Tối ưu hóa môi trường lên men vi khuẩn nội sinh Bacillus sp. T3 nhằm nâng cao hoạt tính kháng nấm Corynespora cassiicola

B GIÁO DO
I HC M TP. H CHÍ MINH


BÁO CÁO KHÓA LUN TT NGHIP

 tài:
TNG LÊN MEN
VI KHUN NI SINH Bacillus sp. T3
NHM NÂNG CAO HOT TÍNH KHÁNG
NM Corynespora cassiicola

KHOA CÔNG NGH SINH HC
CHUYÊN NGHÀNH: VI SINH  SINH HC PHÂN T

GVHD : ThS. NGUY
SVTH : NGUYN THÀNH TRUNG
MSSV : 1053010856
KHÓA : 2010  2014

Tp. H Chí Minh, tháng 5 nm 2014
LI C
  tài này, ngoài s c gng ca bn thân còn có s ng
dn ca thy cô, anh ch và s  ca bn bè.
u tiên, em xin chân thành ct c các thy cô Khoa Công ngh Sinh
Hi Hc M Tp. H t cho em nhng kin thc
nn tng nht, em xin cy Nguyt Linh và thy
luôn bên cng, truyt kinh nghing viên em
 tài.
Con c, co mu kin tt
nh con hoàn thành vic hc ca mình.

Em xin chân thành c ch Võ Ngc Yn Nhi, anh t Phi nhng
i ch luôn ng h  tài.
Bên cem xin cn, các em trong phòng thí nghim Công
ngh Vi sinh i hc M Thành ph H Chí Minh tâm, giúp
 em trong quá trình thc hi tài này.
Mt ln na, em xin gn tt c các thy cô, anh ch, bn bè li bi
kính chúc sc khe, may mn, gt hái nhi


Tp. H Chí Minh, Ngày 17 tháng 06 4
NGUYN THÀNH TRUNG

SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG i

C
T V 1
 TNG QUAN TÀI LIU 4
1.1 GII THIU V CÂY CAO SU Hevea brasiliensis muell. arg 5
1.1.1 Phân loi hc 5
1.1.2 Ngun gc 5
1.1.3 m thc vt hc 5
1.1.4 Vai trò và tình hình sn xut 5
1.1.5 Tình hình bnh hi trên cây cao su 6
1.1.6 Tình hình nghiên cu ch phm sinh hc cho cây cao su 6
1.2 RYNESPORA TRÊN CÂY CAO SU 7
1.2.1 Phân b 7
1.2.2 Triu chng bnh trên cây cao su 7
1.2.3 Tác hi bnh rng lá Corynespora trên cây cao su 9
1.2.4 Cách phòng tr 11
1.3 NM Corynespora cassiicola 12

1.3.1 Lch s phát hin nm Corynespora cassiicola (Berk. & Curt.) Wei
12
1.3.2 Phân loi hc 12
1.3.3 m hình thái 12
1.3.4 m sinh lý 13
1.3.5 Kh n ti 14
1.3.6 Kh  14
1.3.7 ng xâm nhp và kh nh ca nm Corynespora
cassiicola 15
1.4 TNG QUAN V Bacillus 15
1.4.1 Phân loi 15
1.4.2  17
1.4.3 ng 17

SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG ii

1.4.4 ng dng ca Bacillus 19
1.4.5 Cht chuyn hóa kháng nm ca Bacillus 20
1.5 QUY HOCH THC NGHIM 22
1.5.1 ch thc nghim 22
1.5.2 m quy hoch thc nghim 22
1.5.3 ng ca quy hoch thc nghim 23
1.5.4 Thí nghim sàng lc 24
1.5.5 T 26
1.5.6 Phn mm quy hoch thc nghim Minitab 16 30
 VT LIU 37
2.1 THM NGHIÊN CU 38
2.2 VT LIU NGHIÊN CU 38
2.2.1 Chng vi sinh vt nghiên cu 38
2.2.2 Chng nm Corynespora cassiicola th nghim 38

