CAO ĐẶC DIỆP HẠ CHAU ĐẮNG EXTRACTION PHYỈỈANTHI AMARỈ SPỈSSUM

Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (1.25 MB, 18 trang )

Trang 1<div class="page_container" data-page="1">

Các chuyên luận CAO DƯỢC LIỆU,

DẦU, TINH DẦU

</div>Trang 2<div class="page_container" data-page="2">

CAO ĐẶC ACTISỒ

Extraction Cynarae spissum

Cao đặc actisỏ được bào chế từ lá cáy Actisô (Cynara

scoỉymus L.) họ Cúc (Asteraceae) theo phương pháp thích

hợp để chế phẩm có hàm lượng cynarìn òn định.

Chế phẩm phải đáp ừng các yèu càu trong chuyên luận "Cao thuốc" (Phụ lục 1.1) và các yêu câu sau đây:

Mô tả

Cao đậc actisơ có thề chất mềm, dồng nhất. Màu nâu sam. Mùi dặc biệt. Vị hơi mặn chát vả hơi đắng.

Định tính

A. Hịa tan 0,5 g chế phẩm trong khoảng 20 ml ethanol

96 % (TT), lọc. Dược dịch lọc A.

Lấy 1 ml dịch lọc A cho vào ống nghiệm, thêm 0,1 g bột

magnesi (TT) và 2 ml a c id hydrocloric (TT), đê vén, xuất

hiện màu hồng đến đỏ.

Lấy I ml dịch lọc A cho vào một ống nghiệm, thêm 0,5 ml

dung dịch acid hvdrocỉoric l N /77) và 0,5 ml dung dịch tìơtri nitrit 10 % (77). Đẻ lạnh ờ 10 °c trong khoang 20 min.

Thèm 2 ml dung dịch natrì hydroxyd 10 % (77), sẽ xuất

hiện màu hồng bền vừng.

B. Phương pháp sắc ký lớp mòng (Phụ lục 5.4).

Bản mỏng: Silicagel G.

Dung môi khai triền: Acid formic khan - acid acetic khan

- nước - ethyl ace tat ( 5 : 5 : 1 0 : 100).

Dung dịch thứ: Dịch lọc A dược cơ tới cắn, hịa cấn trong

10 ml ethanol 60 % (TT), lắc với 5 ml ethyl acetat (TT),

tách lấy dịch chiết ethyl acetat làm dung dịch thử.

Dung dịch đoi chiểu: Hòa tan cynarin trong methanol (TT)

đê được dung dịch có nồng độ 1 mg/ml.

Cách tiên hành: Chấm riêng biệt lên bàn mỏng 15 pl dung

dịch thừ và 10 pl dung dịch đối chiểu. Triển khai sắc ký đến khi dung môi đi dược khoảng 12 cm, lấy bàn mỏng ra, dể

khơ 6 nhiệt độ phịng. Phun dung dịch natri nitrit 10% (TT) sau đó vài phút phun dung dịch natri hydroxvd 10 % (TT).

Quan sát dưới ánh sáng thướng. Trên sắc ký đồ thu được của dung dịch thư phải có một vết màu vàng (flavonoid) có giá trị Rf khoáng 0.30 và một vết màu hồng (giá trị Rr khoảng 0,55) tương đương với vết cynarin chuẩn trong sắc ký đô thu được cùa dung dịch đối chiếu.

Can khơng tan trong nước

Hịa tan 1.0 g chế phẩm trong 50 ml nước cắt, lọc, rưa cán băng nước cat đến khi nước rữa không màu, thu cắn và sấy

khô ờ 100 °c đến 105 CC' đốn khối lượng không đổi. Lượng

căn khơng được q 3,0 % tính theo chế pbấm khơ kiệt.

Dung dịch cao đặc actisô l % (kl/tt) trong nước phải có pH

từ 5,0 đến 6,0 (Phụ lục 6.2).

Mất khối lượng do làni khô

Không quá 20.0 %. Dùng 1,0 g chá phẩm sấy ờ 70 cc đến khôi lượng không đôi (Phụ lục 9.6).

D ư ợ c ĐIÉN VIỆT NAM V

Tro tồn phẩn

Khơng q 35,0 %. Dùng 1,0 g chế phẩm (Phụ lục 9.8).

Định lượng

Cân khoảng 0,800 g cao, cho vào ông ly tâm và thêm 10 ml

nước cât, trộn thật đêu. Thêm 20 ml dung dịch chì acetat

10 % (77), lác đèu và ly tâm với tóc độ 3000 r/min, trong

15 min. Gạn bò nước, trộn đêu căn với 5 ml dung dịch acid

acetic 10 % (TT) rồi thêm 25 ml dung dịch acid sulfuric1 N /77). Chuyển hết dung dịch vào bình định mức màu

nâu 100 ml, lắc đêu trong 60 min, sau đó thêm nước cất đến vạch. Lấy 20 ml dung dịch này cho vào ổng ly Lâm và ly tâm với tốc độ 3000 r/min, trong 15 min. Lây chính xác 2 ml dịch trong ờ phía trẽn, cho vào hình định mức 50 ml.

Thêm methanol (77) đèn vạch. Đo độ hâp thụ ờ bước sóng 325 nm (Phụ lục 3.1). dùng methanol (TT) làm mâu trăng.

Tính hàm lượng cynarin theo A (1 %, 1 cm), lây 616 là giá trị A (1 %, 1 cm) cùa cynarin ỡ bước sóng 325 nm. Hàm lượng cynarin (CiìH^Op) khơng được nhỏ hon 2,5 % tính theo chế phẩm khơ kiệt.

Bảo quản

Trong bao bi kín, chống ẩm. Đe nơi khô, mát.

CAO ĐẶC DIỆP HẠ CHẦU ĐÁNG

Extraction Phyỉỉanthi amarỉ spỉssum

Cao đặc diệp hạ châu đắng được bào chế từ lá cây Diệp

hạ châu đăng (Phvỉỉanthus amanis Schum, et Thonn.) họ

Thầu dầu (Euphorbiaceae) bàng phương pháp thích hụp để chê phâm có hàm lượng phyllanthin ôn định.

Chè phẩm phải đáp ứng các yêu cầu trong chuvên luận “Cao thuốc” (Phụ lục 1.1) và các yêu cẩu sau đày:

Mô tá

Thể chất mem, dèo, dồng nhất. Màu nâu sẫm đến đen. Mùi hăng đặc biệt. Vị rẩt đắng.

Định tinh

A. Lấy 0,5 g chế phàm, thêm 50 ml ethanol 90 % (TT), Iẳc

đêu, đun hồi lưu trong cách thủy 30 min. Lọc, bay hơi dịch lọc trén cách thủy đen còn khoảng 10 ml, chuyên vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 2 ml dịch chiết dê làm các phàn ứng sau đày:

Ong l : Thêm 4 - 5 giọt acidhydrocìoric /77), rói thêm một ít bột magnesi (TT). xuất hiện màu đỏ.

Ổng 2: Thêm 3 - 4 giọt dung dịch sắt ị 11ỉ) cìoricỉ 9 % (TT),

xuầt hiện màu xanh tím.

B. Lây 0,1 g chế phâm, thêm 5 ml nước, đun sôi trong vài

phút rồi lọc. Đê nguội, lấy 2 ml dịch lọc thêm 2 - 3 giọt

dung dịch gelatin ỉ % (77), xuât hiện tủa bông trăng.

c. Phương pháp săc ký lóp mịng (Phụ lục 5.4).

Bàn móng: Silica gel 60F2ị4.

Dung mói khai triẽn: Cloroform - methanol (7 : 3).Dung dịch thư: Lấy 0,5 g chế phẩm, hòa tan trong 20 ml nưrrc nóng, đê nguội, kiêm hóa băng amoniac (77) đến pH

9 - 1 0 , lấc dung dịch thu dược với cloroform (TT) 2 lần,

mồi lân 20 ml. Gộp các dịch chiết clorbrm, bay hơi trên cách thủy đẽn cịn khoáng 2 ml, dùng lảm dung dịch thử.

