Công nghệ tế bào thực vật pps

TẠO GIỐNG MỚI BẰNG PHƯƠNG PHÁP
GÂY ĐỘT BIẾN VÀ CÔNG NGHỆ TẾ BÀO
Giống cà chua Hồng lan được
tạo ra từ thể đột biến tự nhiên
của giống cà chua Ba lan trắng.
Giống ngô lai LVN10 là nhóm giống
ngô dài ngày, được lai từ hai dòng
thuần (lai đơn) và giống ngô LVN4
đại diện cho nhóm trưng bày, khả
năng thích ứng rộng, cùng nhóm
còn có giống LVN98 và HQ2000).


Giống dâu số 12 là giống dâu
tam bội (3n) lai từ thể tứ bội và
giống dâu Bắc Ninh với giống
lưỡng bội (2n). Dâu có lá dày,
màu xanh đậm, thịt lá nhiều,
sức ra rễ và tỉ lệ hom sống cao.



NUÔI CẤY TẾ BÀO TRẦN VÀ ỨNG DỤNG
khái niệm và kỹ thuật
tách tế bào trần thực vật
a. KN: Tế bào trần thực vật
(protoplast) là tế bào đã được loại bỏ
thành tế bào chỉ còn màng sinh chất
bao bọc khối tế bào chất và nhân tế
bào.

b. Tế bào trần được sử dụng trong
nghiên cứu:
+ lai cùng loài hay khác loài
+ chuyển gen
+ có khả năng tạo màng tế bào
nhanh chóng đây là cơ sở ngghiên cứu
quá trình tổng hợp màng tế bào

c. Tách tế bào trần ( 2 cách : cơ học và enzym): sau đây là các bước cơ bản:
- Mẫu lá non được rửa sạch với vòi nước
máy.sát trùng bằng cồn 70-75 độ sau đó rửa
bằng nước cất 3 lần, sau đó khử trùng bằng
Na-hypochlorit hay Ca-hypochlorit khảng 7-15
phút.
Lá làm sạch lá bằng Clorox 10% trong
Lá làm sạch lá bằng Clorox 10% trong
10 phút, rửa lại lá 3 lần bằng nước cất tiệt
10 phút, rửa lại lá 3 lần bằng nước cất tiệt
trùng
trùng
- Ngâm lá vào dung dịch mannitol 8-15%
trong 45-60 phút để tế bào co nguyên sinh.
- Tách lớp biểu bì mặt dưới lá để enzym
ngấm sâu vào nhu mô thịt lá.

- Cắt lá thành từng mảnh nhỏ, ngâm 1g lá
trong đĩa petri. Dung dịch enzym gồm
cellulase, hemicellulase,pectinase +manitol
13%. Đặt mẫu trong tối qua đêm (12-18 giờ,
ở 25 độ) thu được hỗn hợp protoplast.

- Dịch protoplast ly tâm trong 5 phút, bỏ
phần bã nổi lên trên,protoplast ở đáy.
Rửa bằng 10ml dung dịch môi trường MS
+ Manitol 13%,thao tác thực hiện 3 lần.
d. Xác định mật độ protoplast và khả
năng sống sót
Nhuộm protoplast bằng Fluorescein
diacetate để xác định sự sống sót của
protoplast. Số lượng protoplast được
xác định bằng buồng đếm hồng cầu.
e. Nuôi cấy protoplast

Dung hợp tế bào trần và lai vô tính

a. Tự dung hợp
vì màng sinh
chất của tế
bào(-) do nhóm
P và Protein
nên các tế bào
trần đẩy nhau
nên không tự
dung hợp. Do
đó phải làm các
rế bào trần tiếp
xúc nhau nhờ
PEG hay sốc
điện.

b. Hóa dung hợp:

Sự hóa dung hợp có thể thực hiện với NaNO3 0,25M, PVA
15 %…nhưng tần số dung hợp thấp nên ít được sử dụng.
Virut Senday đã giảm hoạt tính là chất thường dùng hiện nay
bằng cách cho giọt hỗn hợp 2 loại tế bào trần tiếp xúc từ từ với
các giọt PEG 25- 50%
c.Điện dung hợp (tốtnhất):
Khi đặt hỗn hợp 2 loại tế bào trần trong 1 điện trường, các
tế bào trần sẽ di chuyển, tiếp xúc nhau và xếp thành 1
chuỗi dài dưới lực điện trường
Sau đó dùng xung điện ngắn đẻ tạo vết đứt ở màng, sự
dung hợp sẽ xảy ra tại nơi tiếp xúc.

Khi dung hợp tế bào trần với nhau thường có ba nguồn gen tham gia
(nhân, ty thể, lạp thể). Có thể xảy ra các hiện tượng:
- chỉ dung hợp nguyên sinh chất và các cơ quan tử
- chỉ có sự dung hợp nhân
- có cả dung hợp nhân và tế bào chất

Ứng dụng: bằng phương pháp lai tế bào đã thành công trong tạo cây
lai từ hai loài thuốc lá khác nhau, cây lai giữa khoai tây và cà chua.

POMATO