Đánh giá tình hình sử dụng kháng sinh trong nuôi tôm và ứng dụng phương pháp ELISA để phân tích tồn dư kháng sinh nhóm quinolone trong tôm tại một số tỉnh ven biển khu vực phía Bắc

Đ
Đ
á
á
nh
nh
gi
gi
á
á
t
t
ì
ì
nh
nh
h
h
ì
ì
nh
nh
s
s
ử
ử
d
d
ụ
ụ
ng

ng
kh
kh
á
á
ng
ng
sinh
sinh
trong
trong
nuôi
nuôi
tôm
tôm
v
v
à
à
ứ
ứ
ng
ng
d
d
ụ
ụ
ng
ng
phương

phương
ph
ph
á
á
p
p
ELISA
ELISA
đ
đ
ể
ể
phân
phân
t
t
í
í
ch
ch
t
t
ồ
ồ
n
n
dư
dư
kh

kh
á
á
ng
ng
sinh
sinh
nh
nh
ó
ó
m
m
quinolone
quinolone
trong
trong
tôm
tôm
t
t
ạ
ạ
i
i
m
m
ộ
ộ
t

t
s
s
ố
ố
t
t
ỉ
ỉ
nh
nh
ven
ven
bi
bi
ể
ể
n
n
khu
khu
v
v
ự
ự
c
c
ph
ph
í

í
a
a
B
B
ắ
ắ
c
c
Tãmt¾t B¸o c¸o ®Ò tµicÊpbé
Mãsố: B2006-11-50
Chủ trì: ThS. PhạmKim Đăng
01/08/2008
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008
1.ĐẶTVẤN ĐỀ
2.NỘI DUNG - PHƯƠNG PHÁP
3.KẾTQUẢ THẢOLUẬN
4.KẾTLUẬNVÀ ĐỀ NGHỊ
5.KẾTQUẢ ĐÀO TẠOVÀXUẤTBẢN
NỘIDUNG BÁO CÁO
Báo cáo tổngkếtđề tàicấpcơsở
01/08/2008
TVN
ỉTỏchitn d khỏngsinhtrongthcphm
ỉ EU tng cngkimsoỏttn d khỏngsinh:
Ngh nhs2377/90 EC: MRLsvnhúmcm
Ch th s 96/23 EC: giỏmsỏttn d
Quyt nhs2002/657/CE: Phngphỏp
Scộp ivicỏc ncxutkhu

Nghiờncuhthngphngphỏp + chin lckimsoỏt
Báo cáo tổngkếtđề tàicấpcơsở
01/08/2008
ỉ Quinolone: tnghp, khuychtỏntt, nhanhchúng cch
,
tiờugitvk= cch tnghpADN
S dngph binvhiuqu c nhõny vthỳy
Tuynhiờn: theoWHO nusdng /h xu
nhúmB1 (ph lc1, Ch th 96/23 EC)
ThucnhúmchophộpsdngnhngMRLs
Báo cáo tổngkếtđề tàicấpcơsở
01/08/2008
ỉ Xutkhuthu snVitNam: >3,7 t $ nm 2007, 106 nc
ỉVncúlụhngbphỏthin thithikinht, uytớn
ỉ Th trngni achaquantõm ỳngmc
nh hngsckho cng ngvtõmlý ngitiờudựng
Mctiờu
ỹ S dngkhỏngsinhtrongnuụitụm(QungNinh)
ỹ ngdngELISA phõntớchtndquinolonetrongtụm
theotiờuchunEU
ỹ Tndquinolonetrongtụmtrờnth trngphớabc
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008
3.1. Nguyênliệu (báocáo)
NGUYÊN LIỆU-NỘI DUNG - PHƯƠNG PHÁP
NGUYÊN LÝ CỦATest
Giántiếp-Canhtranh
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
10/08/2008
NGUYÊN LIỆU-NỘI DUNG - PHƯƠNG PHÁP

