Bài giảng : TIẾP CẬN VẤN ĐỀ PHÁT HIỆN TỒN DƯ KHÁNG SINH TRONG CÁC THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ ĐỘNG VẬT PART 7 pot

1.
1.
Ph
Ph
ủ
ủ
kh
kh
á
á
ng
ng
th
th
ể
ể
đã
đã
đư
đư
ợ
ợ
c
c
tinh
tinh
l
l
ọ
ọ
c

c
lên
lên
b
b
ề
ề
m
m
ặ
ặ
t
t
r
r
ắ
ắ
n
n
(1
(1
µ
µ
g
g
kh
kh
á
á
ng

ng
th
th
ể
ể
c
c
ừ
ừ
u
u
kh
kh
á
á
ng
ng
l
l
ạ
ạ
i
i
kh
kh
á
á
ng
ng
nguyên

nguyên
c
c
ó
ó
ngu
ngu
ồ
ồ
n
n
g
g
ố
ố
c
c
th
th
ỏ
ỏ
IgG
IgG
)
)
+ °C
Kháng
thể
16/04/2008
2. a)

2. a)
Cho
Cho
m
m
ẫ
ẫ
u
u
đã
đã
đư
đư
ợ
ợ
c
c
t
t
á
á
ch
ch
chi
chi
ế
ế
t
t
ho

ho
ặ
ặ
c
c
dung
dung
d
d
ị
ị
ch
ch
kh
kh
á
á
ng
ng
nguyên
nguyên
chu
chu
ẩ
ẩ
n
n
v
v
à

à
o
o
2. b)
2. b)
Cho
Cho
kh
kh
á
á
ng
ng
nguyên
nguyên
c
c
ó
ó
g
g
ắ
ắ
n
n
men
men
v
v
à

à
o
o
E
E
E
E
E
E
Ag-Enz
E
E
E
E
E
E
Antigen
2. c)
2. c)
Cho
Cho
kh
kh
á
á
ng
ng
th
th
ể

ể
đ
đ
ặ
ặ
c
c
hi
hi
ệ
ệ
u
u
th
th
ỏ
ỏ
v
v
à
à
o
o
E
E
E
E
E
E
3.

3.
ủ
ủ
2h
2h
ở
ở
4
4
°
°
C
C
SpecificAb
E
E
E
E
E
E
E
E
E
E
E
E
4.
4.
R
R

ử
ử
a
a
lo
lo
ạ
ạ
i
i
b
b
ỏ
ỏ
c
c
á
á
c
c
ch
ch
ấ
ấ
t
t
không
không

đư
đư
ợ
ợ
c
c
g
g
ắ
ắ
n
n
(
(
ba
ba
l
l
ầ
ầ
n
n
)
)
E
E
6.
6.
D
D

ừ
ừ
ng
ng
ph
ph
ả
ả
n
n
ứ
ứ
ng
ng
b
b
ằ
ằ
ng
ng
H
H
2
2
SO
SO
4
4
.
.

Substate
/chromophore
7.
7.
Đ
Đ
ọ
ọ
c
c
ở
ở
450 nm.
450 nm.
5.
5.
Cho
Cho
dung
dung
d
d
ị
ị
ch
ch
ph
ph
ả
ả

n
n
ứ
ứ
ng
ng
m
m
à
à
u
u
v
v
à
à
o
o
TMB/H
TMB/H
2
2
O
O
2
2
v
v
à
à

ủ
ủ
30
30
’
’
trong
trong
b
b
ó
ó
ng
ng
t
t
ố
ố
i
i
Chuẩnbịhoáchất
PBS pH 7.4 : 9g NaCl+ 7,78g Na
2
HPO
4
.2H
2
O+ 0,75 g KH
2
PO

4
trong1 lítH
2
O
Methanol/PBS (50/50 V/V)
Phaloãngdung dịch đệm10x
PhaloãngKN gắnenzyme 100x
KhôiphụcKT đôngkhô(+ 6 ml dung dịchphaloãng)
!
Lượnghoáchấtchuẩnbịsốmẫuphântích+ đườngchuẩn
QUI TRÌNH TÁCH CHIẾTMẪU
(*)
PBS pH 7.4 :9 gamNaCl, 7,78 gamNa
2
HPO
4
.2H2O và0,75 gamKH
2
PO
4
trong1 lít nướccất
5 gammẫu
5 ml methanol/PBS
(50/50v/v)
lắc đảo đầu30’
10’, 4000rpm
Ly tâm10 phút
vớivậntốc3000
vòng/phút
30’’

0,5 ml
4,5 ml d
2
đệm
phaloãng
30 giây
(phaloãng10x)
50 µl/giếng
QUI TRÌNH TEST
QUI TRÌNH TEST
S
12
S8S811
H
S
12
S7S70.50.5
G
S
11
S6S60.30.3
F
S
11
S5S50.20.2
E
S
10
S4S40.10.1
D

S
10
S3S3.05.05
C
S9S2S200
B
S9S1S1NSNS
A
121110987654321
Dungdịchchuẩn
Mẫu
ChuẩnbịPlate
QUI TRÌNH TEST
50 µl mẫu8 táchchiếtH4H3
50 µl mẫu7 táchchiếtG4G3
50 µl mẫu6 táchchiếtF4F3
50 µl mẫu5 táchchiếtE4E3
50 µl mẫu4 táchchiếtD4D3
50 µl mẫu3 táchchiếtC4C3
50 µl mẫu2 táchchiếtB4B3
50 µl mẫu1 táchchiếtA4A3
50 µl dd0.05 ng/mlH2H1
50 µl dd0.1 ng/mlG2G1
50 µl dd0.2 ng/mlF2F1
50 µl dd0.3 ng/mlE2E1
50 µl dd0.5 ng/mlD2D1
50 µl dd1 ng/mlC2C1
100 µl dd KT/giếng
50 µl dd0 ng/mlB2B1
Lắc nhẹ, đ

o
ở b
ư
ớc sóng 450 trong vòng 30 phút
50 µl dd dừng phản ứng màu/giếng
Lắc nhẹ, ủ 30phút trong bóng tối t° phòng
150 µl peroxide/TMB/giếng
dốc bỏ hết, rửa 3 lần = dd đệm, vỗ úp hết
ủ 1h ở 4°C
100 µl dd E. Conjugate/giếng
Lắc nhẹ 1 phút rồi ủ 1h ở 4°C
-150 µl dd đệmp.loãngA2A1
B10B9B8B7B6B5B4B3B2Bước1ô