tạo dòng ruồi giấm chuyển gen uch -l1 nhằm ứng dụng trong nghiên cứu và hướng tới sàng lọc thuốc chữa bệnh parkinson

C GIA TP. H CHÍ MINH Y BAN NHÂN DÂN TP.HCM
C T NHIÊN S KHOA HC VÀ CÔNG NGH



BÁO CÁO NGHIM THU C

 tài:
TO DÒNG RUI GIM CHUYN GENE uch-l1
NHM NG DNG TRONG NGHIÊN CU VÀ
NG TI SÀNG LC THUC CHA BNH
PARKINSON



CH NHI TÀI
NG TH O








C GIA TP. H CHÍ MINH Y BAN NHÂN DÂN TP.HCM
C T NHIÊN S KHOA HC VÀ CÔNG NGH

BÁO CÁO NGHIM THU C

Tên  tài:
TO DÒNG RUI GIM CHUYN GENE uch-l1
NHM NG DNG TRONG NGHIÊN CU VÀ
NG TI SÀNG LC THUC CHA BNH
PARKINSON

CH NHI TÀI
(Ký tên)


NG TH O

N LÝ  TRÌ
u xác nhn) u xác nhn)



THÀNH PH H CHÍ MINH
THÁNG 11/ 2011
i

TÓM T TÀI
Bnh Parkinson gây ra do s thóai hóa ca các t bào thn kinh kim sóat s
vp. Các t bào thn kinh này sn xut dopamin  mt cht có vai trò quan
trng trong s truyn tín hiu gia các t ng dopamin trong não gia b
thiu hi bnh s có các triu chng nh ng chm, tay
chân ct b lit bnh khá ph bin vi t l mc bnh
khang 100/100 ang 20/100 i mi mc bnh.
Tuy tình hình bnh hin nay rt ph bin và nghiêm trng, ng nghiên
cu v nguyên nhân gây bnh, liu pháp phòng bnh, các mô hình nghiên c mô phng

và tr bnh vi nhi. Gc thit
l ng vt có kiu hình bnh PD, các nghiên cc tip cn theo
ng phát hin nht bin s di truyn ca mt s kiu bnh
 góp phn hi  phân t ca bnh PD (Nature, 404, 394-398,
2000; Annu. Rev. Genet, 39, 153-171, 2005; J. Pharma. Exp. Therapeutic, 300, 91 
96, 2002). Mng vt b bnh PD còn có th c dùng cho vic sàng
lc các hp cht hóa hc có hat tính tr bnh PD (J. American Soci. Exp.
NeuroTherapeut., 2, 3, 438-446, 2005).
Mô hình chut chuyc s dng rng r nghiên cu
các bng tn tin và cn nhiu thi gian.
Mt khác, sau khi d án b c thc hin hoàn tt, vic so sánh d liu
b gene ci và ca rui gim, Drosophila, cho thy có khang 70% gene bnh 
ng và bo tn  rui gi 
bu s dng mô hình rui gim chuyn gene trong nghiên cu bnh  i. Mô
hình rui gim chuyn gene cho phép nghiên cu và mô phng mt cách rõ ràng mng
 u hòa s biu hin ca gene gây bnh. Mô hình này
m là r tin, thi gian thí nghim ngc ng dng
khá r nghiên cu bi (Annu. Rev. Genet, 39, 153-171, 2005; J.
ii

Pharma. Exp. Therapeutic, 300, 91  96, 2002, J. American Soci. Exp.
NeuroTherapeut., 2, 3, 438-446, 2005).
 c thc hin và to các dòng rui gim mang các phc hp gene
cho phép knock-down gene duch nhng ti vic nghiên c sinh hc phân
t bng dng trong sàng lc thuc tr bnh Parkinson.
Mt khác, mc dù Drosophila c bit mô hình nghiên cu di
truyc bit là di truyn phân tc s dng làm
mô hình nghiên cu di truyn phân t ti Vit Nam. Do vy, vic thc hi tài này
ngoài ving kt qu nghiên cu khoa hc mi vi th gii còn góp
phn xây dng mc nghiên cu mc quan tâm nghiên cu mnh trên th