CAO DẶC DIỆP HẠ CHAU ĐANG

1387

</div>Trang 3<div class="page_container" data-page="3">

Dung dịch doi chiến: Lay 5 g Diệp hạ châu đẳng (mẫu

chuẩn), them 100 ml mrớc. đun sôi nhẹ trong 30 min, để

nguội, lọc. Cô dịch lọc tren cách thủy đốn còn 20 ml, dể

nguội, kiềm hóa bang amoniac (TTj đèn pH 9 - 10, lác dung dịch thu được với cỉoro/orm (TT) 2 lần, mỗi lần

20 ml. Gộp các dịch chiết cloroíbrm, bay hơi trên cách thủy đến còn khoanậ 2 ml, dùng làm dung dịch đổi chiếu.

Cách liến hành: Chấm riêng biệt lẽn cùng bản mỏng 20 pl

mồi dung dịch trên. Sau khi triên khai, lấy bản mỏng ra, (le

khơ ngồi khơng khí roi phun thuốc thừDragenebrff (77').

Quan sát dưới ánh sáng thường. Tren sẳc ký đồ thu được của dung dịch thừ phải có vết cùng màu sắc vá giá trị Rf với các vết trên sắc ký đồ của dung dịch đoi chiếu.

D. Phương pháp sác ký lớp mòng (Phụ lục 5.4).

Bern mỏng: Silica gcd

60F2U-Dung môi khai trien: n-Hexan - ethyl acetat (2 : 1).Dung dịch thử: Lay 0,4 g che phâm, hòa tan troné

20 ml nước nóng, đổ nguội, lắc kỹ dung dịch thu được với

cloroform (TT) 2 lần, mồi lần 20 ml. Gộp các dịch chiết

cloro loma, bay hoi trén cách thủy đen cắn, hòa tan can

trong 1 ml ethanol (77), dùng làm dung dịch thử.

Dung dịch đối chiều (ly. Lấy 4 g Diệp hạ châu đấng đằ cắt

nhò (mẫu chuẩn), them 100 ml nước, đun sôi nhẹ trong

30 min, đề nguội, lọc. Cô dịch lọc trẽn cách thủy đèn còn

20 ml, để nguội, lắc dịch thu được với chroform (77)

2 lần, mồi lằn 20 ml. Gộp các dịch chiết cloroforma, bay hơi

trên cách thủy đên cán, hòa tan cãn trong 1 ml ethanol (77).

Dung dịch đoi chiếu (2): Hòa tan phyllanthin chuán trong ethanol (TT) để được dung dịch có nống độ khoảng 2 mg'Vnl. Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên cùng bản mong 10 pl

mồi dung dịch trên. Sau khi triển khai, lây bản mỏng ra, đê

khỏ ngồi khơne khí rồi phun dung dịch acid sulfuric ỉ 0 % (ÍT). Sấy bàn mỏng ờ 120 °c đên khi hiện rõ vêt. Quan sát

bàn móng dưới ánh sáng thường hoặc ánh sáng tử ngoại tại bước sóng 366 nna. Trên sác ký dơ thu được cùa dung dịch thử phải có vết cùng màu sắc và giá trị Rf với các vết trên sắc kv đồ của dung dịch đổi chiếu (1) và (2).

Mất khối luựng do làm khô

Không được quá 20,0 % (Phụ lục 9.6, 1 g. 85 °c, 5 h).

Tro tồn phần

Khơng được q 10,0 % (Phụ lục 9.8).

Tro không tan trong acid hydroclorỉc

Không đưực quá 0,15 % (Phụ lục 9.7).

Can không tan trong nước

Hỏa tan 1,0 g chế phẳtn trong 50 ml nước cat nóng, lọc qua giấy lọc đã cân bì, rửa cắn và giấy lọc bang nước cát

cho lới khi nước rửa không màu, sấy can va giấy lọc ờ 100 ° c đến 105 fJC trong 3 h, lẩy ra để nguội trong bình hút âm 30 min, cân nhanh đe xác định khối lượng can. Lượng cần không được q 1,0 % tính theo che phẩm khơ kiệt.

Không được quá 20 phần triệu (Phụ lục 9.4.8).

Lấy 1 g chế phẩm, tiến hành theo phương pháp 3. Dùng 2 ml

dung dịch chì mâu 10 phàn triệu Ph (TỊ) đê chuân bị mầu

Pha động tì: Dung dịch acidphosphoric <9,7 % (77).

Dung dịch chucin: Hoà tan phyllanthin chuân trong methanol (77) để dược dung dịch có nồng độ chính xác

khoáng 30 pẹ/rnl.

Dung dịch thử: Càn chính xác khoảng 0,2 g chế phẩm

đã xác định độ âm vào bình định mức dung tích 50 ml,

thêm 5 ml nước, lắc kỹ đê phân tán mẫu đều. Thèm 30 tnl methanol (77), lắc siêu ảm trong 30 min. De nguội, bổ sung methanoỉ (77) vừa đù đcn vạch, lắc đều, lọc qua

Tiến hành sắc ký theo chương trinh dung môi như sau: DƯỢC ĐIÊN VIHT NAM V

Thòi gianPha động APha động B

Tiêm lần lượt dung dịch chuẩn, dung dịch thừ. Ghi sắc ký đồ. Tính hàm lượng phyllanthin trong chế phẩm dựa vào diện tích pic trên sác ký đồ thu được tù dung dịch thử. dung dịch chuẩn vả hàm lượng C24H.M0 6 trong phylỉalhin chuân. Hàm lượng phyllanthin (C24H34OD không được ít hơn

0.5 % tinh theo chẻ phẩm khô kiệt.

Bao quản

Bào quàn trong bao bi hút chân không, chổng âm. Dẻ nơi khơ, mát.

CAO ĐẠC ĐÍNH LĂNG

Extractum Poỉyscìacis /ruĩỉcosae spissum

Cao đặc đinh láng được điều chế từ rề cây Đinh làng

(Poìyscias /niticosa Harms), họ Nhân sâm (Araliaceae)

bàng phương pháp thích hợp để chế phẩm có hàm lượng acid oleanolic ổn định.

</div>Trang 4<div class="page_container" data-page="4">

Chế phẩm phải đáp ừng các yêu cầu trong chuyên luận “Cao thuốc” (Phụ lục 1.1) và các ycu càu sau đây:

Mô tả

The chất mềm dẻo, đồng nhất, màu nâu đen, mùi thơm.

Định tính

A. Hịa tan 1 e chê phàm trong 20 ml methanol (77) bâng

cách dùng đùa thủy tinh khuấy kỹ, lắc siêu âm trong 15 min, lọc. Được dịch lọc A.

Cho 5 ml dịch lọc A vào ống nghiệm, cơ cạn, thêm 10 mí nước cất, bịt miệng one nghiệm, lắc trong 15 s. Xuất hiện cột bọt bền ít nhất trong vịng 10 min.

Cho 1 ml dịch lọc A vào ổng nghiệm sạch, cơ cạn, hịa tan

cắn bằng 1 mỉ doroform (77). Thêm i ml anhydrid acetic

(IT), thêm từ từ theo thánh ống 1 ml acid sulfuric (77).

Xuất hiện vịng có màu từ hong đến tím đậm giữa 2 lớp dung dịch.

B. Phương pháp sắc ký lớp mòng (Phụ lục 5.4).

Bern mỏng: Silica gel 60GF254 đã hoạt hoả ở 100 °C trong 30 min.

Dung môi khai trỉèn: n~Butanol - acid acetic - nước (4 : 1 : 5),

lac hồn hợp trong 5 min, để yên, lấy lớp trên.