1.
1.
Ph
Ph
ủ
ủ
kh
kh
á
á
ng
ng
th
th
ể
ể
đã
đã
đư
đư
ợ
ợ
c
c
tinh
tinh
l
l
ọ
ọ

c
c
lên
lên
b
b
ề
ề
m
m
ặ
ặ
t
t
r
r
ắ
ắ
n
n
(1
(1
µ
µ
g
g
kh
kh
á
á

ng
ng
th
th
ể
ể
c
c
ừ
ừ
u
u
kh
kh
á
á
ng
ng
l
l
ạ
ạ
i
i
kh
kh
á
á
ng
ng

nguyên
nguyên
c
c
ó
ó
ngu
ngu
ồ
ồ
n
n
g
g
ố
ố
c
c
th
th
ỏ
ỏ
IgG
IgG
)
)
+ °C
Kháng
thể
01/08/2008

B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
2. a)
2. a)
Cho
Cho
m
m
ẫ
ẫ
u
u
đã
đã
đư
đư
ợ
ợ
c
c
t
t
á
á
ch
ch
chi
chi
ế
ế
t

t
ho
ho
ặ
ặ
c
c
dung
dung
d
d
ị
ị
ch
ch
kh
kh
á
á
ng
ng
nguyên
nguyên
chu
chu
ẩ
ẩ
n
n
v

v
à
à
o
o
2. b)
2. b)
Cho
Cho
kh
kh
á
á
ng
ng
nguyên
nguyên
c
c
ó
ó
g
g
ắ
ắ
n
n
men
men
v

v
à
à
o
o
E
E
E
E
E
E
Ag-Enz
E
E
E
E
E
E
Antigen
01/08/2008
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
2. c)
2. c)
Cho
Cho
kh
kh
á
á
ng

ng
th
th
ể
ể
đ
đ
ặ
ặ
c
c
hi
hi
ệ
ệ
u
u
th
th
ỏ
ỏ
v
v
à
à
o
o
E
E
E

E
E
E
3.
3.
ủ
ủ
2h
2h
ở
ở
4
4
°
°
C
C
SpecificAb
E
E
E
E
E
E
01/08/2008
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
E
E
E
E

E
E
4.
4.
R
R
ử
ử
a
a
lo
lo
ạ
ạ
i
i
b
b
ỏ
ỏ
c
c
á
á
c
c
ch
ch
ấ
ấ

t
t
không
không
đư
đư
ợ
ợ
c
c
g
g
ắ
ắ
n
n
(
(
ba
ba
l
l
ầ
ầ
n
n
)
)
E
E

6.
6.
D
D
ừ
ừ
ng
ng
ph
ph
ả
ả
n
n
ứ
ứ
ng
ng
b
b
ằ
ằ
ng
ng
H
H
2
2
SO
SO

4
4
.
.
Substate
/chromophore
7.
7.
Đ
Đ
ọ
ọ
c
c
ở
ở
450 nm.
450 nm.
5.
5.
Cho
Cho
dung
dung
d
d
ị
ị
ch
ch

ph
ph
ả
ả
n
n
ứ
ứ
ng
ng
m
m
à
à
u
u
v
v
à
à
o
o
TMB/H
TMB/H
2
2
O
O
2
2

v
v
à
à
ủ
ủ
30
30
’
’
trong
trong
b
b
ó
ó
ng
ng
t
t
ố
ố
i
i
01/08/2008
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008
3.2. Nội dung
-Hiện trạng nuôi trồng vàsửdụng kháng sinh trong

nuôi tôm trên địa bàn tỉnh Quảng Ninh
- Đánh giákhả năng phát hiện, hiệu lực của Kít ELISA
- Đánh giátình hình tồn dư quinolone trong tôm trên thị
trường một số tỉnh phía bắc.
NGUYÊN LIỆU-NỘI DUNG - PHƯƠNG PHÁP
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008
106101010Tổng
2-422TiênYên
32433YênHưng
54255MóngCái
CấpII
(đạilý)
CấpI
(đạilý)
Quảngcanh
(hộ)
Bánthâm
cảitiến (hộ)
Thâm
canh (hộ)
Đạidiện đạilýphânphối
thuốcthúy
Đạidiệnhộnuôitôm
Địa
phương
Bảng 1. Đối tượng điều tra tại các địa phương
3.3. Phươngpháp
Nộidung1: Tìnhsửdụngkhángsinh
Điềutra, phỏngvấn: từ 6/2005 à 8/2006