gi c thit lp ti Vit Nam.
Nhm thc hin m 
 Phân tích in silico và thit k các h thng vector phc v cho vic to
dsRNA:
Trong nn và phân tích các d liu v gene,
protein UCH-L1  ng vi protein UCH-L1  i
(protein CG4265, ký hiu dUCH), protein này có s  ng (45.9%) và ging
(75.7%) v cu trúc và cha protein UCH-L1  i
và protein dUCH . Chúng t  ã phân tích và d     a
n bnh Parkinson. Kt qu phân tích
cho thy UCH-L1 có mi liên quan vi nhic công b là nguyên nhân gây
bn bnh Parkinson.
thu nhn gene mã hóa cho protein dUCH và to thành công 4
vector phc v cho vic knock-down gene duch  rui gim (vector pB/NdUCH;
pB/CdUCH; pUAST/NdUCH; pUAST/CdUCH)   kim tra hiu qu knock-
down ca các cu trúc ds RNA dUCH trong dòng t bào S2 ca rui gim. Kt qu
kim tra cho tht k cho hiu qu knock down gene duch tt.
iii

 To dòng biu hin protein dUCH trong E. coli và to kháng th kháng
dUCH:
Nhm thu nhn kháng th kháng dUCH phc v cho mc tiêu phân tích kim
tra s biu hin gene duch    o dòng và biu hin thành công protein
dUCH trong E. coli. n và tinh ch thành công protein dUCH và s dng
    này nh   ng min dch trên th. Chúng tôi thu nhn
kháng th kháng dUCH và ki chuyên bi   nhy ca kháng th bng
phn ng Wesern Blot và phn ng Elisa trên protein tái t hc và trên tng
protein thu nhn t rui gim. Kt qu cho thy, kháng th c to thàn nhy,
 chuyên bit cao.
 To các dòng rui gim chuyn gene mang phc hp UAS-IR-dUCH và

ng mô:
Các vector mang và to dsRNA cho gene duch c chuyn vào rui gim bng
c, thun chng các dòng rui này và tc
02 dòng rui chuyn gene mang phc hp UAS-IR.dUCH (ký hiu 24-8 và 26-9). S
dng các phép lai v nh v phc hp UAS-IR.dUCH trên nhim sc th
rui gim chuyn gene. Kt qu cho thy các phc hp UAS-IR-dUCH nm trên
nhim sc th s 3 ca rui gim. Dòng 24-ng hp và dòng 26-9 là dòng d
hp.
Chúng tôi kho sát hiu qu knock dowm gene dUCH trong rui gim chuyn
gene mang phc hp UAS-IR.dUCH kt hp vi Gal4. Kt qu kho sát cho thy các
dòng rui chuyn gene có kh i vi dòng rui
24-i vi dòng rui 26-9.
ng ti mô mt (và mô não) và
kho sát ng biu hin trên kiu hình ca rui gim chuyn gene. Kt qu cho
thy:
iv

a. Knock down dUCH gây bng trong quá trình phát trin mt rui, s
bng ca t bào, bit hóa t bào và quá
trình apoptosis.
b. Knock down dUCH làm gim kh   ng ca rui gim chuyn
gene. S gim kh          ng sinh tng hp
dopamine ti các t bào thn kinh sn sinh dopamine.
 Các công b khoa hc và sn pho
Cùng vi các kt qu nghiên c o 04 c nhân sinh
hc và CNSH và 01 Thc (02 Thn hành).
Các kt qu nghiên c c tng hp và công b trong 01 bài
báo khoa hc, 01 báo cáo ti hi nghn bin ti tp chí CNSH và 01
i tp chí quc t.

v

SUMMARY
Parkinson disease (PD) is a kind of chronic nervous diseases, caused by the
degeneration of brain cells responsible for motor skills. These brain cells produce
dopamine  an important substance functioned as neurotransmitter. Whe
level in the midbrain is insufficient, the patient will have symptoms such as difficulty
in walking, slowness of movement, rigidity or stiffness in the limbs and jaw, tremor.
This is a kind of common disease with the rate about 100/100 000, and there are
20/100 000 new patients annually.
Although this is a common, wide spread and dangerous disease, studies on the

yet given the expected results. Many important questions about PD still do not have
satisfied explanation. Recent studies start to move to find single mutations related to
the hereditary of several PD, help us to have clearer understanding on the molecular
mechanism of PD through the establishment of research models using genetically
modified animals carried PD phenotype (Nature, 404, 394-398, 2000; Annu. Rev.
Genet, 39, 153-171, 2005; J. Pharma. Exp. Therapeutic, 300, 91-96, 2002). This
method, not only can satisfy the requirements of biology molecular researches for the