Dung dịch thử: Lấy 10 ml dịch lọc A cỏ đến can, hòa cắn

vớt 10 ml nước cất. Lấc dung dịch thu được với diethvl

ether (TT) cho đến khi lớp ether không màu hoặc màu

rất nhạt. Tiếp tục lẳc lớp nước hai làn, mồi lần với 10 ml

n-butanoỉ bỗo hòa nước (77), gộp dịch chiết n-butano!,

bốc hơi trên cách thủy đen cắn. Hòa cắn với 1 ml methanol

(TT) được dịch chẩm sắc ký.

Dung dịch đối chiếu: Lấy 10 g rễ Đinh lăng (mẫu chuẩn) đã

cat nhỏ, đun hồi lưu trên cách thủy sôi với 30 mỉ methanol

(TT) trong 2 h, lọc. Lấy dịch methanol cất thu hồi dung

môi và cô trên cách thủy đến cắn. Tiểp lục tiến hành chiết như mô tả tại phần Dung dịch thử, bắt đầu từ “hòa cắn với

10 ml nước cat... ",

Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bàn mòng 5 |il mỗi

dung dịch trên. Sau khi triền khai sắc ký, lấy bản mịng

ra, đc khơ ừ nhiệt độ phòng, phun dung dịch acid sulfuric

Ỉ0 % trưng ethanol (77), sấy bàn mòng ở 105

°c

cho tới khi hiện rõ vẽt. Quan sát dưới ánh sáng thường và dưới ánh sáng từ ngoại bước sóng 366 nrn. Trên sẳc ký đồ cùa dung dịch thừ phải cỏ các vết có cùng màu sắc và giá trị Rf với các vết trcn sắc ký đô cùa dung dịch đối chiếu,

c.

Phương pháp sắc ký lớp mòng (Phụ lục 5.4).

Bàn mòng: Silica gel 6OGF254

đã

hoạt hoả

ở 100 °c

trong 30 min.

Dung môi khai triển: Toỉuen - ethyl acetat (7 : 3).

Dung dịch thử: Lấy 0,1 g chế phẩm, thêm 10 ml dung dịch acid hydrocloric. 4 M ( 77), đun hồi lưu trong 4 h. Đổ

nguội, lọc, lăc dịch lọc 3 lân, mồi lần với 10 ml C-Iorofonn (77). Rửa dịch cloroíbrm với nước cất đến pH trung tính.

Tập trung dịch chiết clorofonn và bốc hơi trên cách thủy đến còn khoang 1 mỉ.

Dung dịch dôi chiếu: Dung dịch acid oleanolic chuẩn

0,1 % trong doroform (77).

D ư ợ c DIÉN VIỆT NAM V

Cách tiến hành: Châm riêng biệt lên bàn mòn ụ 5 fil mơi

dune dịch trịn. Sau khi triển khai sắc kỷ, lấy bán mỏng ra,

để khỏ ờ nhiệt độ phòng, phun dung dịch acid sulfuric 1 0% trưng ethanol (77), say bản mòng ờ 105 °c cho tói khi hiện

rõ vết. Quan sát dưới ánh sáng thường và dưới ánh sáng từ neoại bước sóng 366 nm. Trên sắc ký đồ cùa dung dịch thừ phải cho vết có cùng màu và giá trị Rj với vét trcn sắc ký đô cùa dung dịch đối chiếu.

Mất khối lưọmg do làm khô

Không được quá 20,0 % (Phụ lục 9.6. 1 g, 105 °c đến khối lượng không đổi).

Kjfn loại nặng

Không được quá 20 phần triệu.

Tiến hành phép thừ giới hạn kim loại nặng (Phụ lục 9.4.8, phương pháp 3), sử dụng 1 g chế phẩm và

2 ml dung dịch chì mau Ỉ0phần triệu Pb (Tỉ').

Định lưọììg acid olcanoỉic

Phương pháp sẳc ký lòng (Phụ lục 5.3).

Pha động: Acetonừril - nước (80 : 20).

Dung dịch thừ: Cân chính xác khoảng 5 g che phẩm vào

bình nón nút mài 100 ml, thêm 40 ml dung dịch acid

hydrocỉoric 4 M (77), lắc sicu âm 10 min. Đun sôi hồi

lưu trong 3 h, để nguội, lọc dịch thủv phân lấy cắn. Dùng 30 ml nước (chia làm 3 lần) tráng bình thủy phân và gộp

nước rửa và lọc qua giấy lọc trên. Dùng nước để rửa giấy

lọc và cắn đến khi nước rửa trung tính (thử băng giấy quỳ). Sấy cắn và giấy lọc ờ 60 °c đến khô (khoảng 2 h). Thêm

vào can 30 ml cloroform (Tĩ), đun sôi nhẹ trên cách thủy

5 min, lọc. Chiểt lại cắn như trên 2 lần nữa, tập trung các dịch chiết cloroform, cô trên cách thủy đến cạn. Hòa tan

can vừa đù trong 5 ml methanol (77), trộn đều, lọc qua

màng lọc 0,45 |im.

Dung dịch chuẩn: Cản chính xác khoảng 10 mg acid oleanolic

chuẩn vào bình định mức 10 ml, thêm 8 ml methanol (77), lac kỹ' để hòa tan, bổ sung methanol (77) vừa đủ đến vạch,

trộn đều. Lọc qua màng lọc 0,45 |im.

Điều kiện sắc ký :

Cột kích thước (25 cm X 4,6 mm) dược nhồi pha tĩnh c (5 fim) hoặc tương đương (cột Inertsil C18 là thích hợp). Detector quang phổ tử ngoại đặt ờ bước sóng 205 nm. Tổc độ dịng: 1,3 ml/min.

Thề tích tiern: 10 fii

Cách tiến hành:

Tiên hành sắc ký lẩn lượt với dung dịch thừ và dung dịch chuẩn. Tính hàm lượng acid oleanolic dựa vào diện tích pic thu được trên sẳc ký đồ của dung dịch thử, dung dịch chuẩn và nồng độ cùa dung dịch acid oleanolic chuẩn. Hàm lượng acid oleanolic (C'30H48Oj) trong chể phẩm không được ít hon 0,04 % tính theo chế phẩm khô kiệt.

Bảo quản

Trong bao bì kín, chốnẹ ẩm. De nơi khó ráo, mát.

CAO ĐẬC ĐINH LẢNG

1389

</div>Trang 5<div class="page_container" data-page="5">

CAO ĐẬC ÍCH MẢU

Exỉractum Leomirỉ /aponici spissmn

Cao đặc ích mẫu được bào chế từ phẩn trên mặt đất cùa

cây ích mẫu (Leomirns ịaponicits Houtt.). họ Bạc hà

(Lamiaceae) bang phương pháp thích hợp để chế phẩm có hàm lượng stachydrin ỏn định.

Chế phẩm phái đáp ứng yêu cầu trong chuyên luận “Cao thuốc” (Phụ lục 1.1) và các yêu cầu sau đâv:

Dung dịch thừ: Lấv 3 ml dung dịch thừ thu được trong

phàn Định lượng, cô trên cách thúy đen cạn. Hòa can trong

0,5 ml ethanoí (77) được dung dịch thử.

Dung dịch doi chiếu (/): Cân chính xác khoảng 1 g bột

thơ ích mẫu (mẫu chuẩn), chuyển vào tủi giấy lọc, đặl vào

bình Soxhlet và tiến hành chiết bàng ethanol (77) trong

khoáng 4 h. Lấy dịch chiết ethanol, cô dưới áp suất giảm

đến cịn khống 5 ml, chuyên vào cột chửa nhỏm oxyd

trung tinh (77) đã được chuẩn bị trước {lấy 10 g nhôm oxyd trung tinh (77), nhồi ướt bàng ethanoỉ 95 % (77)

vào cột thùy tinh có khóa đường kính trong khoảng 1.5 - 1.8 cm để có chiều cao khoảng 4 cm trong cột ì . Rửa giài

bàng 200 ml cthanol (77), tập trung dịch rìra giải vào bình

cầu 250 ml, cơ cạn dưới áp suất giảm. Hòa tan cắn trong

3 rnl ethanol (77), được dung dịch chấm sắc ký.

