định lượng vitamin a

Trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh
Môn: Phương pháp phân tích thành phần hóa-lý thực phẩm
oOo
Đề tài:
Định lượng vitamin A
Nhóm thực hiện:
Nguyễn Thị Diễm My
Nguyễn Thị Kim Oanh
Phạm Thị Kim Chi
Nguyễn Mỹ Xuân
Nguyễn Thị Thanh Thủy
Võ Thị Trâm


GVGD: TRẦN VŨ HUY
Mục lục
I. Giới thiệu
1. Cấu tạo, tính chất và chức năng của vitamin A
2. Một số phương pháp phân tích Vitamin A trong
thực phẩm
II. Tìm hiểu một số phương pháp phân tích vitamin A
1.Phương pháp so màu
2.Phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao
3.Phương pháp quang phổ
4.So sánh các phương pháp
III. Các hãng sản xuất máy phân tích
Vitamin A còn có tên gọi khác là retinol , axerophthol…
Tồn tại trong tự nhiên gồm 2 dạng:

Retinol : dạng hoạt động của vitamin A, nó đồng hóa

trực tiếp bởi cơ thể.

Tiền vitamin A: là một tiền chất của vitamin A được
biết nhiều dưới dạng beta-carotene được chuyển hóa
thành vitamin A mà cơ thể có thể sử dụng được.
Ngoài ra còn có anpha, gama caroten
I. Giới Thiệu
1. Cấu tạo, tính chất và chức năng của vitamin A
a. Cấu tạo

Vitamin A dễ bị oxi hóa.

Trong cơ thể dưới tác dụng enzyme, retanol chuyển
thành anđehyt retanal.

Trong gan tồn tại dạng este với acid acetic và
palmitic.

Bị thủy phân bởi không khí, khá bền với acid, kiềm
và nhiệt độ
b. Tính chất
Vitamin A có nhiều chức năng quan trọng đối với cơ thể
con người:

Thị giác: giúp cho tế bào trong của mắt luôn khỏe
mạnh.
Quan trọng đối với sự biến đổi ánh sáng thành các tín
hiệu thần kinh trong võng mạc.

Các mô: Vitamin A kích thích quá trình phát triển của

các biểu mô như sừng, ruột và các con đường hô hấp.
c. Chức năng

Ảnh hưởng đặc biệt đến da, kích thích sự liền sẹo và phòng ngừa
các chứng bệnh của da như trứng cá.

Sự sinh trưởng: vitamin A là yếu tố không thể thiếu cho sự phát
triển phôi thai và trẻ em.

Có vai trò đối với sự phát triển xương, thiếu vitamin A =>xương
mềm và mảnh, quá trình vôi hóa bị rối loạn

Hệ thống miễn dịch: do hoạt động đặc hiệu của các tế bào
vitamin A tham gia tích cực vào sự chống chịu bệnh tật.

Chống lão hóa: vitamin A kéo dài quá trình
lão hóa do làm ngăn chặn sự phát triển các gốc
tự do.

Chống ung thư: hoạt động kìm hãm của nó
với các gốc tự do cũng dẫn đến ngăn chặn
được một số bệnh ung thư.

Sinh sản: vitamin A ảnh hưởng lên chức năng
và sự phát triển của tinh trùng, buồng trứng và
nhau thai=> cần thiết cho chức năng sinh sản
d. Các nguồn thực phẩm giàu vitamin A

Phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao năng


Phương pháp sắc kí khí

Phương pháp định tính

Phương pháp chuẩn độ Iod

Phương pháp đo quang trực tiếp và sau triết tách
vitamin A.

Phương pháp sắc kí lỏng

Phương pháp so màu
2. Một số phương pháp phân tích Vitamin A
trong thực phẩm
1. Phương pháp so màu
Tiêu chuẩn này qui định phương pháp so màu để
xác định vitamin A trong sữa bột giày chứa ít nhất
10 IU (đơn vị quốc tế) vitamin A trên gam.
II. Tìm hiểu một số phương pháp phân
tích vitamin A
a. Nguyên tắc.
Mẫu thử được xà phòng hóa và được chiết,
chất không thể xà phòng hóa được thì cho
phản ứng với axit trifloaxetic đo độ hấp thụ ở
bước song 620 nm.
TCVN 7081 – 1 : 2010
b. Thuốc thử
•
Chỉ sử dụng thuốc thử đạt chất lượng

