Thực vật chuyển gen,vaccine thực vật





















MSSV : 60604018



TpHCM, tháng 6 
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ii


 iv
 v
CH 1
CH 3
2.1  3
2.1.1  3
2.1.2  3
2.2 Vaccine th 5
2.2.1  5
2.2.2 C s 6
2.2.3 u nh 10
2.2.4  13
2.2.5 u trong ni 18
CH 24
3.1  24
3.1.1 Agrobacterium 25
3.1.2  31
3.1.3  31
3.1.4  34
3.2  37
3.3 Tái sinh cây 37
3.4  40
3.5  40
3.5.1  40
3.5.2  45
3.5.3  45
CH 50
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iii

4.1  50
4.1.1 Virus viêm gan B 52
4.1.2 Vaccine viêm gan B 55
4.2 
 57
4.2.1 lá 58
4.2.2  69
4.3  79
 83
TÀI LIU THAM KHO 85


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iv



 
in vitro  66

 67
 
 69

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v

DANH MC HÌNH

   
 18
  24
  plasmid 26

 
Agrobacterium 28
 Agrobacterium tumefaciens 29
  Agrobacterium 30
   32
 Máy xung gen 32
  33
 34
 35
 36
Hình 3.12 in
vitro 37
Hình 3.13  38
Hình 3.14  42
Hình 3.15  43
Hình 3.16   45
Hình 3.17   47
Hình 3.18 
 47
Hình 3.19   49
Hình 4.1  50
Hình 4.2  51
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vi

Hình 4.3  53
Hình 4.4  55
Hình 4.5 Vùng T  , (c) pEFEHBS, (d) pEFEHER. 60

Hình 4.6   63
Hình 4.7 Phân tích PCR  Southern b 64
Hình 4.8 Phân tích RT  
gen 65
Hình 4.9 
ng 67
Hình 4.10 Vùng T   pHER100 và pHBs100 71
Hình 4.11 
i 755
Hình 4.12 
NT  . 76
Hình 4.13            
Eco Bam
pHER100 77
Hình 4.14               
   78
Hình 4.15 pHBs100
và pHER100 78
Hình 4.16  các
 79


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 u
1

 U











Vaccine t







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
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vong sau khi tiêm phòng vaccine.
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2

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2: Vaccine và các khái nim
3



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-
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 
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
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2: Vaccine và các khái nim
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       g trong      
[10].

 [10]:

Một là vaccine bất hoạt là vaccine cha vi sinh vt gây b git cht
bi nhit hoc tác nhân hoá hc. Ví d n hình ca loi này là vaccine nga
cúm, t, dch hch và viêm gan siêu vi A. Hu ht các vaccine lo
ng min dch không hoàn toàn và ngn hn, cn phi tiêm nhiu ln.
Hai là vaccine sống, giảm độc lực là vaccine cha vi sinh vc làm
yu. Nhng chng vi sinh vc nuôi cu kic bit làm
gic tính ca chúng hoc là nhng chng vi sinh v
chng vi sinh v bic tính yi vaccine này
gây phn ng min dng s di ln. Ví d cho
loi này là vaccine nga bnh st vàng da, si, rubella và quai b.
Ba là vaccine chứa độc tố đã bất hoạt của vi sinh vật gây bệnh (toxoid).
Chng hn vaccine nga un ván, bch hu.
Bốn là vaccine chứa các tiểu phần của vi sinh vật gây bệnh: Vaccine này ch
cha nhng phn gây phn ng min dch mà không cha vi sinh vt gây bnh.
Ví d    a viêm gan siêu vi B) ch cha protein v ca
virus Hepatitis, PLV chng HPV ch cha protein capsid ch cht.




7

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
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2: Vaccine và các khái nim
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
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Và mt trong nhng li th ca chúng ta là ngành Công ngh 
khóa vàng  phát tric công ngh sinh hc. Nhng thành tu v cây
trng bii gen trên th gii không ch gii hc nông nghip, to
ra nhng mùa màng bi thu, gii quyt nu mà còn có th sn xut ra
các loi bic chc các bnh hii. ng dng công
ngh sinh h sn xut nhc phm tng hp trong thc vn
mnh vào nhng hn: các thành phn ct cu t,
albumin, các kháng th, hormone, các yu t c sn xut t cây thuc
lá bi i gen (Goldstein và Thoman, 2004). Nhi      v
chuyn gen vào cây tr to vaccine thc phnh viêm
gan B (Thanavala và cng s 1995), và vaccine phòng bnh t c sn xut t cây

khoai tây (Arakawa và cng s 1997). Kang và cng s (2003), Kim và cng s
 dng Agrobacterium tumefaciens  chuyn gen CTB (cholera toxin
B subuint) vào cây thuc lá (Nicotiana tabacum) và gen HIV-1 gp120 V3 vào
khoai tây. Daniell và cng s n gen CTB vào cây thuc lá bng
i bom (bombardment) [2].
2.2 
2.2.1 
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
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2: Vaccine và các khái nim
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
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

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2.2.2.1 
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
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
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 
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Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn
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2: Vaccine và các khái nim
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               



        


[3].