Dung dịch dối chiếu (2): Hòa tan stachydrin hydroclorid

chuẩn trong ethanoỉ (77) để dược dung dịch có nong độ

khoảng 1 mg/ml.

Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bàn mòng 10 pl mỗi

dung dịch trên. Sau khi triền khai sãc ký, lay bàn mong

ra, để khô ở nhiệt độ phòng, phun thuốc thừ Dragendorỷỷ'

(77) đến khi hiện rõ vết. Quan sát bàn mòng dưới ánh sáng thường. Trên sắc ký đồ cùa dung dịch thừ phái có các vết cùng giá trị Rf và màu sắc với các vết trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu (1) và (2).

Mất khối lượng do làm khô

Không được quá 20,0 % (Phụ lục 9.6, 1 g. 85 °c, 5 h).

Tro tồn phần

Khơng được quá 30,0 % (Phụ lục 9.8). T ro k h ô n g ta n tro n g a c id

Không được quá 3,0 % (Phụ lục 9.7).

Cắn không tan trong nước

Khơng được q 10,0 % tính theo chế phẩm khơ kiệt.

Hịa tan 1,0 g chế phẩm trong 50 ml nước cắt nóng, lọc qua giấy lọc đã cân bì trước, rửa giấy lọc và cắn bàng nước cất

CAO ĐẶC ÍCH iMẢU

nóng đốn khi mrởc rừa không màu, sấy cắn vả giấy lọc ờ 100 - 150 cc trong 3 h. đê nguội trong bình hút ấm 30 min, cân nhanh đổ xác định khối lượng.

Pha động: Acetonitriỉ - nước (91 : 9).

Dung dịch chitân: Hòa tan stachydrin hydroclorid trong Cỉhan (TI) dể thu được dung dịch có nồng độ chính xác

khoảng 0,6 mg/ml.

Dung dịch thù: Cân chinh xác khống ì ,0 g chế phẩm vào

bình nón nút mài dung tích 100 ml, thêm 3 ml nước, lắc siêu âm đê mầu phán tán đêu, thcm 60 ml cthanơỉ (77),

lác siêu âm trong 5 min, dun sôi hồi ỉưu trong cách thủy 2 lì. de nguội, lọc lấy dịch lọc. Tráng rùa bình và giấy

lọc bầng 150 ml ethanoỉ (77), gộp dịch rửa vào dịch lọc

tren, cỏ dưới áp suất giâm đên còn khoảng 5 ml, chuyên

vào cột chứa nhóm oxyd trung tính (77) đã dược chuẩn bị tiước Ịlẩv 10 g nhôm oxyd trung tính (77), nhồi ướt bang

ethanoỉ 95 % (77) vào trong cột thùv tinh có khóa, đường

kính ] ,5 cm dến 1,8 cm đc có chiều cao khống 4 cm trong

cột Ị . Rữa giải bàng 200 ml ethanoỉ (77), tập trung dịch

rừa giãi vào bình cầu 250 ml, cô cạn dưới áp suất giâm.

Hòa tan cắn vừa đủ trong 20 ml hon hợp acetonitriì - dung

dịch acid acetic 0,ỉ % (8 : 2), lọc qua màng lọc 0,45 pm. Dicu kiện sắc ký:

Cột kích thước (15 cm X 4,6 mm) được nhồi pha tĩnh aminopropyl liên kết silica gel (5 pm).

Detector quang phổ tư ngoại ở bước sóng 203 nm. Tốc dộ dịng: 1,0 ml/min.

Thổ tích tiêm: 20 pl.

Cách tiến hành: Tiêm riêng biệt dung dịch chuẩn, dung

dịch thừ vào hệ thống sầc ký. Dựa vào diện tích pic thu được từ dưng dịch chuẩn, dung dịch thử và hàm lượng C7HịjiNO->.HC1 trong stachydrin bydroclorid chuấn, tính hàm lượng stachydrin hydroclorid trong chế phẩm. Hàm lượng stachydrin hydroclorid khơng ít hơn 1,2 % (C7ÍIl3NCT.HCl) tinh theo chế phầm khơ kiệt.

Bảo quản

Trong bao bì kín, đẻ nơi khơ mát.

CAO KHƠ CHÈ DÂY

Extractum Ampeỉopsỉs siccus

Cao khơ chè dây được diều chế từ lá cua cây Chè dãy

(Ampeỉopsis cantoniensis Planch.), họ Nho (Vitaceae)

bằng phương pháp thích họp đê chế phẩm có tổng hàm lượng mvricetin và dihydromvricetin ổn định.

Chế phẩm phài đáp ứng các yêu cầu trong chuyên luận “Cao thuốc” (Phụ lục 1.1) và các vcu cầu sau đây:

DƯỢC ĐI EN VIỆT NAM V

</div>Trang 6<div class="page_container" data-page="6">

D ược PIÉN VIỆT NAM V

Mô tả

Bội màu vàng nâu, vị đăng hơi chát.

Định tính

A* Lấy khoảng 1,0 g bột chế phẩm cho vào một ông

nghiệm thêm ] 0 ml ethanol 90 % (77), lăc kỹ, đặt trên

cách thủv khoản« 1 min cho tan, lọc. Lây 1 ml dịch chièl

cho vào ống nghiệm nhò, thêm một ít bột magnesi (77) và 1 giọt acid hydrocỉoric (TO, dung dịch xuất hiện màu dò.

B. Phương pháp sắc ký lóng (Phụ lục 5.3).

Điều kiện sắc kỳ, Dung dịch thừ: Chuẩn bị như mục Định

Dung dịch chitán (ỉ)\ Hòa tan dihydromyricetin chuân

trong methanol (TT) đê thu được dung dịch có nơng độ

chính xác khống 0,2 mg/ml.

Dung dịch chitan (2): Hòa tan myricctin chuẩn trong methanol (77) đc thu được dung dịch có nồng độ chính

xác khoảng 0.0ỉ mg/ml.

Tiêm lần lượt dung dịch thử vả các dung dịch chuẩn (1) và (2) vào hệ thong sac ký theo các điều kiện đã nèu, ghi sắc ký đồ.

sẳc ký đồ của dune dịch thừ phải cho 2 pic có thời gian lưu tương tự với thời gian lưu của pic dihydromvricctin và mvricetin trên sac kv đo cùa các dung dịch chuẩn (1)

Dung dịch thù: Lấy 0,1 g chế phẩm, thêm 10 mỉ ethanol

(77), lác siêu âm trong 10 min, lọc. Cô dịch lọc trên cách

thủy đến cạn. Hòa tan cắn trong 1 till ethanol (77) được

dung dịch chấm sắc ký.

Dung dịch đồi chiếu: Lấy 1 g bột lá Chè dây (mẫu chuẩn),

thêm 50 mỉ ethanol 70 % (TT), đun hồi lưu trên cách thủy

30 min, lọc, chict lại bà nbư trên 1 lần nữa. Tập trung dịch chiêt ethanol, cô trên cách thủy đến cạn. Khuấy kỹ can

với n-buianol (77) 3 lần, mỗi lần 10 ml, lọc, gộp dịch lọc

butanol, cất thu hồi dung môi đến cạn, cô trên cách thủy

đên cắn. Hòa tan cắn trong 1 ml ethanol (77) được dung

dịch chấm sấc ký.

Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản mỏng 10 pỉ mỗi

dung dịch trên. Triên khai sắc ký đén khi dung môi đi được 12 cm đẻn 14 cm, lây bàn móng ra, đổ khơ ở nhiệt độ phịng.

Phun hỗn hợp dung dịch acid boric (77) 10 % và dung dịch

acid oxalic (77) 10 % (2 ; 1) và sấy bàn mỏng ừ 100 °C đốn

khi xuât hiện các vct. Quan sát đưcri ánh sán« thường. Trơn săc ký đơ của dung dịch thừ phải có các vết cùng màu và cùng giá trị Rf với các vết thu được trẽn sắc ký đồ cùa dung dịch đoi chiếu.

Mất khối lưọng do làm khô

Không quá 5,0 % (Phụ lục 9.6, l g. 100 cc . clén khối lượng không đối).

CAO KHỎ CHÈ DÂY

Kim loại nặng

Khơn« q 25 phần triệu (Phụ lục 9.4.8, phương pháp 3).

Dung 1,0 g chế phâm và 2,5 ml dung dịch chì mau ỉ0phân triệu Pb (77).

Tro sulíat

Khơng q 10,0 % (Phụ lục 9.9).

Giói hạn nhiễm khuấn

Đáp ứng yêu cầu về Giới hạn nhiem khuân đôi với thuốc dơng dược có nguồn gốc từ động, thực vật (Phụ lục 13.6, phương pháp đĩa thạch).

Tổng số vi sinh vật hiếu khí: Khơng q 104 CFƯ/g. Tổng số nấm: Không quá 10“ CFU/g.

Khơng được có vì khn gâv bệnh Escherìchia coỉi,

Salmonella, Pseudomonas aentgino.sa, Staphylococcus aureus.

Cân chính xác khoảng 5 g chế pham vào bình nón nút mài 200 ml đã được liệt trùng và đã cân bì. Thêm một lượn2

dung dịch natri clorid 0,9 % võ trùng vừa đù để thu được

dung dịch có nồng độ 10ự lắc đều. Từ dung dịch trên pha loãng thành các dung dịch có nồng độ 107 107.. rồi tiến

Dung dịch thử: Càn chính xác khoảng 0,1 g che phẩm cho

vào một bình định mức 50 ml, thcm khoảng 30 ml methanoỉ (77). lấc siêu âm 15 min, đê nguội, thêm methanol (77) đến

vạch, lắc đều. Ly tâm lấy dịch trong, hút chính xác 2 ml dịch trong ờ phía trên cho vào bình định mức 25 mỉ, thêm

methanoỉ (77) đến vạch, lấc đều, lọc qua màng lọc 0,45 pm. Dung dịch chuân: Hòa tan dihydromvricetin và myricetin

chuần trong methanol (77) đẽ thu được dung dịch có

nong độ khoảng 0,04 mg đihydromyricetin trong 1 ml và 0,025 mg myricetin trong ỉ ml, lọc qua màng lục 0,45 pm.

Nhiệt độ phân tích: Nhiệt độ phịng.

Tiên hành sắc ký theo diều kiện đã nêu. Dựa vào diện tích pic của dihydromvricetin và myricetin trên sắc ký đồ của dung dịch chuản, dung dịch thừ, nông độ các dung dịch chuẩn đê tính hàm lượng dihydromyricetìn và myricetin trong che phẩm.

Tổng hàm lượng đihyđromyricetin (CiƯựiOịị) và myricetin (Ci5H |0Ox) không dưới 30,0 % (theo khối lượng) tính theo chế phâm khơ kiệt.

Bảo quản

Bào qn trong bao bì kín. đổ nơi khơ ráo thoáng mát.

1391

</div>Trang 7<div class="page_container" data-page="7">

D ư ợ c DIÊN VIỆT NAM V

CAO KHÔ HUYÉT GIÁC

Extraction Dracaenae siccus

Cao khô Huyết giác đuợc điều chế tử phần gỗ có chứa

nhựa của cây Huyết giác Dracaena cambodìana Pierre ex Gagnep hoặc Dracaena cochinchincnsis (Lour.)

S.C.Chen, họ Huyết giác (Dracaenaceae) bàng cách chiết bang ethanol 96 % hay bang dung rnơi thích hợp khác. Chc phâm phải đáp ứng các yêu cầu trong chuyên luận “Cao thuốc” (Phụ lục 1.1) và các yêu câu sau đây:

Mô tả

Bột màu nâu đò, mùi thơm nhẹ đặc trưng, vị hơi chát. Không tan trong nước, ether và các dung dịch acid loãng; tan trong methanol, ethanol và các dung dịch kiềm lỗng.

Định tính

A. Phương pháp sac ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4).

Bern mỏ nạ: Silica gc/ HF-S4 chứa 0,3 % natri carboxv-

methvỉceỉulose. hoạt hóa ở 105 ° c trong 30 min.Dung mỏi khai triên: c lo ro form - methanol (99 : 1).Dung dịch thử: Lây khoáng 0,5 g chế phẩm, thêm 25 ml ether dầu hỏa (40 °c đến 60 °C) (Tỉ) lẳc siêu âm trong

15 min. Để nguội, lọc, giữ lại cắn cho phép thử B. Cô dịch

lọc trên cách thủy đến cạn. hòa can trong 1 ml doroform

(7T) được dung dịch chẩm sác ký.

Dung dịch đoi chiếu: Lấy 3 g bột Huyết giác (mẫu chuẩn)

cho vào binh nón, them 20 ml ethanol 96 % (77), lac siêu

âm trong 15 min, lọc. Cô dịch lọc trên cách thủy đến cạn.

Thêm vào cán 25 ml ether dầu hỏa (40 ° c đến 60 °Cy ÍTT)

lác siêu âm trong 15 min. Đê nguội, lọc, giữ lại can cho phép thử B. Cô dịch lọc trên cách thủy đến cạn, hòa cẩn

trong 1 ml cloroform (77) được dung dịch chẩm sắc ký.

Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản mỏng 10 pl mỗi

dung dịch trên. Triển khai sắc kỷ đen khi dung môi đi được dược khoảng 12 cm, lấy bán mỏng ra, để khô ờ nhiệt độ

phòng, phun dung dịch acid sulfuric ỉ 0 % trong ethanol.

Sấy bản mòng ờ 110 °c đến khi hiện rõ vết. Quan sát bản mòng dưới đèn tử ngoại ờ bước sóng 366 nm. Trên sắc kỷ đồ cùa dung dịch thử phải có các vét có cùng màu sac và giá trị Rf với các vết trên sắc ký đồ của dung dịch đổi chiếu. B. Phương pháp sắc ký lớp mòng (Phụ lục 5.4).

Bàn mỏng: Silica gel HFJU chửa 0,3 % natri carboxy- methyỉceỉuỉose, hoạt hóa ở 105 ° c trong 30 min.

Dung môi khai triển: Ether dew hòa (40 °c đến 60 °C) -

ethyl acetat (10: 1).

Dung dịch thừ: Lấy cắn thu được ờ phần dung dịch thử

trong phép thử A, để trẽn cách thủy cho bay hơi het ether

dầu hòa, thêm 25 ml ethyl acetat (77), lắc siêu âm trong

15 min, để nguội, lọc. Cô dịch lọc trên cách thủy đến khi còn khoảng 5 ml, để nguội rồi chuyển lên cột thủy tinh đường kính khống 10 mm có chửa 1 g chất nhồi polyamid đã được xử lý, kích thước hạt 14 - 20 pm, được

nhồi ướt. Rửa giải bằng 100 ml ethanol 50 % (ÍT) với

tốc độ 1,5 ml/min, loại bỏ dịch rửa giải. Tiếp tục rửa

giải bằng 50 ml ethanol (77) với toe độ 1,5 ml/min, gộp

CAO KHÒ HUYẾT GIÁC

dịch rưa giai, cô trên cách thủy dến cạn, hòa cắn trong

ỉ ml cỉoro/orm (77) được dung dịch chấm sắc ký.