tinh khiết phân tích, trừ khi có qui định
khác và chỉ sử dụng nước cất hoặc nước
đã khử hoặc nước có độ tinh khiết tương
đương.
•
Gồm các loại thuốc thử sau:
•
Etanol (CH3CH2OH) 95% (tính theo thể tích)
không chứa aldehyt.
•
Dung dịch Natri ascocbat 200 g/l
•
Dung dịch Kali hydroxit (KOH) 50%
•
Dung dịch nước cồn Kali hydroxit 30 g/l
•
Dầu nhẹ
•
Clorofom ( CHCl3)
•
Axit trifluoroaxetic (CF3COOH)
•
Thuốc thử màu
•
Dung dịch Vitamin A: sử dụng vitamin A theo
tiêu chuẩn US Pharmacopeia
•
Hydroxytoluen đã butylat hóa
c. Thiết bị dụng cụ
Sử dụng các thiết bị phòng thí nghiệm thong thường và đặc biệt

như sau:

Máy so màu quang điện hay máy quang phổ ( cơ cấu quang học
hoặc bộ lọc hoạt động ở bước song 620 nm)

Cốc có mỏ hoặc bình nón

Bình xà phòng hóa

Bình định mức

Pipet 1 vạch

Pipet tự động

Bồn hơi, bếp cách thủy hoặc bếp cách khí dung điện

Nồi cách thủy: có thể duy trì nhiệt độ 400C

Phiễu chiết: dung tích 50 ml

Bể siêu âm

Giấy lọc: đường kính 9 cm
Máy quang phổ
Máy so màu quang điện
bình nón
Cốc có mỏ
Pipet tự động
Bình định mức

Phiễu chiết
Bể siêu âm
d. Lấy mẫu
Lấy mẫu theo TCVN 6400: 1998 (ISO 707)
Tính tỷ lệ Am/An đối với từng bước song nối
trên. Nếu tỷ lệ không vượt quá các giá trị 0,593
ở bước sóng 300 nm, 0,537 ở bước sóng 370 nm
tương ứng thì tính hàm lượng Vitamin A, W, theo
đơn vị quốc tế trên gam.
Bằng công thức:
W=(Am.V.d)/(10.m)
Trong đó:
Am: là giá trị số học của độ hấp thụ cực đại
thu được ở bước sóng 326 nm.
V: là tổng thể tích Vitamin A dạng este đã pha
loãng có nồng độ từ 10 IU/ml đến 15 IU/ml.
d: là hệ số chuyển đổi từ độ hấp thụ cụ thể của
Vitamin A dạng este thành đơn vị quốc tế trên
gam (d=1900).
2. Xác định Vitamin A trong thực phẩm bằng phương
pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao
a.Chuẩn bị dụng cụ
- Hệ thống máy HPLC, Shimadzu
- Cột Purospher Star RP-18e( 150x4.6mm,5um)
- Cân phân tích có độ chính xác 0.1mg
- Bộ chưng cất có ống sinhhàn hồi lưu
- Bình định mức 10ml
- Pipet các loại : 0.1ml, 0.5ml,1ml, 2ml, 5ml, 10ml,
- Ống Hatch
- Dụng cụ thủy tinh các loại: Becher, erlen.

b.Chuẩn bị hóa chất
Hóa chất phải là loại tinh khiết được sử dụng để phân
tích , gồm:
- Nước cất loại dùng cho HPLC
- Dietyl ete tinh khiết không có Peroxit
- Etanol
- Dung dịch Kalihydroxyde (KOH) 2M trong cồn : hòa
tan 11.2g KOH trong 100ml cồn 96o
- Dung dịch Kalihydroxyde (KOH) 2% trong nước : Hòa
tan 2g KOH trong 100ml nước cất
- Acetonnitrile, HPLC
- Na2SO4 khan.
c.Cách tiến hành
-
Xây dựng đường chuẩn (dùng Vitamin A
palmitat ):
•
Nếu dùng chuẩn vitamin A thì phân tích ngay
trên thiết bị HPLC.
•
Nếu dùng vitamin A dưới dạng este, thí dụ như
vitamin A acetat, vitamin A palmitat, thì phải
tiến hành xà phòng hóa để giải phóng vitamin A
ra thể tự do rồi mới tiến hành phân tích bằng
HPLC.