2.2.3 ng  hóa cht 38
2.2.4 Thit b  dng c 38
2.3 PHÁP NGHIÊN CU 40
2.3.1 Tái phân lp Bacillus 40
2.3.2 nh hot tính cht kháng nm ca chng Bacillus sp. T3 bng
pháp khuch tán ging thch 41
2.3.3 Kho sát n c ch nm Corynespora cassiicola b
pháp phun dch lc nuôi cy chng Bacillus sp. T3 42
2.3.4 Xây da giá tr OD
610
và m t bào 44
2.3.5 Xây dng ca Bacillus sp. T3 45
2.3.6 Chn la các yu t  ng ti hot tính cht kháng nm ca
chng Bacillus sp. T3 46
2.3.7 Thit k thí nghim tìm yu t  n quá trình lên
t tính cht kháng nm theo thit k Plackett  Burman
49

SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG iii

2.3.8 Thí nghim khu 50
2.3.9 Tìm khong tcho quá trình lên men bc
51
2.3.10 Thí nghim b mt ch nh giá tr ta các yu t 53
 KT QU VÀ THO LUN 55
3.1 TÁI PHÂN LP 56
3.2 TH KH CH TÁN GING
THCH 56
3.3 TNG LÊN MEN CHO CHNG Bacillus sp. T3 57
3.3.1 a giá tr OD

610
và m t bào 57
3.3.2 ng kính vòng kháng nm 58
3.3.3 Sàng lc các yu t ng 61
3.3.4 Xnh yu t ng chính theo ma trn Plackett  Burman 68
3.3.5 Thí nghim khu 73
3.3.6 Thí nghim tìm khong tc 75
3.3.7 Thí nghing b mt theo thit k thí nghim Box  Behnken
77
3.4 KHO SÁT HOT TÍNH CHT KHÁNG NM THEO THI GIAN 84
3.5 SO SÁNH KH T NM Corynespora cassiicola CA MÔI
NG TNG NB 85
 KT LUN VÀ KIN NGH 91
TÀI LIU THAM KHO 93
PH LC 102







SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG iv

DANH MC CH VIT TT
ANOVA Oneway analysis of variance
C. cassiicola Corynespora cassiicola
CFU Colony forming unit
Cs. Cng s
NA Nutrent Agar

NB Nutrient Broth
nm nanomet
OD Optical Density
PTN Phòng thí nghim
PDA Potato Dextrose Agar
PDB Potato Dextrose Broth
P  B Plackett  Burman
VSV Vi sinh vt
WHO World Health Organization


SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG v

DANH MC CÁC BNG
Bng 1.1. Kt hp du trong ma trn 25
Bng 1.2. Ma trn quy hoch vi N = 12, K = 11 25
Bng 2.1. Các ngun o sát 47
Bng 3.1. Kt qu phân lp 56
Bng 3.2. Kt qu th kh ng ging khuch tán 57
Bng 3.3. Giá tr OD
610
và m t bào (Log (N/mL)) 58
Bng 3.4. Giá tr xây dng ng cong hot tính cht
kháng nm theo thi gian chng Bacillus sp. T3 59
Bng 3.5. Kt qu các nguo sát 61
Bng 3.6. Kt qu các ngun cacbon kho sát 63
Bng 3.7. Kt qu các ngun khoáng kho sát 64
Bng 3.8. Kt qu dãy pH kho sát 65
Bng 3.9. Kt qu dãy nhi kho sát 67
Bng 3.10. Kt qu các yu t chn lc 68

Bng 3.11. Giá tr các bin s trong thí nghim Plackett  Burman tìm yu t nh
n hot tính kháng nm chng Bacillus sp. T3 68
Bng 3.12. Thit k thí nghim Plackett  Burman và kt qu thí nghim vi các
m ca các yu t 69
Bng 3.13. B trí thí nghim khu cho 4 yu t ng chính 73
Bng 3.14. Tc chuyc chng Bacillus sp. T3 75
Bng 3.15. Kt qu ng kính vòng kháng nc sau khi thc hin p
pháp leo dc chng Bacillus sp. T3 76
Bng 3.16. Giá tr tng m trong thit k thí nghim Box  Behnken 77
Bng 3.17. B trí và kt qu thí nghim Box  Behnken chng Bacillus sp. T3 78
Bng 3.18ng kính vòng kháng nm theo thi gian chng Bacillus sp. T3 84
Bng 3.19. Kt qu th nghim phun dch lc c ch nm Corynespora cassiicola
chng vi khun Bacillus sp. T3 nuôi cng NB 86

SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG vi

Bng 3.20. Kt qu th nghim phun dch lc c ch nm Corynespora cassiicola
chng vi khun Bacillus sp. T3 nuôi cng t 88
Bng 3.21. Tóm tt kt qu nghiên cu 90

SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG vii

DANH MC BI
Bi n tính gia OD
610
và m t bào Bacillus sp.
T3 58
Bi ng theo thi gian chng Bacillus sp. T3 59
Bi 3.3. ng kính vòng kháng nm theo thi gian chng Bacillus sp. T3 60
Bi 3.4. Kt qu các nguo sát 62

Bi 3.5. Kt qu các ngun cacbon kho sát 63
Bi 3.6. Kt qu các ngun khoáng kho sát 64
Bi 3.7. Kt qu dãy pH kho sát 66
Bi 3.8. Kt qu dãy nhi kho sát 67
Bi 3.9ng kính vòng kháng nm theo thi gian chng Bacillus sp. T3 85

 TH
 th 3.1.  th các ng chính (Main Effects Plot) 71
 th 3.2 th ng mc biu th giá tr ta các yu t 82
 th 3.3 th b mt biu th giá tr ta các yu t 82



SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG viii

CÁC H
Hình 1.1. Hai d 8
m có l và vin vàng 8
Hình 1.3. Héo và bu lá 8
Hình 1.4. Dn lá 8
Hình 1.5. Khun lc nm Corynespora cassiicola ng PDA 13
Hình 1.6. Bào t nm Corynespora cassiicola nhum bng dung dch lactophenol
13
 ng nghiên cu 23
Hình 1.8. Thit k CCD vm trc và 5 ln lp li tm thí
nghim trung tâm (0,0) 29
Hình 1.9. Ma trn b trí thí nghim theo thit k Box  Behnken 30
Hình 1.10. Giao din phn mm Minitab 16.2.0 31
Hình 2.1. Kt qu kháng nm ca vi khun 42
Hình 2.2ng trong h thng lên men kín 45

Hình 3.1. Hình thái nhum Gram vi khun Bacillus sp. T3 56
Hình 3.2. Hình thái khun lc vi khun Bacillus sp. ng NA 56
Hình 3.3. Kt qu th kh ng ging khuch tán chng Bacillus sp. T3
57
Hình 3.4. Kt qu giá tr ta các yu t ng chính 83




SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 1













T V


SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 2
Cây cao su (Hevea brasiliensis Muell. Arg.) trng  c vùng xích o
và nhii, là loi cây c s dng trong sn xut cao su t nhiên (Souza
và cs., 2013), có u ha, trong khong 40 qu trng cây
cao su vi sn xut khong 6,5 triu tn cao su khô m. Vic cung cp cao su
t nhiên ca th gii là h không theo kp vi nhu cu toàn cu cho 12 triu
tn cao su t . (Venkatachalam và cs., 2007)
Hin nay, bnh rng lá Corynespora do vi nm Corynespora cassiicola
(Berk. & Curt.) ã làm n s t cho m ca cây
c bit gây thit hi nng n n kinh t ca các qu 1936, bnh
c phát hiu tiên  c cng hòa Sierra Leone và các mu nã c
Mason và Deighton thu thnh xut hin lt  ,
Malaysia, Nigeria, Indonesia, Braxin, Sri Lanka, Cameroon, Thái Lan, Banglade và
ti Vi9. Manju và cs. (2001) ã t mô t v m
nghiêm trng ca bnh rng lá Corynespora. Các bin pháp kim soát hóa hc
s dng ph bin nhm làm gim s nh ng ca Corynespora cassiicola i vi
c s dng quá nhiã gây tác ng xng, suy
 t tr     t bin kháng thuc.  khc phc nh c
m do bin pháp hóa hc gây ra, hin nay bin pháp sinh hc các nhà
khoa hu, ng dng và khuyn khích s dng. Bin pháp này s
dch, kí sinh, vi sinh vt, các sn phm có ngun gc sinh hc