Dung dịch dôi chiêu: Lây căn thu được ớ phần dung dịch

đôi chiếu trong phcp thừ A, tiến hành chiết như mô tà ờ phần Dung dịch thừ.

Cách tiên hành: Chàm riêng biệt lên bân mỏng 10 Ị.il mỗi dung dịch trẽn. Triên khai sắc kỷ đến khi dung môi đi được khoảng 12 cm. lấy bàn mỏng ra, để khỏ ờ nhiệt độ phòng

phun dung dịch acid sulfuric 10 % trong ethanol (77). sấy

bản mòng ơ 110 °c đốn khi hiện rõ vết. Quan sát bàn mỏng dưới đèn tứ ngoại ờ bước sóng 366 nm. Trcn sắc ký đồ của dung dịch thư phai có các vết có cùng màu sắc và giá trị Rf với các vết trcn sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu.

Xử lý polyamid: Lây polyamid vào cốc cỏ mỏ, thêm ethanol 96 % (77) ngập bề mặt, khuấy đều, sau khi hết bọt

khí thì chuyền toàn bộ hổn hợp vào cột thủy tinh có khỏa,

đường kính thích hợp (h'r 10 mm trở lên), dùng ethanol

90 - 95 % (77) để rửa cho đốn khi dịch rừa trong suốt. Rửa

tiếp bang hỗn họp dung dịch natri hydroxvd 5 % - nước

cắt (2,5 : 1) có chứa 2,5 % acid acetic (77), cuối cùng rửa

bằng nước cat đen khi nước rửa trung tính, lấy poiyamid

đà rửa ra để khơ ờ nhiệt độ phòng,

c. Phương pháp sác ký lóp mịng (Phụ lục 5.4).

Bàn mỏng: Silica gel 60F2Ĩ4, hoạt hỏa ơ 105 °c ưong 30 min. Dung môi khơi triền: Toỉuen - ethyl acetal (9 : 1).

Dung dịch thử: Hòa tan 0,15 g chế phẩm trong 10 ml ethanol 96 % ( T ĩ) được dung dịch chấm sác ký.

Dung dịch dối chiếu: Lấy 1 g bột Huyết giác (mẫu chuẩn)

cho vào bình nón, thèm 10 ml ethanol 96 % (77), lắc siêu

âm trong 10 min, lọc, dùng dịch lọc làm dung dịch châm sẳc ký.

Cách tiến hành: Chẩm riêng biệt lên bản mỏng 5 pl mỗi

đunẹ dịch trên. Triển khai sắc kỷ đến khi dung môi đi được khoang 12 cm, lấv bán mịng ra, đê khơ ờ nhiệt độ phịng,

phun dung dịch acid sulfuric Ỉ0 % trong ethanol (Tí). Sây

bàn mòng ờ 110 cc đến khi hiện rơ vết. Quan sát bàn mịng ó ánh sáng thường và dưới ánh sáng từ ngoại ò bước sóng 366 nm. Trên sắc ký đổ của dung dịch thừ phài có các vet có cùng màu sắc và giá trị Rf với các vết trên sắc ký đồ của dung dịch đoi chiếu.

D. Trong phần định lưọTig, sắc ký đồ của dung dịch thừ phải cho pic có cùng thời gian lưu vói thời gian lưu cùa pic loureirin B trên sắc ký đơ cùa dung dịch chn.

Độ hấp thụ

Cân chính xác khoáng 20 mg chê phẩm vào binh định mức

50 ml, thêm 30 ml ethanol (77), lấc kỹ đê hòa tan. thêm

ethanol (77) vừa đú đến vạch, lấc đều, lọc. Loại bỏ 10 ml

dịch lọc đầu, hút chính xác 5,0 ml dịch lọc sau vào bình

định mức 100 ml. them ethanol (77) vừa đù đến vạch, lac

đều. Đo độ hấp thụ của dung dịch thu được (Phụ lục 4.1) ờ

bước sóng 284 nm, mẫu trang là ethanol (TT).

Độ hấp thụ đo được không được dưới 0,40.

Cấn không tan trong ethanol

Khơng được q 1,5 % tính theo chế phẩm khô kiệt.

</div>Trang 8<div class="page_container" data-page="8">

CAO KHƠ LÁ BẠCH QUẢ

Cản chính xác khoảng 1,0 g chế phẩm vào bình nón nút

mài 100 m Ị thêm 50 ml ethunoỉ (TT), ngâm trong 30 min,

tiếp tục lắc mạnh để hòa tan trong 20 min. Lọc qua giây loc (đã được sấy ờ 105 °c trong 3 h và cân trước), rừa cấn

bang ethanoỉ 677) dến khi dịch lọc không màu. sấy giấy

lọc và cắn ờ 105 °c trong 3 h. Dẻ Iiẹuội trong bình hút ấm 30 min và cân nhanh.

Tro tồn phần

Khơng được q 1,0 % (Phụ lục 9.8, phưcmg pháp 1).

Kim loại nặng

Không quá 20 phân triệu (Phụ lục 9.4.8).

Lẩy 1 g che phẩm, tiên hành thử theo phương pháp 3. Dùng

2 ml dưng dịch chì mầu 10 phần triệu Pb (Tí) để chuân bị

dung dịch đối chiếu.

Mất khối lưọng do làm khô

Không được quá 7,0 % (Phụ lục 9.6). (1 g; 100 °C; 5 h).

Định lưọTig

Phương pháp sắc ký long (Phụ lục 5.3).

Pha động: Dung dịch acid aceỉỉc. ỉ % - acetonỉtrỉỉ

(61 : 39), điều chinh tỷ lệ nếu cần.

Dung dịch thừ: Cán chính xác khoảng 3,5 g chế phẩm vào

bình dịnh mức 50 ml, thêm 40 mí methanoỉ (77), lắc siêu âm trong 15 min, đẽ nguội, thêm methanoỉ (77) vừa đủ

đen vạch, lăc đều, Lọc, loại bò 10 ml dịch lọc đầu, hút chính xác 5,0 ml dịch lọc sau vảo bình định mức 50 ml, thêm pha động vừa đu đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 pm.

Dung dịch chuẩn: Hòa tan Loureirin B chuẩn trong methanoỉ (77) đê được dung dịch có nồng độ chính xác

khoảng 0,45 mg/ml. Hút chính xác 5,0 ml dung dịch trên vào bình định mức 50 mi, thềm pha động vừa đủ đến vạch, lọc qua màng lọc 0,45 ftm.

Điêu kiện sắc ký:

Cột kích thước (250 mm X 4,6 mm), nhồi pha tĩnh c (5 pm) hoặc tương đương. Cột Inertsil ODS-3 là thích hợp. Tơc độ dịng: 1,0 ml/min.

Detector quang phổ hr ngoại đặt ở bước sóng 276 nm. Thề tích tiêm: 20 ui.

Cách tiến hành:

Ticm riêng biệt dung dịch chuẩn và dung dịch thử. Tiến hành sãc ký theo điêu kiện đă nêu, ghi lại thời gian lưu, diện tích cùa pic loureirin B. Dựa vào diện tích pic của lourcirin B trên sẳc ký đồ cùa dung dịch thử, dung dịch chuân và hàm lượng C lgH2o05 trong loureirin B chuẩn để tính hàm lượng Ioureirin B trong chế phẩm.

Hàm lượng loureirin B (C |SH20O5) trong chế phẩm khơng ít hơn 0,45 % tính theo chế phẩm khô kiệt.

Bảo quản

Trong bao bi kin, để nơi khô ráo, thoáng mát, tránh ánh sáng.

