Hệ thống protein dung hợp với GST (HỌ VECTOR pGEX) (tt) ppt
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (143.83 KB, 5 trang )
HỆ THỐNG PROTEIN
DUNG HỢP VỚI GST
(HỌ VECTOR pGEX) (tt)
IV. Tinh chế protein dung hợp với
GST:
Protein dung hợp với GST từ dịch
ly giải của tế bào vi khuẩn dể dàng
được tinh chế nhờ ái lực cao giữa
glutathione với GST. Sử dụng
glutathione được gắn kết với giá
thể Sepharose trong cột săc ký, khi
cho hổn hợp protein qua cột,
protein dung hợp với GST sẽ gắn
với glutathione và được giữ lại
trong cột. Các protein khác không
gắn và sẽ được rửa trôi qua cột.
Protein dung hợp sau đó được dung
ly ra khỏi cột ở điều kiện trung tính
và không biến tính bằng chất khử
glutathione (1).
Protein mục tiêu được cắt khỏi
GST của protein dung hợp nhờ hoạt
tính của protease (PreScission,
thrombin hoặc factor Xa) có khả
năng nhận biết vị trí cắt đặc hiệu
trên protein dung hợp. Phản ứng cắt
này có thể được thực hiện khi
protein dung hợp đang được giữ lại
trên cột. Protein mục tiêu đã tách
khỏi GST được dung ly bằng dung
dịch rửa cột.
Tuy nhiên, trong trường hợp ứng
dụng cần có chức năng của GST
trong protein dung hợp thì sản
phẩm protein dung hợp chỉ cần
được tinh chế ở dạng protein dung
hợp với GST.
Hình 4: Phương pháp tách chiết
protein dung hợp với GST.
Tài liệu tham khảo:
1. Stan Metzenberg, Fusion
proteins and display libraries
(Biology 470 – Biotechnology).
California State University
Northridge.
2. GE healthcare. pGEX Vectors
(GST Gene Fusion System).
3. GE healthcare. Protein
Handling and Detection
Techniques.
()
