CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT ppsx

LOGO
CÁC PHƯƠNG PHÁP
ĐỊNH LƯỢNG
VI SINH VẬT

CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG
VI SINH VẬT
Là các phương pháp
để xác định số
lượng vi sinh vật ở
trong mẫu
Hàm lượng vi sinh vật
trong mẫu là bao
nhiêu??

LOGO
CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG
VI SINH VẬT
Phương pháp xác định khối lượng khô
1
Phương pháp đo độ đục
2
Phương pháp đếm trực tiếp
3
Phương pháp đếm khuẩn lạc
4
5
Phương pháp MPN

MNP/g
Tế bào/ml
Tế bào/g
MPN/ml CFU/ml
CFU/g
ĐƠN VỊ
Đơn vị định lượng Vi sinh vật

PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHỐI LƯỢNG KHÔ

Định lượng nồng độ tế bào nấm men

Được coi là một phương pháp tiêu chuẩn

Có thể chuyển đổi kết quả sang các
phương pháp khác một cách dễ dàng.

Phase 1
Phase 1
Phase 2
Phase 2
Phase 3
Phase 3
LY TÂM
LY TÂM
RỬA
RỬA
SẤY
SẤY
Thu hồi

nấm men
trong dịch
Rửa bằng
dd xút để
tách bỏ
các chất
hữu cơ
bám trên
bề mặt
Sấy đến
trọng
lượng
không đổi
PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHỐI LƯỢNG KHÔ
NGUYÊN TẮC

RỬA
SẤY
LY TÂM
- Mẫu cho vào
ống ly tâm tốc độ
2000 vòng/ phút,
15 phút
- Gạn bỏ nước
trong
- Cho NH
3
và
nước cất khuấy
đều  Ly tâm

-
Gạn bỏ nước
trong
-
Chuyển toàn bộ
phần lắng đáy
vào đĩa sấy bằng
cồn
-
Cho bay bớt hơi
nước trên nồi
đun cách thủy
-
Nhiệt độ 1050C,
24 giờ.
-
Làm nguội trong
bình hút ẩm
-
Cân
PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHỐI LƯỢNG KHÔ

Huyền phù
Huyền phù
Trong nước
Trong nước
Máy so màu
Máy so màu
LY TÂM HÒA TAN ĐO ĐỘ ĐỤC
PHƯƠNG PHÁP ĐO ĐỘ ĐỤC

PHƯƠNG PHÁP ĐẾM TRỰC TIẾP
SỐ LƯỢNG TẾ BÀO
BUỒNG
ĐẾM
ĐẾM
SỐ LƯỢNG
NHUỘM
XANH
METYLEN

Hot Tip

NGUYÊN TẮC
-
Dùng pipet lấy 1 giọt mẫu cho vào
khe hở giữa buồng đếm và lá kính
-
Đếm số lượng tế bào dưới kính
hiển vi
-
Áp dụng chủ yếu
đối với nấm men
Vì sao?

Đếm trực tiếp
Đếm trực tiếp
ĐẾM TRỰC
TIẾP BẰNG
KÍNH HIỂN VI

HUỲNH
QUANG
BUỒNG ĐẾM
HỒNG CẦU
ĐẾM


D
D
B
B
C
C
A
A
Pha loãng mẫu
Cho mẫu lên buồng
đếm
Quan sát dưới kính hiển
vi
Đếm số lượng tế bào
Mẫu cần xác
định ngay,
không quá
30 phút từ
khi lấy mẫu.
NGUYÊN T C - BU NG Ắ Ồ
NGUYÊN T C - BU NG Ắ Ồ
Đ MẾ
Đ MẾ

Đếm trực tiếp
ĐẾM TRỰC
TIẾP BẰNG
KÍNH HIỂN VI
HUỲNH
QUANG
BUỒNG ĐẾM
HỒNG CẦU
ĐẾM

ƯU ĐIỂM
-
Cho biết được
số lượng VSV
NHƯỢC ĐIỂM
-
Dễ nhầm lẫn
-
Độ chính xác
không cao
-
Không thích
hợp cho huyền
phù có mật độ
thấp
Đếm trực tiếp bằng buồng đếm hồng cầu

DAPI
DAPI
FITC
FITC
AODC
AODC
Acridin cam
4,6-dianidino-
2phenyl-indol
Fluorescein
isothiocyanate
Loại bỏ sai
số do các
tạp chất
Các chất nhuộm phát huỳnh quang
Kết quả
phản ánh
đúng sinh
khối

Nhuộm
xanh
metylen
Phương pháp xanh metylen
Xác định số TB
VSV sống – chết
trong mẫu

NGUYÊN TẮC – NHUỘM XANH METYLEN
-

Các tế bào sống có chứa enzyme có
khả năng chuyển xanh metylen
thành chất không màu
Dd xanh metylen đi qua màng tế
bào và enzyme của tế bào sống -
mất màu xanh
Các tế bào chết thì enzyme không
hoạt động  không làm mất màu
xanh  các tế bào bị nhuộm màu
xanh

Diagram
Nhuộm màu
xanh
TẾ BÀO CHẾT
Mất màu xanh
TẾ BÀO SỐNG
Nhuộm
xanh metylen

Nhuộm xanh metylen
Trộn đều dd xanh metylen
với mẫu
Pha loãng mẫu
Đếm các tế bào
Biểu thị số
Biểu thị số
lượng TB sống
lượng TB sống
theo % so với

theo % so với
tổng TB có
tổng TB có
trong mẫu
trong mẫu


Phương
pháp nuôi
cấy trên/
trong môi
trường
thạch
Phương
pháp nuôi
cấy trên
màng lọc
PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC
PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC

Nuôi cấy trong/trên môi trường thạch
Nuôi cấy trong/trên môi trường thạch
Trong
môi
trường
Trên
môi
trường
Nuôi cấy

Nuôi cấy trong/trên môi trường thạch
Nuôi cấy trong/trên môi trường thạch
-
Phát hiện những tế bào VSV
còn sống trong mẫu
-
Phương pháp chuẩn để định
lượng vi sinh vật