THUC HANH VI SINH

Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học
TRNG I HC NễNG LM THI NGUYấN
LP 42 CNSH
o0o
BO CO
THC HNH VI SINH VT
H v tờn : Bùi Thị Thu Hoài
Mó sinh viờn : DTN1053150018
Lp : 42CNSH
1
Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học
PHN I : PHNG PHP NGHIấN CU VI SINH VT
BI 1 : CC QUY TC AN TON THIT B DNG C
V HểA CHT CA PHềNG TH NGHIM VI SINH VT
I. CC QUY TC CHUNG CA PHềNG TH NGHIM
I.1. Quy nh chung
1. Nm vng nguyờn tc
2. Khi vo phũng thớ nghim phi mc ỏo blouse, ci khuy kớn, ct túc gn gang
3. Khụng núi chuyn riờng n o. Gi gỡn trt t. Khụng n ung, hỳt thuc
trong phũng thớ nghim
4. Khụng t ý thay i cỏc b trớ phũng thớ nghim
5. Khụng ra vo t do phũng thớ nghim
6. Khụng mang n, nc ung vo phũng thớ nghim, khụng bo qun thc n
trong t lnh ng mu v húa cht
7. Khụng c i chõn trn trong phũng thớ nghim ( do cú th cú cỏc mnh v
thy tinh, húa cht, trờn nn nh
8. Khi tip xỳc vi cỏc tỏc nhõn c ( húa cht, vi sinh vt gõy bnh, cỏc thit b
phúng x ,) phi mc trang phc bo h ( qun ỏo bo h, kớnh, khu trang,
gang tay, mt n phũng c, m,) v tuõn th nghiờm ngt v tuõn th

nghiờm ngt cỏc quy nh riờng vi cỏc tỏc nhõn i vi tỏc nhõn c
9. Khụng nm th húa cht trong phũng thớ nghim, khụng c dựng ming
hỳt trc tip m phi dựng qu hỳt cao su. Lu ý ko ming chm vo bt c
vt no phũng thớ nghim
10. Khụng a mi ngi trc tip
11. Khụng nhỡn trc tip theo gúc thng m phi nhỡn t phớa cnh
12. Khi lm vi cỏc dung mụi cú mỳi hoc d bay hi ( phenol, chloroform,
acetic acid, ) phi lm trong t hood
13. Húa cht phi c gn nhón y cỏc thụng tin
14. Trc khi s dng húa cht c k cỏc nhón mỏc trờn v chai l húa cht
15. Khi chun b dung dch húa cht phi tuõn th quy trỡnh pha ( khụng
c nc vo dung dch acid m c m phi cho t t acid vo nc)
2
Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học
16. Cht thi trong phũng thớ nghim phi c phõn loi, c cho vo tỳi
bong buc cht li trc khi a ra ngoi mụi trng.
17. Cn ghi chỳ tờn chng, ngy thỏngthớ nghim, ngi lm thớ nghim lờn
tt c cỏc hp peptri, ng nghim
18. Tuyt i khụng canh trng hay vt phm cú vi sinh vt dõy lờn qun
ỏo, sỏch v, dng c cỏ nhõn. ng thi cng phi chỳ ý bo v da v qun ỏo,
sỏch v v dng c cỏ nhõn. ng thi cng phi chỳ ý bo v da qun ỏo khi
b húa chy v thuc nhum dớnh vo
19. Cn thn khi thao tỏc vi ốn cn. Tt ốn cn khi cha cú nhu cu s
dng hoc ngay sau khi s dng xong. Tuyt i khụng c dựng ốn cn
mi ốn cn.
20. Khụng t ý s dng trang thit b, dng c trong thớ nghim khi cha
c hng dn c th. S dng theo hng dn, ht sc thn trng, trỏnh lm
v v h hng
21. Kt thỳc thớ nghim phi v sinh cỏc thit b, dng c ó s dng theo quy

trỡnh v sp xp vo ỳng ni quy nh
II. NHNG TRANG THIT B C BN C DNG TRONG PHềNG TH
NGHIM VI SINH VT
1. T sy
- Nhit t 60
o
C 200
o
C
- Dựng sy khụ, kh trựng cỏc loi dng c chu c sc núng khụ, chỳ
ý l dng c thy tinh, kim loi. Tựy thuc vo i tng cn kh khun m sy
ch nhit v thi gian khỏc nhau
2. Th lnh v t mỏt
- Dựng bo qun mụi trng ó pha ch, ging vi khun, cỏc ch phm sinh
hc (vacxin, huyt thanh, khỏng sinh,) húa cht, thuc th d phõn hy
nhit thng
3. Ni hp
- Thit b ny cp nhit bng hi nc ỏp sut cao ( hi bóo hũa ỏp sut
cao)
- Dựng hp kh trựng mụi trng, mt s nguyờn liu v dng c thớ
nghim
3
Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học
- Tựy i tng m s dng ch nhit v ỏp sut thớch hp, thng
dựng 121
o
C / 1 atm / 15 phỳt
4. Cõn phõn tớch in t
- Trng lng t 100àg 200g

