Hệ thống protein dung hợp với GST (HỌ VECTOR pGEX) (tt) doc
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (157.05 KB, 7 trang )
HỆ THỐNG PROTEIN DUNG
HỢP VỚI GST
(HỌ VECTOR pGEX) (tt)
III. Phương pháp phát hiện
protein dung hợp với GST:
III.1. Phát hiện protein dung hợp
với GST nhờ hoạt tính enzyme:
Sản phẩm protein dung hợp với
GST từ vector pGEX được phát
hiện dựa vào hoạt tính của GST
trên cơ chất không màu CDNB (1-
chloro-2,4-dinitrobenzen) và tạo ra
sản phẩm có màu, có phổ hấp thu
cực đại ở bước sóng 340 nm (1).
Hình 2: Phương pháp phát hiện
protein dung hợp với GST bằng
hoạt tính enzyme (1).
III.2. Phương pháp lai miễn dịch:
Protein dung hợp được phát hiện
bằng kháng thể đặc hiệu kháng
nguyên đã được đánh dấu. Sau khi
protein dung hợp được phân đoạn
bằng điện di trên gel
polyacrylamid, các vạch protein
được chuyển thẩm lên màng lai.
Sau đó màng lai đựơc ủ với kháng
thể thứ nhất (kháng thể kháng
GST-anti GST IgG), bắt đặc hiệu
với protein dung hợp. Kháng thể
kháng GST là một kháng thể đa
dòng được tinh sạch từ huyết thanh
của dê mà được gây miễn dịch với
GST của Schistosoma japonicum.
Sau đó màng lai được ủ với kháng
thể thứ hai đã được đánh dấu
(kháng thể thứ hai gắn đặc hiệu với
đoạn Fc của kháng thể thứ nhất).
Tùy thuộc vào kháng thể thứ hai
được đánh dấu mà cách phát hiện
có khác nhau, dựa vào sự biến đổi
màu hoặc tín hiệu phát huỳnh
quang.
Hình 3: Phương pháp lai miễn
dịch (1).