DƯỢC ĐIÊN VIỆT NAM V

CAO KHÔ LẢ BẠCH QLẢ

Extraction Fold Ginkgo siccus

Cao khô lá bạch quả được bào ehe từ lá cày Bạch quà

(Ginkgo hilaba L.), họ Bạch quá (Ginkgoaceae) theo

phương pháp thích hợp dể chế phẩm cỏ hàm lượng flavonol ẹlycosid vá terpen lacton ôn định.

Chế phẩm phải đáp ứng các yêu câu trong chuyên luận “Cao thuốc” (Phụ lục 1.1) và các yêu cầu sau đây:

M ota

Bột có màu nâu vàng nhạt hoặc nảu đậm. Vị hơi đắng.

Định tính

A. Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4).

Bàn mong: Silica gel G60Fĩỹ4.

Dưng mói khai trien: Ethyl acetat - butan-2-on - acid formic - nước ( 5 : 3 : 1 : ỉ).

Dung dịch thừ: Lấy 0,2 g chế phẩm, thêm 15 ml n-butanol

(77), ngâm trong cách thủy ấm 15 min, thình thoảng lấc đều, để nguội, lọc, bay hơi dịch lọc tới cắn khô. Hòa tan

cắn trong 6 ml ethanol 95 % (Vf) được dung dịch thử.

Dung dịch đồi chiếu: Lấy 0,2 g cao khô Bạch quà (mẫu

chuẩn), chiết bàng cách tương tự như dung dịch thừ, được dung dịch đối chiếu.

Cách tiến hành: Chấm riêng biệt 10 pỉ mỗi dung dịch trên

lên bản mòng. Sau khi triển khai sắc ký, lấy bản mỏng ra

đê khô trong khơng khí, phun dung dịch nhơm cỉorid 3 %

trong ethanol 677), sấy bản mỏng ờ 120 °C’ trong 10 min.

Quan sát dưới ánh sáng từ ngoại ở bước sóng 366 nm. Các vêt phát huỳnh quang thu được trên sắc ký đo của dung dịch thử phải có củng màu sắc và giá trị Rf với các vểt thu được trên sắc kv đồ cùa dung địch đối chiếu.

B. Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4).

Bern mỏng: Silica gcỉ 60 F2Ị4 tráng sàn nhúng khoảng 2 s

trong dung dịch gồm 8 g natri aceỉat 677) hịa trong 200 ml

methanol (Tỉ), sau đó sấy ử 70 ° c trong 10 min.

Dung môi khai triên: Tobten - ethyl acetaỉ - acetan - methanol (10 ; 5 : 5 : 0,6).

Cách tiến hành: Chấm riêng biệt 15 p.1 mỗi dung dịch

thừ và dung dịch chuàn troim mục Terpen lacton ỉên bàn mỏng. Sau khi triển khai sắc ký, lấy bàn mịng ra để khơ ở

nhiệt độ phòng, phun anhỵdrid acetic 677), sấy bản mòng

ờ 160 °c trong 10 min. đè nguội. Quan sát dưới ánh sáng từ ngoại ờ bước sóng 254 nm.

Các vết thu đưực trên sắc ký đồ của dung dịch thừ phải có cùng màu sắc và giá trị Rr với các vết thu được trên sẳc ký đô của dung dịch chuẩn.

c . Trong phần Định lượng ílavonol glycosid toàn phần: Thời gian lưu của các pic quercetin, isorhamnetin và kaempferol trên sắc ký đồ của dung dịch thừ phải tương ứng với thời gian lưu cùa các chất đó trên sắc ký đồ cùa dung dịch chuản. Ty lệ diện tích pic của quercetin và kaemplerol là 0,8 đến 1,2 và tỷ lệ diện tích pic cua isorhamnetm và quercetin phai lớn hon 0,15.

</div>Trang 9<div class="page_container" data-page="9">

CAO KHÒ LÁ BẠCH QUA

Mất khối lượng do làm khô

Không được quá 5,0 % (Phụ lục 12.16, dùng 1 g chế phẩm để tiến hành thử).

Cắn sau khi nung

Không được quá 0,8 %.

Lấy một chén sứ hoặc chén platin nung tới đò trong 30 min. Đe nguội trong bình hút ẩm rồi cân. Lấy chính xác 1 g che phẩm rải đều vào chén nung, đốt nhẹ để than hóa hoàn toàn, để nguội, làm ẩm cắn bàng 0,5 m! đến 1 ml

acid suỉ/uric (77). Đốt nhẹ cho đến khi khơng cịn khói

trắng bay lên, rồi đem nung trong lò nung ỡ 500 °c đến 600

°c

cho đến khi vơ cơ hóa hồn toàn (cắn màu trắng hay xám nhạt). Đc nguội trong bình hút âm và cân, nung lại ở 500

°c

đốn 600 °c đến khối lượng không đỏi.

Kim loại nặng

Không được quá 20 phần triệu.

Tiến hành phép thử giới hạn kim loại nặng (Phụ lục 9.4.8,

phương pháp 3), sừ dụng 1 g chế phẩm và 2 ml dung dịch chì

mẫu ỉ ũ phản triệu Ph (77) để chuẩn bị dung dịch đổi chiếu.

Acid ginkgolic tồn phần

Khơng được quả 10 phần triệu tính theo chế phâm khơ kiệt. Phương pháp sắc kỷ lòng (Phụ lục 5.3).

Pha động: Methanoỉ - dung dịch acỉd acetic bảng ì %

(90: 10).

Dung dịch thử: Cân chính xác khoáng 10 g ché

phẩm vào bỉnh nón nút mài, thêm chính xác 50 ml

ether dầu hỏa (60 ữC đến 90 °Q (77) và cân. Đun hồi lưu

trong 2 h, để nguội, cân lại, bù khối lượng bị mất bang

ether dầu hỏa (60 ° c đến 90 °C) (77), lắc kỹ, lọc. Lấy

chỉnh xác 25 ml dịch lọc, thu hồi dung môi tới khô trong

chân khỏng, thêm chính xác 2 mỉ methanoỉ (77), đậy kín

và lắc đều.

Dung dịch chuẩn: Hòa tan một lượng acid ginkgoneolic

chuẩn trong methanoỉ (77) để có dung dịch có nồng độ

chính xác khoảng 5 ịig/ml.

Ilịa tan một lượng acid ginkgolic tồn phần trong methan

(77) đẻ được dung dịch có nồng độ khoảng 100 pg/ml đe làm dung dịch chuẩn cho việc nhận dạng các pic.

Diêu kiện sác kv:

Cột kích thước (25 cm X

4,6

mm) được nhồi pha tĩnh

c

(10 um) hoặc tương đương (cột RP 18 là thích họp). Detector quang phổ tử ngoại đặt ờ bước sóng 310 nm. Tốc độ dịng: 1,0 ml/min.

Thể tích tiêm: 10 pl.

Cách tiến hành:

Tiến hành sắc ký' với dung dịch chuẩn. Tính số đĩa lý thuyết cùa cột. sổ đĩa lý thuyết cùa cột khơng được ít hưn 4000 tính theo pic acid ginkgoneolic.

Tiến hành sắc ký lần lượt với dung dịch thử và dung dịch chuẩn. Xác định tơng diện tích pic cùa các acid ginkgolic trong dung dịch thừ, xác đinh những pic này bằng cách đối chiếu với những pic tương ứng thu được trên sắc ký đồ cùa

DƯỢC ĐI ẺN VIỆT NAM V

dung dịch chuẩn chứa acid ginkgolic tồn phần, tính hàm lượng acid ginkgolic toàn phần theo acid ginkgoneolic.

Định lượng flavonol glycosid toàn phần

Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3).