- chớnh xỏc 10
-4
g
- Dựng cõn húa cht, mụi trng
5. T m
- Nhit t 20
o
C 60
o
C, cú ch n nh nhit
- S dng nuụi cy vi sinh vt ti n hit thớch hp cho s sinh trng v
phỏt trin ca chỳng, tựy tng i tng nuụi cy m nhit khỏc nhau
vi sinh vt cú th phỏt trin tt
6. Kớnh hin vi
- Vai trũ quan trng nghiờn cu vi sinh vt
- Dựng nghiờn cu, quan sỏt c im hỡnh thỏi, sinh lý ca t bo ci sinh
vt nh vo kh nng phúng i ca kớnh
7. Dng c lc vi khun
- Dựng kh trựng cỏc loi mụi trng khụng chu c nhit v ỏp sut
cao
8. T cy vi trựng
- Cú khụng gian vụ trựng
- Dựng thao tỏc vi vi sinh vt nh h thng ốn t ngoi v b phn
thi khớ vụ trựng
9. Mỏy lc
- Dựng nuụi cy, nhõn ging vi sinh vt bng cỏch lc cỏc bỡnh nuụi cy
theo cỏc chiu khỏc nhau ( lc vũng hay lc ngang) mt cỏch u n tng
lng oxy hũa tan trong mụi trng
10.Cỏc thit b khỏc
- Mỏy ct nc

- B n nhit
- Ni lờn men
11.Dng c
- Lỏ kớnh(lamen): y v bụi trờn tiờu bn giỳp quan sỏt d dng
- Phin kớnh( lam kớnh) dựng lm tiờu bn cho nghiờn cu hỡnh thỏi, sinh lớ
t bo
- Phin kớnh lừm : giỳp nghiờn cu cú kh nng di chuyn, s hỡnh thnh bo t
v c im sinh sn t bo
- Phin kớnh cú khung m Goriaep: dựng kim tra s lng t bo cú kớch thc
ln
4
Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học
- Micropipet: õy l ng hỳt chớnh xỏc nht cho phộp hỳt nhng lng cht chớnh
xỏc
- a petri: dựng nghiờn cu c im hỡnh thỏi, c im nuụi cy v phõn lp
t bo vi sinh vt
- Bỡnh tam giỏc: Dựng nuụi cy, nhõn ging, cha cỏc lpaij mụi trng. Cú
nhiu loi : 100 ml, 150ml; 250 ml; 500ml; 1000 ml thng s dng l 250 ml
- Que gt ( que trang) : phõn lp, tuyn chn t bo
- Que cy : gm que u trũn, que u nhn, que cy u hỡnh thc th.
- Cụng dng ch yu l ly ging, cy truyn v lm tiờu bn vsv
12.Húa cht
BI 2: CHUN B DNG C NUễI CY
X Lí TRUNG TNH DNG C
1. Phng phỏp trung tớnh dng c
- vo bờn trong dng c nc cú pH = 7
- Hp dng c 12
o
C trong 30 phỳt

- Ly dng c ra ngui khong 30
o
C r k bng nc nhiu ln
- Kim tra li pH trong dng c
- Nu nc cú pH kim thỡ tip tc ngõm dng c vo dung dch HCl 2% cho n
khi kim tra li thy nc cú pH bng 7 thỡ thụi
- V tip tc r li nc nhiu ln l c
2. Ra dng c
Phin kớnh
- Bc 1 : Chựi sch m hay vazowlin trờn phin kớnh bng vi tm xylem hay
ngõm tieu bn vo dung dch sunphobicromat trong 48 gi
- Bc 2: Ra li bng x phũng v rỏo nc
- Bc 3 : Lau khụ chỳng bng vi mn ri sy khụ 37
o
C
Lu ý : nh du vo mụi trng lam kớnh ng nht mt mụi trng vỡ khi 2 mụi
trng ỏnh sang s b khỳc x
5
Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học
ng nghim :
- Dựng chi r sch m trong ng nghim
- Vi ng nghim c ó b nhim khun
- Bc 1 : Hp kh trựng 120
o
C trong 30 phỳt
- Bc 2 : Ly ra v cỏc vt phm trong ng nghim i
- Bc 3: ngõm nc nghim trong nc m
- Bc 4: Ra ng nghim
a petri