causing mechanism of the disease, it can also help us to proceed to the screening for
chemical substances which have curable activity (J. Americam Soci. Exp.
NeuroTherapeut., 2, 3, 438-446, 2005).
The genetically modified mouse model has been widely used to study human
diseases. However, this model has high cost and time consuming. One of the biological
models can be used as a model for human diseases is the genetically modified fruitfly
model, Drosophila. This is an effective model for wide screening disease genes with
low cost and time saving. In this model, we can study and mimic clearly the related
genes, and modulate the disease gene. With these advantages, the genetically modified
fruitfly model has been used in human diseases researches (Annu. Rev. Genet, 39, 153-
vi

171, 2005; J. Pharma. Exp. Therapeutic, 300, 91-96, 2002; J. America Soci. Exp.
NeuroTherapeut, 2, 3, 438-446, 2005).
In this research, we purposed to establish some transgenic Drosophila lines
carry cassettes gene which can be used for knocking down duch gene. The transgenic
fly lines can be use for further research on Parminson disease molecular mechanism. In
addition, the results from this project can also be seen as the premise for using fruitfly
model to screen potential natural substances for treatment of PD.
Moreover, Drosophila has been known by researchers all over the world as a
hereditary research model, especially molecular hereditary. Many published papers
based on Drosophila researches have been showed to have great contribution to human
beings. However, the molecular hereditary models in Vietnam almost have not yet
been developed. Therefore, besides taking the above research idea, we are carrying this
project with the wish to start creating a new research field in Vietnam, which is
essential research field had been established long time ago in many countries in the
world.
In this project, we:
 In silico analyzing and constructing some vector which carry and produce
dsRNA for duch gene

We used bioinformatics to identify human UCH-L1 homologue in Drosophila
(the CG4265 protein, named dUCH). The protein has 45.9% identity and 75.7%
similarity to the UCH-L1 protein. Based on some previous scientific data we predict
UCH-L1 protein interaction network in order to find out some candidates for our
research in understanding Parkinson disease mechanism.
After finding out UCH-L1 homologue in Drosophila we then constructing some
vector which carry duch gene fragments and enable to produce dsRNA in vitro or in
vivo vector pB/NdUCH; pB/CdUCH; pUAST/NdUCH; pUAST/CdUCH).
vii

Knocking-down ability of those designed dsRNA fragments were examined and
verified by realtime PCR and Western Blot. Our experimental data revealed that the
dsRNA duch strongly reduced mRNA duch level and gene expression.
 Constructing of dUCH expressing vector and producing dUCh antibody
We constructed a vector which carries duch cDNA gene and expresses the gene
in E. coli. In the vector, duch cDNA was fused to 6xHis DNA fragment in order to
produce fusion protein named 6xHis-dUCH. The 6xHis  dUCH fusion protein was
collected and purified by NiTA column. We then used the above purified protein to
immunize rabbit in order to produce dUCh antibody. After immunization, we collected
serum from the immunized rabbits and check the dUCH antibody by western blot and
Elisa. Our data clearly showed that the collected dUCH antibody is specific.
 Establishment of transgenic Drosophila lines carry UAS-IR-dUCH cassette
gene and tissue specific knock down duch gene
Vectors carry the UAS-IR-dUCH cassette gene fragment was microinject into
fertilized fly embryos in order to produce dsRNA duch in transgenic flies. We screened
transgenic flies and made pure fly lines. We finally collected 02 transgenic fly lines
named 24-8 and 26-9.We then crossed the lines with balancer to identify chromomal
linkage. Our results showed the UAS-IR.dUCH cassette gene located on third
chromosome. Line 24-8 is homogenous and line 26-9 is heterogeneous.
We analyzed knock down dUCH effect in transgenic fly which carry both UAS-

IR.dUCH and Gal4. Our data revealed that duch gene was knock down 36% in 24-8
line and 73% in 26-9 line.
We specifically knock-down duch gene in Drosophila eye or brain by using
GMR-Gal4 or Ddc-Gal4, respectively. We then analyzed transgenic knock down fly
phenotype. Our results showed:
viii

a. Knock down dUCH caused rough eye phenotype. It resulted from an abnormal
eye development which related to apoptosis, photo receptor cell differentiation and
proliferation.
b. Knock down dUCH reduced Drosophila mobility and the reduction involved to
dopamine synthesis pathway through tyrosine hydroxylase.
 Publications and Training
Beside the above experimental results, this research project also contributed in
training 04 Bachelor of Biology and Biotechnology; 03 Master of Biology (02 going
on).
We already published 01 paper, 01 conference publication, 02 revising papers in
Journal of Biotechnology; 01 submitted in international journal.









