +ch điện khác nhau)
•Kích thước của phân tử so với kích thước của lỗ gel
•Hình dạng, độ cồng kềnh của phân tử
!"
!$"99!$
)U#* $"
WY:#bcY):
!$"
#"9 !"92$)U
#* $"W:#bV):
6!9 A4!!IK
3`def
d"$e$"$"f"$ !#$
a
!" #$%&'$()&
$()&
g9!$`#"9 9!$a >)"IR#03-#3hVcYYYY9
gd"2$!27 i)G:"#9$>9 '99 3$)j9"6g9"9 $56kJlg
9!gCg9"9 $
g8-!L 99!$)G4m-5n9/ 45n9!A9!#0 > '9>2o9J2$3"J
9 :3"62"IRo9!99!$4IR "6 h4&7 @999!$ h6 6-#\ -"IR
6 9IK!99!$ > '9YYpXo9
g9!$"62&#"2$!/7/4G( @999!
9!$4IR * !9[77 n2&"6:<4?J= !:<J4IR \2-789"o!9562B
4G q
$()&&'
9!$$""62& -!=
!2KI99!J4IR 76
)_R#99!$56IZ `= 42
4a4IR 4>ZrVYY569
4>4IR "62"7s7$"3-[
)pYgpW
9!$$""62&"7$"G
(-J2&#E9* 4;
JIKM4<#*
.47 >)/ IZ !
)YWbcY):
8* #0 "$ 9 >
)"IR564/ )*
94IR * !9)
<n N 29 N
I; @94!
2&4!IK >4S
56 IK4&/ R#
*+,-#./0,#.*1"2**-+3 !" #$($()&
&'
8* #0 >
)/ IZ 6"Z
`)"IR#0"Za
\ 4& <
6 ,2
729)/ IZ -
4j <[ * 4&
)* 9Q9 * :$" '9 *
m4&99!$)* 9m4&
99!$ 9 >)U#*
* 47?56IR "7
8* 75A4>J
5A4'5627 i
> M2&)"IR
#0j <!
99!$$"[ * 4&
)* 9
45*#6*7#8 9-: ;1$()&
<=>#?* ! !"
Agarose
Lược
Khuôn gel
Máy điện di
@-+#$: !"
Chuẩn bị agarose
Đt mu DNA vo giếng
Nhuộm DNA bằng EtBrQuan sát và chụp hình
8>B"799!$)* 9
/ R#4< 74J"7
99!$M-!/
2"6#$gttg99!$ >&
u2--#
6 !956762& !J
)SQ"6$"46m,2 /[ * m4&-#
::u:["#9$#"9 9!$`da
;.9d A' S * $v2$I"9$J
#"2$!9$56wf
type-II-
agarosedbbnbởisulphat
e
8
polysaccharides (SP),hơnn!aSPc"n#c ch$ c%c enzyme
như ligase, polymerase v*RE
Các đoạn DNA dung ly từ những gel như thế phải được làm
sạch cẩn thận trước khi chúng được dùng như là các khuôn
mẫu hoặc cơ chấtcho các enzyme naỳ
Khi tăng điện thế của quá trình
điện di các đoạn DNA lớn thường
dịch chuyển nhanh hơn so với các
đoạn nhỏ từ cực âm đến cực
dương
Tùy thuộc vào từng mục đích điện
di khác nhau có thể sử dụng nồng
độ DNA
cao hoặc thấp. Thường dùng
micropipeWe 20-200và đặt buồng
điện di trên bàn có màu đen
Quan sát sự dịch chuyển bằng màu
bromophenol để biết lúc nào cần ngừng điện
di.
Phương pháp quan sát DNA trong agarose
$","R-"6M &2
xQ9EtBr. EtBr 4IR M đê _phát
hiện DNA R4Gvà RNA sợi đơn
*"N @9 &245Z "$9 R
4;"6I;4-#56 >-xQ9)G
99)&2Jf!j3$56.9 * :9$
@9 "$ 9 56 #^##*6 L[
!$"
;A B**C6*#$(D-#$: !" $()&&'
Một số phương pháp thu hồi DNA agarose gel
9!$$" >4&>
-#
8S:1
#$"y "!o!2
56)S@9
$" >
H24S
m4&YJW%
7Q9
2
856!425Zz"VV
E#
FGH$()&*I !#1I*/+#9
JK
9!$$" '9:1
"!9
)?26
w09 &56"E
")S5Z
26
C2[VYYYYgVWYYY!#2
!VYgVW#L
856:$"2
7Q9
2
85642 S"62>
A99
@4=!2& &
"O
LG+#7A
8{2&!D?#/9!IZ :UQ9
2
* S:1#$"56)S@9
w092|-56
"!42
9