- Bc 1 : t nga a petri trong lũng bn tay trỏi
- Bc 2 : Tay phi dựng gi chm x phũng xỏt vo 2 mt ca a , cỏc khe chõn
a v thnh a
- Bc 3 : Ra nc 2-3 ln
- bc 4 : ỳp nghiờng cỏc a trong gi nha cho khụ
Dng c thy tinh : phu, chai, l, bỡnh cu, bỡnh tam giỏc
- Bc 1 : Dựng gi vi nc x phũng c ra phn ngoi dng c
- Bc 2: Dựng chi ra sch phn bờn trong bng x phũng
- Bc 3: Sau trỏng vi nc 3-4 ln
- Bc 4: p ngc cỏc dng c ú cho khụ
Nỳt v ng cao su
- Bc 1: Phõn loi nỳt theo kớch thc to nh, xu, sch, bn
6
Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học
- Bc 2 : C ra k trong nc x phũng
- Bc 3 : Ra nc sch tht nhiu
- Bc 4: Phi nng 2- 3 gi ri cy i dựng dn
Lu ý phi nng yu
BAO GểI DNG C
Cỏch lm nỳt bụng
Bc 1. Ct mt mnh vi mn tựy theo dng c ng nghim hay bỡnh tam giỏc hay
chai l, t lờn trờn
- Bc 2: Cho bụng m vo vi, nhi cht cho phự hp vi tng loi dng c
Bc 3: Tỳm vi li dựng ch buc cht bụng li
Lu ý: khi no cú ting búc l nỳt bụng ó thnh cụng
Cỏch bao gúi cng c
S dng: giy bỏo hay giy du vỡ nu hp kh trựng nỳt bụng s b t nờn vụ
trựng khụng tt
Cỏch lm:

- Bc 1: Ct cỏc bng giy hỡnh ch nht vi kớch thc tựy theo dng c bao
gúi
- Bc 2: Qun bng giy quanh u ca bỳt bụng
- Bc 3: Gp nt phn giy cũn li v ci sõu vo bờn trong
Lu ý
Phn giy bao ngoi phi cht v kớn , bao giy du vi dng c hp t, giy bỏo
vi dng c hp khụ
KH TRNG DNG C
Kh trựng bng t sy
- Bc 1: Cỏc dng c c gúi cn thn v xp gn vo t sy
- Bc 2: bt cụng tc t hot ng
- Bc 3: iu chnh thi gian phự hp ( thng 120
o
C trong 2 gi hoc 180
o
C
trong 30 phỳt
- Bc 4: Tt t cy ngui ti 60
o
C mi m t ly dng c
Lu ý giy bo cú mu hi vng l t yờu cu
Kh trựng bng t qua la nung
-Dng c : ng hỳt, que cy, u cỏc ng nghim, que cy, u cỏc ng nghim,
ming cỏc bỡnh tam giỏc sau khi ly nỳt bụng ra
Cỏch thc:
7
Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học
- Bc 1: H dng c trờn ngn la ốn cn, a qua a li 3-4 ln. vi cỏc u
que cy bng kim loi phi nung tht

- Bc 2: i cho dng c ngui mi c dựng trỏnh v dng v v cht mu I
sinh vt. Cng cú th nhỳng dng c vo cn 90
o
C ri t kh trựng
un sụi trong nc
Dng c: kim tiờm, kộo, kp, cc thy tinh,
Cỏch thc hin:
- Bc 1: Dựng nc mỏy sch ngp dng c
- Bc 2: un sụi liờn tc trong 30 phỳt n 1 gi
Lu ý : chiir tiờu dit c t bo sinh dng m khụng tiờu dit c bo t vi
sinh vt khc phc ngi ta cho thờm acid phenic 5%
un cỏch thy nhit thp ( phng phỏp kh trựng Pasteur)
Cỏc thc phm d b bin tớnh nhit cao nh : bia, ru, sa,
Cỏch thc hin : un núng mụi trng lờn 60 70
o
C trong 15 30 phỳt hoc l
80
O
C trong 10 15 phỳt
Hp cỏch quóng 100
O
C ( phng phỏp Tuyndal)
Dựng kh trựng mt s mụi trng nh men bỏnh mỡ, mc lm nc chm.
Cỏc thc hin :
- Bc 1: Hp mụi trng 100OC t 30 40 phỳt
- Bc 2: Ly ra trong t m trong 24 gi cho cỏc bo t vi sinh vt ny
mm
- Bc 3: Hp mụi trng ln th hai 100OC trong 30 40 phỳt dit
bo t va ny mm
- Bc 4 : Lp li quỏ trỡnh ny t 3 -4 ln

