Định Lượng Bacillus Cereus Bằng Phương Pháp Đếm Khuẩn Lạc.pptx

XIN CHÀO CÁC BẠN
NHÓM 8


ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM
KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

Định lượng Bacillus cereus bằng
phương pháp đếm KL
Sinh viên thực hiện: Nhóm: 08
1.Võ Thị Phượng Hằng
:2005200651
2.Nguyễn Thị Diễm Hương :2005200172
3.Huỳnh Gia Minh
:2005200789
4. Nguyễn Quốc Duy
:20052008010
5.Nguyễn Gia Định
:2005200456
Giảng viên HD: Đinh Thị Hải Thuận


Nội dung
01 Giới thiệu về Bacillus cereus

02 Phương pháp đếm KL

03 Định lượng B.cereus bằng

04

phương pháp đếm KL

Tính tốn và biễu
diễn kết quả


01

Giới thiệu về
Bacillus cereus


Đặc điểm
 Bacillus cereus là một vi
khuẩn gram dương, hình que,
kị khí và dễ sinh độc tố.
 B. cereus phát triển trong
khoảng từ 10 đến 50°C, với
nhiệt độ tối đa từ 30 đến
40°C.
 Giá trị giá trị là xấp xỉ 0,92.


Nguồn thu nhận B. cereus từ cơm nguội hoặc cơm chiên,
nấu chín; rau, sữa và thịt.

Gây ra ói mửa và tiêu chảy


02

Phương pháp
đếm khuẩn lạc


2.1 Định nghĩa phương pháp

 Phương pháp đếm khuẩn lạc: Vi khuẩn được cấy
trên đĩa phát triển hình thành các khuẩn lạc từ một
hoặc một số vi khuẩn ban đầu sau đó đếm các
khuẩn lạc mọc trên đó
 Ưu điểm
Cho phép xác định số tế bào sống
Định lượng chọn lọc được vsv
 Nhược điểm
Độ chính xác của việc tính mật độ vi khuẩn từ
số khuẩn lạc thực sự có một số hạn chế.
 Đếm khuẩn lạc khơng tính được tế bào chết.


2.3 Phương pháp có thể áp dụng cho
những loại vsv

Thường dùng cho mẫu thử

Dùng cho mẫu thử nghiệm

nghiệm dạng rắn

ở dạng dung dịch

03

Định lượng B.cereus bằng
phương pháp đếm Kl:
Phạm vi áp dụng : được tham chiếu theo
TCVN 4992:2005 (ISO 7932.2004)


Mơi trường và hóa chất
TÊN

SPW
Mơi trường thạch MYP
( Mannitol-Egg YolkPolymixin)
Thạch huyết cừu
Hóa chất phụ : NaCl, HCl

Mục đích

dùng để pha lỗng mẫu thử
là mơi trường chính cho việc
nuối cấy B.cereus .
thử hồng cầu xác định phản
ứng
Điều chỉnh pH


Thành phần mơi trường MYP
Thành phần

Peptone
Bột chiết thịt bị

Mục đích
Cung cấp nitơ, vitamin và các yếu tố tăng trưởng

D-mannitol

Đường có thể lên men, D-mannitol tạo ra quá trình lên men
acid.

NaCl

Duy trì trạng thái cân bằng thẩm thấu

Agar

Làm chất đơng tụ

Phenol đỏ

Làm chất chỉ thị pH

Egg Yolk

Lịng đỏ trứng có chứa lecithin,lecithin tạo vòng kết tủa
bằng enzyme Bacillus cereus xung quang khuẩn lạc.

Polymyxin B

Ức chế sự phát triển vi khuẩn.


Thành phần thạch huyết cừu
Thành phần
Agar
Sản phẩm thủy phân
gan
Peptone
NaCl
Cao nấm men

Mục đích
Làm chất đơng tụ
Tạo mơi trường kỵ khí
Cung cấp nitơ, vitamin và các yếu tố tăng
trưởng
Duy trì trạng thái cân bằng thẩm thấu
Cung cấp vitamin, tạo điều kiện cho việc ni
dưỡng các vi sinh vật kỵ khí.


Quy trình
thực hiện


Phần mẫu thử, huyền phù ban đầu và
các dung dịch pha loãng
Pha loãng mẫu
Cấy mỗi đĩa 0.1ml

Ủ 18h -24h ở .

Cấy và ủ

Đếm khuẩn lạc và khẳng định

Chọn và lọc khuẩn
lạc để khẳng định.
Thử hồng cầu trên
thạch huyết cừu.


Phần mẫu thử, huyền phù ban
đầu và các dung dịch pha loãng
Các mẫu thử huyền phù sẽ tuân theo TCVN 6507-1 (ISO 6887-1)
và tiêu chuẩn riêng liên quan tới sản phẩm.
Cân chính xác 10g đối với mẫu rắn hoặc đong 10ml đối với mẫu
lỏng
Dung dịch pha loãng SPW 90ml ( lấy mỗi ống nghiệm 9ml )


Pha lỗng mẫu
Mục đích : thu được
lượng khuẩn lạc thích
hợp cho việc nuôi cấy.
Cách thực hiện : Lấy
1ml huyền phù ban đầu
cho vào ống nghiệm
chứa 9ml SPW.

9ml
SPW
và
1ml
ống
mẫu
Ống
mẫu

9ml
SPW và
1ml ống
pha
loãng
trước


Cấy và ủ
Dịch mẫu [10-1]

MYP

MYP

Pha loãng

Dịch mẫu [10-2]

MYP

MYP

Ủ trong tủ ấm ở điều kiện 300C trong vòng 18h-24h


Đếm khuẩn lạc và khẳng định
Đếm các khuẩn lạc B.cereus giả định trên mỗi đĩa. Các
khuẩn lạc giả định là các khuẩn lạc lớn, màu hồng

Khuẩn lạc sau khi nuôi cấy


Khẳng định sinh hóa
Phép
thử
Thạch
MYP

Thử
hồng
cầu

Kết quả khẳng định
Bacillus cereus
Chúng có màu hồng trên
nền đỏ thẫm và có quầng
kết tủa bao quanh (phản
ứng của lòng đỏ trứng)
rộng đến 5 mm.
Phản ứng dương tính a

Cách tiến hành
Kết quả được thể hiện sau
khi được nuôi cấy
B.Cereus thành công.

Khẳng định B.Cereus trên
môi trường thạch huyết cừu
bằng phản ứng Haemolysin
(ủ trong 300C trong vòng
24h)
a
độ rộng của vùng hồng cầu có thể thay đổi