c tho mc, sn phm công ngh sinh hng chuyn gen kháng
nhn hoc gim bt thit hi do bnh ht bin pháp
tt, có nhiu trin v
Vi nhóm vi sinh vc s dng trong bin pháp sinh hc, thì Bacillus là
mt trong nhng nhóm vi khun c nghiên c ã có nhiu tài liu chng
minh Bacillus có kh m soát sinh hi vi nm bnh trên cây tr
kim soát nm Aspergillus flavus  u phng (
Kong và cs., 2010), kim soát
Fusarium solani gây bnh trên cây cà chua (Ebtsam và cs., 2009), kim soát nm
Fusarium oxysporum f. sp. spinaciae (Zhao và cs., 2013). Chi Bacillus có nhiu loài
có li, có kh o ra nhiu hp cht sinh hcht kháng

SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 3
nm và kháng khun, các enzym ngoi bào, các chng thc vt
và các cht hong b mt. (Bottone và cs., 2003)
Chng Bacillus sp. c cung cp bi phòng thí nghim Công ngh Vi
sinh  i Hc M Tp. H c ch
in vitroCorynespora cassiicola. Kt qu ng hot
tính c ch nm Corynespora cassiicola i vi chng vi khun ni sinh
Bacillus sp. T3 và tiêu dic nm Corynespora cassiicola  n nguyên
cht ca dch nuôi cy (không có kh c lng mi sau khi x
lý vi dch nuôi cy vi khun) (Nguycs., 2013). Trong nghiên cu
này, chúng tôi tp trung chính vào nghiên cu  ng t   ng vi
khun ni sinh Bacillus sp. T3 nhm nâng cao hot tính kháng nm Corynespora
cassiicola.
T  tài nghiên cTng lên
men chng vi khun ni sinh Bacillus sp. T3 nhm nâng cao hot tính nm
Corynespora cassiicola
Mc tiêu:
T    ng lên men chng vi khun ni sinh Bacillus sp. T3

nhm nâng cao hot tính nm Corynespora cassiicola.
Ni dung thc hin: bao gm
 Corynespora cassiicola in
vitro.
 Tu kin nuôi cy sn xut cht kháng nm bng
 hoch thc nghim.
 So sánh kh t nm Corynespora cassiicola cng ti
ng NB.



SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 4














 
TÀI 



SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 5
1.1 O SU Hevea brasiliensis muell. arg
1.1.1 Phân loi hc
             Euphorbiaceae,
Moraceae, Apocynaceae, Aslepiadaceae, Compositae
            Hevea brasiliensis
HeveaEuphorbiaceae 
.  Trí, 2004)
1.1.2 Ngun gc
  Nam
 (Souza và cs., 2013)

.  Trí, 2004)
1.1.3 c m thc vt hc
Cây cao su thuc loi thân g, to, cao.  nh cao t
20 m n 30 m. Cu to ca thân cao su có phn quan trng là v 
phn sn sinh ra nha m quyt sng m. Lá cao su mc
cách, có ba lá chét nh cung dài, có hình bu dn, mt nhn gân song
i vi cây cao su thì lá có vai trò rt quan trng, ng trc tin sn
ng m. V n sinh thái cây cao su phát trin tt  
hi nhi trung bình 25
o
L m chc hn
nhii v cht,  c trng t Bc
n Nam. (Nguyn Hu Trí, 2004)
1.1.4 Vai trò và tình hình sn xut
                
  
 lâm  công ngh 






SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 6





cây 

             .  

1.1.5 Tình hình bnh hi trên cây cao su


           (Phan Thành

Oidium heveae 
Colletotrichum gloeosporioides    
chim   Drechslera heveae Petch,       
Phytophthora spp.           
Corynespora cassiicola 





1.1.6 Tình hình nghiên cu ch phm sinh hc cho cây cao su


Corynespora cassiicola 


ích. (Han và cs., 2005; Klich và cs., 1994)

SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 7
n nay vic nghiên cu ch ph tr bnh rng lá trên cây cao
su vc quan tâm  c c. 
Corynespora cassiicola 
Bacillus sp. T9 và Bacillus 