Kh trựng bng hi nc bóo hũa
Thit b : bng kim laoij, chu c nhit v ỏp sut cao cú kh nng t ng
iu chnh ỏp sut v thi gian kh trựng theo yờu cu ngi s dng
Cỏc thc hin:
- Bc 1: Chun b cỏc dng c, nguyờn liu cn kh trựng
- Bc 2: Kim tra v iu chnh lng nc cho phự hp sap cho lng
nc bờn trong ni hp phi ngp thanh t
- Bc 3: Xp cỏc dng c v nguyờn liu vo ni hp
8
Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học
- Bc 4: úng cht ni hp v cỏc phan x
- Bc 5 : cm phớch in
- Bc 6: Bt cụng tc kh trựng ca ni
- Bc 7 : iu chnh nhiờt v thi gian cho phự hp
- Bc 8: Ch ỏp sut v 0atm mi c m np ly dng c v nguyờn
liu ra
Lu ý: Kim tra ni hp trc khi dựng, trỏnh cu cp in t ngt s gõy v
thit b hay gõy n rt nguy him, phi kim tra nh kỡ ng h ỏp k v van an
ton
Kh trựng bng cỏch lc
Kh trựng cỏc loi mụi trng khụng thớch ng vi nhit cao ( nh mụi
trng huyt thanh, dung dch anbumin, v mụi trng thng) v tỏch cỏc vi
sinh vt vi cỏc sn phm trao i cht
Cỏc tin hnh:
- Bc 1: Hp kh trựng ng lc, bỡnh cha dch lc v cỏc ph tựn kốm
theo ỏp sut 1 atm, 120 OC trong 30 phỳt
- Bc 2: t mng lc vo gia ng lc v bỡnh dung dch lc ri c nh
3 b phn ny bng cỏc c vớt
- Bc 3: dch lc vo ng lc

- Bc 4: Ni bỡnh ng dch lc vi bỡnh tam giỏc c gn lin vi bỡnh
hỳt chõn khụng. Trong on vũi ni cú bụng hn ch s nhim trựng dch lc
- Bc 5: Cho mỏy hỳt chõn khụng hot ng a chờnh lch ỏp sut
lờn t t v dch lc chy thnh git. ỏp sut khụng quỏ 30 -45 cm thy ngõn
- Bc 6: Thi gian lc khụng c quỏ 30 phỳt
- Bc 7: Lc xong ly mt ớt dch lc cy vo mụi trng sch nc tht
peptone trong t m 37 C kim tra vụ trựng ca dch ó lc
- Bc 8: B mng lc i vỡ mng lc ny ch c s dng mt ln
Kh trựng bng t cy vụ trựng
Thit b : phi mụi trng vo dng c cy truyn nghiờn cu phõn lp tuyn
chn vi sinh vt
Cỏc thc hin : Bu khụng khớ bờn trong t cy luụn c m bo vụ trựng
hay ớt nht cng m bo hn ch ti a s tn ti ca vi sinh vt khụng mong
mun cng nh bo t ca chỳng
BI 3: PHA CH MễI TRNG DINH DNG
( NUễI CY NM MEN BNH Mè)
9
Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học
I. HểA CHT
- ng
- Pepton
- KH2PO4
- MgSO4.7H2O
- Nc
- Agar
II. DNG C
- a petri
- Bỡnh tam giỏc
- Cc thy tinh 250ml

- Pipet
- Cõn
- Micropipet
- a thy tinh
- Que chang
- Giy bc
- Cõn
- Mỏy khuy
- Bỏnh mỡ
- Ci chy s
III. CCH THC HIN
Ly húa cht:
Dựng cõn cõn húa cht :
- ng : 6g
- Pepton: 1g
- KH2PO4: 0.6g
- MgSO4.7H2O: 0.6g
- Nc : ti 250ml
- Aga : 3g
Pha dung dch
- Cho cỏc cht ng, Pepton, KH2PO4, MgSO4.7H2O, cho nc ti 250ml vo
trong bỡnh ong khuy cho c hũa tan cỏc cht
iu chnh pH ca mụi trng
10
Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học
- Ta dựng kp kp mu s ca mỏy khuy cho vo bỡnh ong 250ml t dung
dch lờn mỏy khuy
- Bt cụng tc mỏy khuy dung dch c khuy u
- Cho mỏy chun pH sao cho pH 5,4 ti 5.8