Pha dộng: Methanol - dung dịch acid phosphoric 0,4 %

(55 : 45)

Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 35 mg chế phẩm,

thêm 25 ml hỗn hụp methanol (77) và dung dịch acid

hydrocỉoric 25 % (TT) (4 : 1). Đun hồi lưu trên cách thủy

trong 30 min, làm nguội đơn nhiệt độ phịng ngay lập tức, chuyển toàn bộ hồn họp vào bình định mức 50 ml, pha

loãng bằng methanol (77) tới vạch, lắc đều, lọc, dùng dịch

lọc làm dung dịch thử.

Dung dịch chuẩn: Hòa tan lần lượt quercetin chuẩn,

kaempferol chuân và isorhamnetin chuẩn trong methanol

(77) đổ có dung dịch có nồng độ chính xác lần lượt khoảng 30 pg, 30 pg và 20 pg/mỉ mồi chất trên. Hoặc càn chính xác 35 mg cao khô Bạch quả chuẩn đã biết hàm lượng quercetin, kaempferol và isorhamnetin, tiến hành theo như mô tà ớ mục Dung dịch thử để chuẩn bị dung dịch chuẩn.

Điêu kiện sắc kị':

Cột kích thước (25 cm X 4,6 tnm) được nhồi pha tĩnh c (5 Ị.im) hoặc tương đương (cột RP 18 là thích họp). Detector quang phổ từ ngoại đặt ở bước sóng 360 nm. Tốc độ dịng: 1,2 ml/min.

Thẻ tích tiêm: 10 pl

Cách tiến hành:

Tiển hành sắc ký với dune dịch chuẩn. Tính số đĩa lv thuyết của cột. So đĩa lv thuyết cùa cột khơng được ít hơn 2500 tính theo pic quercetin.

Tiến hành sắc ký lần hrợt dung dịch thử và dung dịch chuân. Tính hàm lượng quercetin, kaempferol và isorhamnetin dựa vào diện tích các pic thu được trên sấc ký đồ cùa dung dịch thừ và dung dịch chuẩn, sau đỏ chuyển đổi thành hàm lượng fiavonol glycosiđ toàn phàn (X %) theo cóng thức

Hàm lượng flavonoid tồn phần tính theo flavonol glycosid (P.t.ỉ = 756,7) khơng dược ít hơn 24,0 % tính theo chế phám khô kiệt.

Terpen lacton

Phương pháp sắc kv lóng (Phụ lục 5.3).

Pha động: Mcthanol - nước theo chương trình dung mơi. Các dung dịch chuân: Hòa tan lân lượt bilobaliđ chuân,

ginkgolid A, B, c chuân (càn chinh xác) trong methanoỉ

</div>Trang 10<div class="page_container" data-page="10">

DÀU GẰC

(Tĩ) để được các dung dịch chuẩn hỗn hợp có nồng độ lần

lượt như sau để xây dựng đường chuẩn:

Duno dịch chitan ỉ: Dung dịch có chứa bilobalíđ

1 0 mg/ml, ginkgolid A 0,5 mg/ml, ginkgolic! Ü 0,5 mg/ml, einkgolid c 0,5 mg/ml.

Đun° dịch chuồn 2: Dung dịch có chứa bilobalid 0,5 mg/ml,

cinkgolid A 0,25 mg/ml, gínkgolid B 0,25 mg/ml, ginkgolid C 0,25 nig/ml.

Dung dịch chuẩn 3: Dung dịch có chứa bilobalid 0,25 mg/ml,

oinkgolidA0,125 mu/ml, ginkgolid B 0,125 mg/mi, ginkgolid C 0,125 mg/ml.

Dung dịch thử: Càn chính xác 0,15 g chế phẩm, them

10 ml nước, làm rã trong cách thủv ấm, thêm 2 giọt dung

dịch acidhvdrocìoric 2 % (TT), chiết 4 lần với ethyl acetat (77'), lẩn thứ nhất veri 15 ml, ba lần tiếp theo mỗi lần với

10 ml, gộp các dịch chiết ethyl ace tat và rửa với 20 ml

dung dịch natri acetat 5 % (77), rửa lớp dung dịch na tri

acetat ban« 10 ml ethyl acetal (TỊ'). Gộp các dịch chiết và dịch lira ethyl ace tat, rửa 2 lần, mồi lần bane 20 mỉ nước, tách lớp nước và rửa bàng 10 ml ethyl acetat (IT). Gộp tất

cà các dịch ethyl acetat, cất thu hồi dung môi tới cắn khô

hoặc cô trẽn cách thủV đến can. Dime methanol (TT) đổ

hịa tan và chun tốn bộ căn vào binh định mức 5 ml và

thêm methanol (Tí) den vạch.

Điêu kiện sãc ký:

Cột kích thước (0,25 m x 4,6 min), nhồi pha tĩnh c (5 pm) dùng cho sắc ký.

Detector tán xạ bay hơi: 105 °c, khí nitrogen 2 L/min. Tơc độ dịne: 1,0 ml''min.

Thể tích tiêm: 20 pl.

Cách tiên hành'.

Tiên hành sac ký theo chương trình dung mơi như sau:

DƯỢC ĐIÊN VIỆT NAM V

45 - 45,1 52 -+ 75 48 —*■25

Kiêm tra sự thích hợp của hệ thông: Tiến hành sắc ký với dung dịch chuân bilobalid. Tính số đĩa lý thuyết của cột. Sơ đìa lý íhut cùa cột khơn« ít horn 2500 tính theo pic bilobalid.

Tiên hành sac ký lần lượt với các dung dịch chuẩn ờ trên, ghi săc ký đô, tính diện tích pic. Vẽ đồ thị tương quan giữa logarit (In) của nông độ và logarit (ln) của diện tích pic cùa từng chắt.

T iêm dung dịch thử vào hệ thống sắc ký, tiến hành sấc ký theo điêu kiện đã mô tả, ghi sắc ký đồ, thời gian lum và diện tích pic từng chất.

Hàm lượng mỗi terpen [acton được tính dựa trên diện tích pic trong dung dịch thừ và đường chuẩn tương ứng, cụ thể như sau :

Nòng độ (mgdnl) của terpen lacton trong dung dịch thừ dược tinh theo công thức (2) sau đày:

< In A-b j

Címg/mỉ) — c

Trong đó:

c là nồng độ terpen lacton (mg/ml) trong dung dịch thử, A là diện tích pic cúa tcrpen lacton,

a, b là các giá trị tìm được từ phương trình hồi qui tuyến tính (y = ax + b) cùa terpen lacton tương ứng thu được từ đường chuẩn sau khi đã chuycn dồi sang ln.

Hàm lượng phàn trăm của mồi terpen lacton được tính theo cịng thức (3) sau đây:

P(%) - —X 10 * 100 X --- —

---1000 m X (100 - b) (3)

Trong đó:

p là hàm lượng phần trăm (kl/kl) cùa mỗi terpen laclon, c là nồng độ terpen lacton (mg/ml) trong dung dịch thừ được tính từ đường chu ân như trên,

tn là khối lượng cân (g) của mầu thừ, b là độ ẩm của mẫu thử (%).

Hàm lượng tcrpcn lacton toàn phần bàng tổne hàm lượng mỗi terpen lacton được tính ờ trên.

Hàm lượng terpen lacton toàn phần trong chế phẩm không được ít hơn 6,0 % tính theo tồng hàm lượng của bilobalid (C15H180 8), ginkgolid A (CịoH^Oọ), ginkgolid B (Q oIH ^ịo), ginkgolid c (CẠoI^Oịi), tính theo chế phẩm

Dầu ép từ màng đò phơi hay sấy khô của hạt cây Gấc

(Momordica cochinchinemis (Lour.) Spreng), họ Bí

Tính chất

Chất lõng sánh, trong, màu đỏ, mùi thơm ngọt dặc biệt, vị béo không khé cổ. Có thổ có cấn carotenoid khi đe lâu hoặc khi để ờ nhiệt độ 0 cc đến 5 °c.

</div>