1.2 ESPORA TRÊN CÂY CAO SU
1.2.1 Phân b
Bnh rng lá Corynespora do tác nhân là nm Corynespora cassiicola, có tác
hi ln tc trng cao su trong khu vnh xut hin
lu trên cây cao su tp theo lt ghi
nhn ti         
1988. Bnh gây thit hi
nng nht ti nh b và trng li trên 5.000 ha. Ti Malaysia,
Thái Lan và Indonesia nhiu ngàn ha cao su b hi nng làm ng ln sn
t toàn b , 2009)
Bnh xut hin ti Vii nng cho các

trên din rng  mt s tnh mi, Tây Nguyên và min Trung, tp
trung trên dòng vô tính cao su RRIV4, hin chim ding khá ln  c
nhn và ti
1.2.2 Triu chng bnh trên cây cao su
1.2.2.1 

Bnh gây hi ch yu trên lá, cung và chi vi nhng triu chng khác
nhau. cs., 2010)


SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 8
Hình 1.1. 1.2. 
 s., 2010)
Hình 1.3. Héo và bu lá Hình 1.4. Dn lá
 
1.2.2.2  
Trên lá non vt bnh có hình tn nâu vi vòng màu vàng bao
xung quanh, ti trung tâm vt b, lá b h i bin
dng toàn b. Nhn màu xanh, triu chi
vt bnh màu vàng sau chuyng kính khong 1  3 mm, phân b
dc theo gân lá. Nu gu kin thun li các vt lan rng gây
cht tng phn lá do s phá hy ca dip l i màu vàng  vàng
cam và rng tng lá mt.cs., 2010)
Trên lá già mt s vt bnh xut hin vt thng. Triu chi
vt bc theo gân lá. Nu gu kin thun
li các vt lan rng gây cht tng phn lá do lc lp b phá h lá
i màu vàng  cam và rng tng lá mt.
cs., 2010)

SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 9
1.2.2.3 
Du hiu tiên vi vt nt dc theo cung và chi có dng hình thoi, có
m r t b lp v ngoài s xut hin nhng sc
, chy dc theo vt bnh.
Trên cung lá vi vt nu dài 0,5  3,0 mm. Nu cung lá
b hi, toàn b lá chét b rng khi còn xanh dù không có mt triu chng nào xut

hin trên phin lá.
Trên chi, các chi xanh d nhim bm b
tn công và gây hi c ch Vt bnh có th phát trin 20 cm
gây cht cht c
cs., 2010)
1.2.3 Tác hi bnh rng lá Corynespora trên cây cao su
1.2.3.1 Sri Lanka
Dòng vô tính  

òng vô tính
              

òng vô tínhh: RRIC 103,
RRIC 104, RRIM 600, 725, Tjir 1, IAN 873 FX 25 và
           và RRIC 133.
(Jayasuriya và Thennakoon
1.2.3.2 
Dch bnh l1996, nguy him nht trên dòng vô tính RRII
105 chim gn 80% dic. Bnh gây gim sng m n
50%  vùng b hi nng. Hi trà trên 10. hn ch
dch bnh và áp dng  nhu kin thun li cho bnh xut hin.
n
sau: RRII 105, RRII 118, RRII 300, PR 107, PR 255, PR 261, PB 86, PB217,
PB235, PB255, PB 260, PB 311. (Jayasinghe, 

SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 10
1.2.3.3 Indonesia
Vào thp niên 80, 1200 ha cao su b nhim bnh nng và phi cht b 400 ha,
thit hi khong 200 triu Rupiah. 70% dic b bnh gây hi
 m khác nhau. Nhiu dòng vô tính cao sn phi loi b: IAN 873, mt s PR

300 serses. Bnh làm gim sng t 30  50%.
u: RRIC 103, KRS 21, RRIM 600, RRIM 725, PPN 2444,
n sau: AVROS 2037, PR 300,
PR 303 và nhiu dòng vô tính thuc series IR 100, IR 200. (Jayasinghe, 1997)
1.2.3.4 Malaysia
Dch bnh bùng u ngàn ha cao su b hi nng, làm nh
ng ln st toàn b cây. Các dòng vô tính
cao su GT 1, RRIM 600 và mt s RRIM 2000 series, IAN 873 phi loi b do mn
cm vi bnh. Bnh hin din trên c c và gây hi nng các tnh phía nam.
u: RRIC 103, Fx 25, RRIM 725, KRS 21, PPN 2658, PPN
n sau: GT 1, PR 107, PBIG, PB 217, PR 261, RRIM
600, RRIM 605, RRIM 701, RRIM 702, RRIM 705, RRIM 2015 và RRIM 2020.