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
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
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
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

 

g tiêm hay qua


                




 

Thứ nhấtc ca vector càng nh càng tt, vì d xâm nhp vào t
ng thi thun li trong quá trình sao chép.
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2: Vaccine và các khái nim
8

Thứ hai, vector phi có kh n, nh i có
th c duy trì trong qun th t bào.
Thứ ba, mang nhc tính cho phép phát hin d c mã hoá
bi các gen ch th chn la gen ch th  thao tác trong E.coli và
gen ch th  tin hành chn lc  thc vng là các gen
kháng vi kháng sinh, nh  la chc t bào mang gen chuyn
(vector) t qun th ln các t bào.
Thứ tư, cha ít nht 1 v trí nhn bit ca enzyme gii h s dng
làm v trí ghép DNA trong to th tái t hp.




              
 



2.2.2.2 

 

 





 






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2: Vaccine và các khái nim
9

a. 
 cn vaccine, phn yu t quynh kháng nguyên ca
ch phc chu t quynh kháng nguyên chính
là thành phn protein kháng nguyên có trên b mt ca tác nhân gây bnh,
hay trên b mt ca ch phm vaccine ca chính tác nhân gây b 
Vaccine truyn thng hay vaccine tái t hp là các ch phm sinh hc ca vi
sinh vc làm gic lc, không còn kh i vi
ng nh b
u có kh  sinh min d
chu s kích thích ca kháng nguyên, s cm ng sn xut ra mt loi
protein mi có cho v gi là kháng th (antibody) [2].
 Định nghĩa : Nhng ch s   gây ra
hing min dc gi là kháng nguyên.

Thứ nhất, nó phải có tính lạ : 

 



Thứ hai, trọng lượng phân tử lớn : 



Thứ ba, cấu trúc phân tử phức tạp : 

Có kháng n       

.

Phân loại i ta chia kháng nguyên vi sinh vt ra các loi sau:
Kháng nguyên vi khun, bao gm:
Thứ nhất, kháng nguyên vi khun hoà tan là các enzyme ngoi
bào.
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2: Vaccine và các khái nim
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Thứ hai, kháng nguyên vi khun không hoà tan là thành phn t
bào ch yu nm trên b mt t bào, 2 lo c quan tâm nht là
kháng nguyên lông (ký hiu H), và kháng nguyên thân (ký hiu O).
Thứ ba, các chc (toxin) khi b mc tính tr thành gic
t t
kháng nguyên cn quan tâm.
Kháng nguyên virus, gm:
Thứ nhất, kháng nguyên V : bao gm 1 phn ca virus hoc c
virus.
Thứ hai, kháng nguyên S : là kháng nguyên hoà tan có th là v
glycoprotein hay nucleic acid ca virus.
b. 
K



n).


, IgE [4].
2.2.3 
2.2.3.1 
accine  phm có   u  sau: giá
thành r,   n xut trên quy mô   qun lý, không n tinh
sh, bo qun lâu, dn chuy
An toàn: 


 
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
Quy mô sản xuất: 
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
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2: Vaccine và các khái nim
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

Tính ổn định cao, dễ bảo quản và sử dụng:     





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
Được phân phối qua đường miệng: 

 



 
Vaccine ăn được kích thích sản xuất kháng thể của hệ thống thể dịch hiệu
quả hơn vaccine tiêm: 



                

     


Chi phí khác:    

các chi phí khác.



E.coli, 
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




              

2.2.3.2 
 


 
               


 

 
 E. coli



 
           
.



Để giải quyết những hạn chế này một số kỹ thuật, biện pháp đã được sử
dụng:
T kháng nguyên biu hin trên thc vt.
Biu hin trên các plastid.
S dng virus thc v chuyn gen.
Dung hp protein.
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2: Vaccine và các khái nim
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S dng các promoter, enhancer hay trình t kt thúc ly t virus thc vt.
Gen kháng nguyên kt hp vi các nhân t u khi u khin s biu
hin protein, thi gian biu hin trong chu trình phát trin ca cây và b phn
biu hin.
S dc s dng là LT  B, CT  B, tác
u khin min dch cng vt và virus, hp cht th cp ca thc vt.
Khi không th bii trong thc vt thì không th
 dùng vaccine khoai tây khi không bic
ng protein kháng nguyên tích lu t v nan gii.
i vi mt s loi cây nhnh nhà nghiên cmt
cách là có th thit k chúng thành nhng viên thuc hay nhng ming bánh vi
ng chính xác protein kháng nguyên tron
2.2.4 


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Tai lieu chia se tai: wWw.SinhHoc.edu.vn
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2: Vaccine và các khái nim
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2: Vaccine và các khái nim
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 B m và yêu cu dán nhãn trên các sn phm
công ngh sinh hc [16].
 
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do chính protein kháng nguyên.
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2.2.5.1 
Trên Th gii tính cho ti hin nay có rt nhiu thành tu v c sn
xut vaccine t thc vt vài ví d n hình:


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           
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2: Vaccine và các khái nim
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- 
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