- Ta dựng micropipette iu chnh pH , cho t t dung dch thớch hp vo
bỡnh
Nu pH cao thỡ mỡnh cho thờm acid HCl vo
Nu PH thp ta cho NaOH thờm
Lu ý khụng cho nhiu ln pH nu khụng s nh hng ti quỏ trỡnh nuụi cy
a ra dng c v kh trựng mụi trng
- Ta a t bỡnh cha vo bỡnh tam giỏc
- Cho aga vo
- Dựng giy bc bc ming bỡnh tam giỏc
- Kh trựng 1,5atm trong 20 -30 phỳt
thch ra a petri
- Dựng tay trỏi cm a petri m mt gúc 45
- a trc ngn la ốn cn
- mt lng mụi trng vo a peptri cho phự hp
- i mụi trng ụng li
BI 4: BO QUN
I. PHNG PHP CY TRUYN NH K TRấN MễI TRNG
MI
i tng ỏp dng: tt c cỏc loi vi sinh vt
- Vi nm men, vi khun cy truyn trong 1 -2 thỏng
- Vi nm mc cy truyn 3 6 thỏng
u im
- n gin
- D lm
Nhc im:
- Tn mụi trng, cụng sc, thi gian
- Phm cht ban u cú th b thay i
11
Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học

II. PHNG PHP ễNG KHễ
- Phng phỏp ny lm cho t bo mt nc trng thỏi t do
- Gim thm chớ ngng hn quỏ trỡnh phõn chia ca vi sinh vt
- Cú th chu c nhiu tỏc ng ca ngoi cnh
- Phng phỏp ny ch dựng trong sn xut
- Thi gian bo qun ti vi chc nm
III. NUễI CY NM MEN BNH Mè
Chun b :
- Bỏnh mỡ
- Chy, ci s
- Nc ct
- Cõn
- Que chang
- ốn cn
Tin hnh
- Bc 1: Ly bỏnh mỡ i cõn ly ra 1g bỏnh mỡ
- Bc 2: Dựng chy s, ci s nghin nh bỏnh mỡ
- Bc 3: Ly 99 ml nc ct v 1g bỏnh mỡ ó nghin nh cho vo bỡnh tam
giỏc lc u ta thu c nng l 10
-12
- Bc 4: Ly 1 ml trong bỡnh tam giỏc vo ng van cụn ca micropipette nng
pha loóng 10
-4
- Bc 5: Ly cho dung dch vo trong a petri ( lu ý thc hin trờn vựng dit
khun ca ốn cn)
- Bc 6: Cho vo t cy
BI 5 : PHNG PHP NHUM MU V QUAN ST HèNH
THI SINH VT
I. NGUYấN LIU, HểA CHT, DNG C
- Thuc nhum mu xanh metylen 0.001%

12
Giảng viên : Phạm Thị Phơng Sinh viên: Bùi Thị Thu Hoài
42 Công nghệ sinh học
- Nc ct
- Nam kớnh
- Lamen
- Que cy
- a petri cha men bỏnh mỡ
- Kớnh hin vi, du soi
- Pipet
II. CCH TIN HNH
Ly ging lm tiờu bn:
- Bc 1 : t ốn cn
- Bc 2: Ly lam kớnh nh mt git nc ct lờn trờn lam kớnh
- Bc 3 : Ly mu
t a petri trờn lũng bn tay trỏi
Dựng que cy ly ging nh nhng ly mu nm men
Nhum mu tiờu bn
- Bc 1: Nh mt git xanh metyllen lờn vt bụi
- Bc 2: y lamen
Lu ý l lamen nghiờng 45 ri h t t lamen xung trỏnh hỡnh thnh bt
khớ
Lm khụ tiờn bn
Khi ta ó cú tiờu bn trờn lament l ti giai on lm khụ tiờu bn bng cỏch h
trờn ngn la ốn cn ti khi khụ tiờu bn
Quan sỏt tiờu bn
- Bc 1: C nh tiờu bn trờn giỏ
- Bc 2: iu chnh mt kớnh
Ta iu chnh soi mt kớnh 10 ti khi thy l m thỡ soi mt kớnh 40
III. KT QU QUAN ST:

- Ta quan sỏt thy qun th nm men bỏnh mỡ, cú hỡnh cu nm thnh tng ỏm
13