1.2.3.5 
Xut hit 2% s cây ca dòng vô tính RRIC 103 và
n thí nghii ging quc t. Bnh hi nng  các vùng
phía Nam, Tây và Tây Nam. S ng dòng vô tính mn c.
    n sau: RRIM 600, GT 1,
       
1995)
1.2.3.6 Châu Phi
Xut hin hu ht t  c tr      
Cameroon và Nigeria. Bnh gây hi trên nhiu dòng vô tính và làm rn 50%
tán lá, dn gim 20  30% sng  u kin thun li. Các dòng
vô tính b nhim bnh: RRIC 103, RRIC 110, PB 235, PB 260, PB 28/59, mt s
dòng vô tính IRCA, MDF 372, RRIM 600, GT 1 và mt s dòng vô tính NIG 800
series. (Jayasinghe, 1997; Jayasinghe, 1998)

SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 11
1.2.3.7 

Xut hin vào tháng 8 1999 ti RRIV, gây hi cho dòng vô tính: RRIC
103, RRIC 104, LH 88/372. Cu9, hin din tng Nai, Du
Tii nng trên din tích gn 200
ha ti công ty Lc Ninh  các la tui ca cây cao su. Gây bnh trên lá non, già và
c chi. Hu qu, gây rng lá hàng lot làm ng lng và sn
ng. a các dòng vô tính RRIC 103, RRIC 104, LH 88/372
phi tiêu hu. Tip theo nhiu din tích cao su trng bng dòng vô tính RRIC 104
phi trng li. T n nay, bnh có s i v triu ch
tích ly  i bùng phát.
n g
RRIV4. Nhiu dòng vô tính nhim bnh  m 
 ., 2010)
1.2.4 Cách phòng tr
Do gây hng t n
n khai thác, nên dòng vô tính cao su kháng bnh. Tránh
trng các dòng vô tính cao su mn cm: RRIC 103, RRIC 104, RRIV 3, RRIV 4
Ghép tán bng các dòng vô tính cao su kháng bnh.
Áp dng 1 trong nhng công thc: (1) hexaconazole (5% a.i) n 0,2 
0,3%; (2) Hn hp carbendazim (50% a.i) 0,1  0,15% + hexaconazole (5% a.i)
0,1  0,15% (phi trn theo t l 1:1); (3) Thuc phi trn sn gc carbendazim và
gc hexaconazole n ng thuc gc (0,2  0,3%). Pha phi
hp vi cht bám dính BDNH 2000 n 
  Cn chú ý phun mi lá là
m xâm nhp vi chu k 7  10 ngày/ln.
 o m nhng cây b cht tán và cây b bnh nng. (Phan Thành



SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 12
1.3  Corynespora cassiicola
1.3.1 Lch s phát hin nm Corynespora cassiicola (Berk. &
Curt.) Wei
Corynespora 
m 1896 Cooke
 Cercospora
melonis Corynespora maizei 


               
Corynespora vignicola Kawamura. Liu. (Kawamura, 1948)
    

loài là Corynespora cassiicola.         Corynespora
cassiicola (Berk. & Curt.) Wei (Wei, 1950). 

1.3.2 Phân loi hc
Theo nghiên cu phân loi g  t (Kirk và cs., 2004) thì nm
Corynespora cassiicola c phân lo
Lp: Dothideomycetes
B: Pleosporales
H: Corynesporascaceae
Ging: Corynespora
Loài: Corynespora cassiicola
1.3.3 c m hình thái
 c trung bình c    phân lp t cây cao su (Hevea
brasiliensis) là 64,4 x 5,52 µm (23,42  132,6 x 2,60  7,80 µm). Bào t ny
mm to ra mt hoc nhiu ng mm ging

mng mc nhiu  các t bào tn cùng ca bào t (Chee, 1988). Phan Thành
n s bin thiên v c và hình dng c

SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 13
phân lp t lá cao su b nhim bnh ngoài t nhiên và nuôi cy trên môi
ng Potato Dextrose Agar (PDA). Chiu rng trung bình c và
cung bào t l  phân lp
t ng dài, thon và có ng nuôi c
ng.

