KỸ THUẬT DI TRUYỀN - PHẦN 1 potx

1
KYÕ THUAÄT DI TRUYEÀN
2
QUA
Ù
T
RÌNH NGHIÊN C
Ư
ÙU GENE
CÔ LẬP
GENE
Tách chiêt
DNA, RNA
Phân tích
đònh tính,
đònh lượng
Tạo
dòng
PCR,
RT-PCR
THU NHẬN
GENE
Giải
trình tự
Các phương
pháp
in silico
XÁC ĐỊNH CẤU
TRÚC GENE
TÌM HIỂU CHỨC
NĂNG CỦA GENE

Northern
blot
Southern
blot
Gây tạo
đột biến
Phiên mã
–dòch mã
in vitro

ỨNG DỤNG
Tổng hợp
nhân tạo
Mục tiêu : Hiểu rõ cấu trúc và chức năng của gene
để ứng dụng vào các lónh vực khoa học và đời sống
Điện
di
Đo
OD
Sử dụng các
enzyme, vector
3
NỘI DUNG
1. Thu hồi nucleic acid
2. Phân tích đònh tính và đònh lượng nucleic acid
3. Sử dụng các enzyme thông dụng trong sinh học phân tử
4. Lai phân tử
5. Tạo dòng
6. PCR
7. Giải trình tự nucleic acid

8. Biến đổi vật liệu di truyền và chuyển vật liệu di truyền đã
biến đổi vào tế bào
4
THU HỒI NUCLEIC ACID
1. PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT
- Tách chiết DNA
- Tách chiết RNA
2. PHƯƠNG PHÁP LY TÂM
- Ly tâm phân đoạn
- Ly tâm đẳng tỷ trọng – Thu nhận nucleic acid tinh sạch
3. PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ
Thu mRNA
5
TÁCH CHIẾT DNA & RNA
DNA RNA
Thiocyanate
1. Phá màng tế bào, màng nhân Chất tẩy (SDS) guanidinium
+ siêu âm, LiCl, Urea,
+ cơ học,
2. Loại protein Phenol pH8 : Phenol pH4 :
Chloroform:IAA Chloroform:IAA
Khác Khác
3. Thu hồi nucleic acid :
Tủa Ethanol tuyệt đối Ethanol tuyệt đối
Isopropanol, Isopropanol,
Boom Hấp phụ trên silica Hấp phụ trên silica
Lọc Thu trên màng lọc Thu trên màng lọc
6
PHA
Ù

MA
Ø
NG SINH HO
Ï
C BA
È
NG CHA
Á
T
TA
Å
Y
Chất tẩy ion hóa có tác dụng
phá màng mạnh, không ion
hóa có tác dụng phá màng
nhẹ hơn.
Chất tẩy, là phân tử lưỡng
cực, sẽ kết hợp với protein
màng và các phân tử
phospholipid làm phá vỡ cấu
trúc màng
7
LY TÂM PHÂN ĐOẠN
Ly tâm phân đọan (a)
và phân đoạn vùng (b)
phân tách các phần tử
trong hỗn hợp dựa trên
khối lượng của chúng.
Thời gian và lực ly tâm
được xác đònh cho từng

nhóm phần tử.
Dung dòch ly tâm có tỷ
trọng thấp hơn các
phần tử cần phân tách
8
LY TÂM ĐẲNG TỶ TRỌNG
Ly tâm đẳng tỷ trọng
(isopycnic) phân tách
các phần tử trong hỗn
hợp dựa trên tỷ trọng
của chúng.
Thời gian và lực ly tâm
là chung cho các nhóm
phần tử.
Dung dòch ly tâm có tỷ
trọng với giá trò đi từ
thấp hơn đến cao hơn
tỷ trọng của các phần
tử cần phân tách
9
T
HU HOI NUCLEIC ACID, PHAGE SAU LY TAM
ẹANG TY TROẽNG
10
CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ
Sắc ký
lọc gel
Sắc ký
trao
đổi ion

Sắc ký
ái lực
KT-KN
11
THU HỒI mRNA BẰNG SẮC KÝ ÁI LỰC
12
CÂU HỎI – PHẦN 1
1. Những khác biệt trong phương pháp tách chiết-tinh sạch DNA và RNA, vì sao
lại có những khác biệt đó ?
2. Phương pháp tủa, Boom có những ưu nhược điểm gì ?
3. Khác biệt giữa ly tâm phân đoạn và ly tâm đẳng tỷ trọng ? Ứng dụng của
từng loại ly tâm ?
4. Phương pháp tách chiết-tinh sạch DNA plasmid có gì khác với tách chiết-tinh
sạch DNA bộ gene ?