B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008
3.3. Phươngpháp
Nộidung2: Đánh giákhả năng phát hiện, hiệu lực của Kít ELISA
Theo tiêu chuẩn Quyết định 2002/657/CE vàtàiliệu hướngdẫnCRL
NA (âmtínhtheothoả thuận)FN (âmtínhgiả)Âmtính
FP (dươngtínhgiả)PA (dươngtínhtheothoả thuận)Dươngtính
Mẫuthựcsựâmtính (N
-
=
20) (mẫutrắng)
Mẫuthựcsựdươngtính
(N
+
= 20)(mẫucủngcố)
Kếtquả
PA + NA
Độ xácthực (%)= x 100
N
Với N = N
+
+ N
-
PA
Độ nhạy (%)= x 100
N
+
NA
Độđặc hiệu (%)= x 100
N

-
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008
3.3. Phươngpháp
Nộidung3: Tình hình tồn dư quinolone trong tôm
Lấy ngẫu nhiên 90 mẫu tôm, 6 đợt độc lập (6 tháng: 5 à 12/2006) tại các
chợ: HàNội, Quảng Ninh, Nam Định, Nghệ An (ba mẫu tại 3 chợ khác
nhau/địaphương/đợt, riêngHN lấythêm ở 3 siêuthị ).
Mẫu bảo quản lạnh chuyển về phòng TN loại bỏ đầu vàvỏànghiền
đồng nhất bằng máy moulinex à lưu giữởâm 80°C.
Tất cả các mẫu sau khi phân tích bằng ELISA đều được phân tích lại
bằng LC-MS/MS à nồng độ và định danh chính xác
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008
4.1. Tìnhhìnhsửdụngkhángsinh
4.1.1. Đặc điểmhệthốngphânphốithuốctrongnuôitrồngthuỷ sản
KẾTQUẢ VÀTHẢOLUẬN
Hệ thống đạilý
cấp1
Hệthống đạilý
cấp2
SảnphẩmTrung Quốc
SảnphẩmcácCôngtyVN
Cáccôngtyliêndoanh
Ngườinuôi
Đốichiếuqui chế quảnlýthuốctheoquyết địnhsố03/2002QD-BTS:
75 % đạilýcấp1, 100% cấp2: khôngcóbằngchuyênmôn TY, NTTS
88,6% đạilýcấp 2: qui địnhvề địa điểm, điềukiệnkinhdoanh
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008

4.1. Tìnhhìnhsửdụngkhángsinh
4.1.2. Tìnhhìnhsửdụngkhángsinhtrongnuôitôm
KẾTQUẢ VÀTHẢOLUẬN
43,3
23,3
16,7
13,3 13,3 13,3
10 10
6,7 6,7 6,7
3,3
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
(Sinh t
ố
t
ỏ
i)(Oxytetracyclin)(Oxolinic 30%
for shrimp)
(Ampicyclin)(Streptomycin)(Anti White) (ENRO-Strep
for shrimp)
(N300) (Rifamicin) (Noracin) Anti-vibrio
(Ultra_Septic_01)

T
ỷ
l
ệ
h
ộ
s
ử
d
ụ
ng (%)
25/30 hộ cósửdụng1 haynhiềuloạikhángsinh
Cóítnhất12 loạisảnphẩmchứa8 loạikhángsinh
Ampi, Strep, Oxyt, Norf, Enro, a. Oxo, Rifavàksthựcvật
Norfloxacin
A. oxolinic
Norfloxacin
Enroflorxacin
Norfloxacin
A. oxolinic
Norfloxacin
Trong đó7/12 sảnphẩmchứaquinolone
Báo cáo tổngkếtđề tàicấpcơsở
01/08/2008
KTQU VTHOLUN
ỹ Mc ớch: phũngtr bnh
ỹ Trnthc n: 1 7 ngy/t
ỹ Thucngoidanhmc: KPH ticỏctri, ilý (chen???)
ỹ Nhnthc: thp, quantõmhiuqu, khụngý thctỏchilõudi
ỹ Qunlý : nhiu vn bnphỏplýnhngchngchộo