Hình 1.5. Khun lc nm Corynespora cassiicola ng PDA







Hình 1.6Corynespora cassiicolach
lactophenol
1.3.4 c m sinh lý
Corynespora cassiicola phát trin và hình thành bào t tng
Potato Sucrose Agar (PSA) (Sarma và cs., 1970). Onesirosan và cs. 
thu kin tt nht cho s phát trin ca C. cassiicola là 28ºC.  32 
36ºC nm phát trin chm và khun l
(1995), C. cassiicola phân lp t cây cao su ny mng PSA
nhiu kin nhit

SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 14
 thích hp nht cho nm phát trin là 28ºC. Chee (1988) cho rng C. cassiicola

phân lp t cây cao su (H. brasiliensist trong
bóng ti 3 ngày sau i ánh sáng 3 ngày  26ºC thì bào t 
nhin.  thích hp nh phân lp C. cassiicola là 90%. Tuy nhiên, s
hình thành bào t vn xy ra   80, 90 và 100%. (Mushrif, 2006)
1.3.5 Kh  tn ti
Corynespora cassiicola là tác nhân gây ra bnh m lá trên các loi cây
trng bng cách sng và lan truyn mm bng rung. Nó có th sng ti 2
ng ph ký ch rng.  n trng cao su, s có mt
ca các loi c  sng ca mm bnh và kim soát các loi c có th
gim bc s ng ca bnh. Tuy nhiên, chúng có th sng trên tt c các
b phn ca cây cao su b nhim bnh và xác bã cây trng tii dng si
nm (Pernezny c m này góp phn quan trng
trong thit lp h thng bo v u chnh vic kim soát nhm gim s 
ngun b rng C. cassiicola có th sng
trên xác bã và ht b hoang nhiu m có th sng trên các
loi cây trng còn sót lng rung và xác bã
giun tròn (Mushrif, 2006). Bào t có kh n tt vi thi gian dài,
trên lá cao su khô nm vn tn ti và gi nguyên kh nn 3 tháng
C. cassiicola phân lp t cây cao su là loi gây bnh
chuyên bit trên cây cao su và không gây b và cà chua.
1995)
1.3.6 Kh  phát tán
Trên cây cao su, C. cassiicola to s ng bào t ln v
nm ngang (trung bình là 2  nh chu k a s
phóng thích bào t, bu vào lúc 6 gi sáng, d nhn thy nht là vào khong 10
 11 gi       phóng thích ít hoc không có s phát tán
(Mushrif, 2006). Bào t m vào lúc 8  11 gi, thi gian sau
u và tip theo nng ráo, s ng bào t phóng thích nhiu nht (Phan
 phóng thích bào t và s lan truyn mm bnh t ngun
 ra rng bào t không có kh n xa, có th c


SVTH: NGUYN THÀNH TRUNG 15
ca chúng li n là nguyên nhân mà bnh lan truyn
chm gia các khu vc cách xa nhau. (Mushrif, 2006)
1.3.7 Con ng xâm nhp và kh  gây bnh ca nm
Corynespora cassiicola
C. cassiicola 
cellulose Trong quá trình
CC toxin
, 

 

Ngoài cây cao su, nm còn là ký sinh ca trên 150 loi cây trng thuc nhiu
h c thuc nhiu vùng khí hu t nhii và có
kh i trên tt c các b phn ca cây t n rn nm
t cây cao su gây hc li. 
1.4 Bacillus
1.4.1 Phân loi
Theo khóa phân loi ca Bergey, Bacillus c phân lo
: Bacteria
Ngành: Firmicutes
Lp: Bacilli
B: Bacillales
H: Bacillaceae
Chi: Bacillus
Chi Bacillus là mt chi ln (có nh chính xác và nhiu
c phân long, thuc h Bacillaceae. H này
chia làm 5 chi, gm: Bacillus, Sporolactobacillus, Clostridium, Sporosarcina,
Desulfotomaculum. a h này là s hình thành ni bào t

cs., 2009)