ỹ Tiliuchuyờnmụn: websitekhuynng khuyncỏotrỏi qui nh
4.1. Tỡnhhỡnhsdngkhỏngsinh
4.1.2. Tỡnhhỡnhsdngkhỏngsinhtrongnuụitụm
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008
4.2. Đánhgiákhả năngpháthiện, hiệulựccủakítELISA
4.2.1. Tính ổn định vàkhả năng phát hiện
KẾTQUẢ VÀTHẢOLUẬN
Bảng 5. Kết quả phân tích kiểm tra đường chuẩn (10 bộ kít)
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008
4.2. Đánhgiákhả năngpháthiện, hiệulựccủakítELISA
4.2.1. Tính ổn định vàkhả năng phát hiện
KẾTQUẢ VÀTHẢOLUẬN
Đồ thị 1. Đườngchuẩn
y = -1,0115x - 1,2697
R
2
= 0,9915
-1,500
-1,000
-0,500
0,000
0,500
1,000
1,500
2,000
-3,500 -3,000 -2,500 -2,000 -1,500 -1,000 -0,500 0,000 0,500
ln (concentration)
logit ((B-NS)/(B0-NS))

T
-B vàB
0
tương ứnglàmật
độ quangcủadungdịch
chuẩn ở cácnồng độ khác
nhauvàtạinồng độ bằng0.
-NS mật độ quangcủa
dungdịchkhông đặchiệu
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008
4.2. Đánhgiákhả năngpháthiện, hiệulựccủakítELISA
4.2.1. Tính ổn định vàkhả năng phát hiện
KẾTQUẢ VÀTHẢOLUẬN
Bảng6. Khả năngpháthiện
củaphươngpháp ở nồng
độ giớihạnpháthiệnvà
giớihạnnồng độ tối đa đối
vớimộtsốquinolone
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008
4.2. Đánhgiákhả năngpháthiện, hiệulựccủakítELISA
4.2.1. Tính ổn định vàkhả năng phát hiện
KẾTQUẢ VÀTHẢOLUẬN
Bảng7. Cácthamsốđộ mạnhcủaphươngpháp đốivớicácquinolone
đượcthử tạingưỡngpháthiệntốithiểu
B¸o c¸o tængkÕt®Ò tµicÊpc¬së
01/08/2008
4.3. Kếtquả phântíchmẫutôm đượclấytrênthị trường
KẾTQUẢ VÀTHẢOLUẬN

145,28
0,4
Báo cáo tổngkếtđề tàicấpcơsở
10/08/2008
KTLUNV NGH
P Thucthỳy: rt a dng, phongphỳv cphõnphitrctiphoc
giỏntipcho nginuụiquahthng ilý. Vncũnsnphmkhụng ỳng
qui cỏchnhónmỏc, thmchớngoidanhmc.
P S ilýcha tyờucu iukinkinhdoanh: 75% cp1, 100% cp2
(bngchuyờnmụn);88,6% cp 2 (a imv iukinkinhdoanh).
P S thiuhiubitca nginuụi, ý thcchphnhca ngikinhdoanh
thucvqunlýchngchộoto iukinchoviclmdngthuc(83,3%
h s dngt 1 nnhiuKS).
P tnht12 snphmcha KS csdng: nhúmquinolone(norf, enro,
a.oxo), -lactam(amp), Aminosid(strep), Tetracyclin(oxyt), Rifamycin, ti
P Mcdự ckhuyncỏohnch vcmnhngssnphmchanhúm
quinolonevnrtph bin(7/12 snphm) s h s/d tng.
Báo cáo tổngkếtđề tàicấpcơsở
01/08/2008
KTLUN
PC s, nguyờntcsdng: huhtkhụng ỳngnguyờntc(liutrỡnh,
liu lng, thigianngngthuc).
P KớtELISA cahóngCER cúkh nngphỏthinttcỏcquinolonetrong
tụm nng 0,7 ppb.
P Kh nngphỏthin, hiulccakớt ỏp ng cyờucucamt
phngphỏpbỏn nh lng qui nhtrongquyt nhs2002/657/CE.
Tuynhiờn, mun nhdanh quinolonev nh lng chớnhxỏccnkhng
nhbngphngphỏplýhoỏkhỏc.
P Ttccỏc aphng uphỏthinmubnhimquinolonevinng
t 0,4 145 ppb(t l nhim10%). Trong ú, 4 mukhụng tyờu

cuVSATTP v d lngquinolone(4,44%) theo qui nh (07/2005/Q-
BTS) vEU (2377/90 EC).