ix

MC LC

TÓM T TÀI i
MC LC ix
BNG CHÚ GII CÁC CH VIT TT, KÝ HIU xii
DANH MC CÁC HÌNH xiv
DANH MC CÁC BNG xii
PHN M U 1
PHN I. TNG QUAN TÀI LIU 6
1. Bnh Parkinson và tình hình nghiên cu 6
2. Mi quan h gia protein dUCH-L1 và bnh Parkinson 7
3. Bng sinh tng hp dopamine 12
4. Nghiên c bnh trên mô hình rui gim 16
5. RNAi ( RNA interference)  k thut knock down gen 20
6. nh Parkinson 23
7. K thut chuyn gene  rui gim 24
PHN II. VT LIU   26
NI DUNG 1: ng vi protein UCH-L1 ci  rui
gim 26
NI DUNG 2: S dng các k thu dòng hóa gene mc
tiêu vào các vector 26
NI DUNG 3: To kháng th kháng dUCH 35
x

NI DUNG 4: To các dòng rui gim mang phc hp knock-down gene
duch 37
NI DUNG 5: Knock-down gene mc tiêu trong rui gim chuyn gene bng
k thut RNAi 44
PHN III. KT QU - THO LUN 48
NI DUNG 1: ng vi protein UCH-L1 ci  rui
gim 48
NI DUNG 2: S dng các k thu dòng hóa gene mc

tiêu vào các vector 50
2.1.To dòng gen Nduch và CdUCH vào plasmid pBluescript II KS (+) 50
2.2.To dòng gen Nduch và Cduch vào plasmid pUAST 59
2.3. Knockdown dUCH  t bào S2 64
NI DUNG 3: To kháng th kháng dUCH 67
3.1.To dòng t bào E.coli tái t hp mang gen mã hóa cho protein dUCH 67
3.2. Cm ng biu hin protein tái t hp 6xHis-dUCH trong E.coli 72
3.3.Tinh ch thu nhn protein tái t hp 6xHis-dUCH 75
3.4.  ng ca  77
 80
NI DUNG 4: To các dòng rui chuyn gene mang phc hp gene IT.Duch và
kim tra các dòng rui chuyn gene 83
4.1.Thit lp các dòng rui chuyn gene mang phc hp UAS-nh
v phc hp gene này trên nhim sc th rui gim chuyn gene 83
xi

4.2.Kim tra hiu qu knock-down gene dUCH trong rui chuyn gene mang
phc hp UAS-IR.dUCH 84
NI DUNG 5: Knock down gene mc tiêu trong rui gim chuyn gene bng
k thut RNAi 86
5.1.Knock-down dUCH ng ti mô mt vi dòng rui GMR_GAL4 86
--GAL4 86
NI DUNG 6: Kim tra kiu hình biu hin ca dòng ru knock-down
gene 90
PHN IV. KT LUN   NGH 94
TÀI LIU THAM KHO 97

xii

BNG CHÚ GII CÁC CH VIT TT, KÝ HIU

Amp Ampicillin
Amp
r
Ampicillin resistance
bp base pair
CSF Colony stimulating factor
DNA Deoxyribose Nucleic Acid
dH
2
O dc ct)
dNTP deoxyNucleotide TriPhosphate
dsRNA doublestrand Ribose Nucleic Acid
DUB Deubiquinating enzyme
E. coli Escherichia coli
EDTA Ethylene Diamine TetraAcetic acid
kDa kilo Dalton
LB ng Luria-Bertani
MCS Multiple Cloning Site

MJD Machado-Joseph Disease Protease
NPC Neural Precusor Cell
OUT Otubain Protease
pB Plasmid pBluescript KS II (+)
xiii

PCR Polymerase Chain Reaction
PTGS Post-transcriptional Gene Silencing
RISC RNA-induced Silencing Complex.
RNA Ribose Nucleic Acid
RNAi Ribose Nucleic Acid interference
RNase Enzyme thu gii RNA
SDS Sodium Dodecyl Sulphate
ssRNA single-stranded Ribose Nucleic Acid
UAS Upstream Activating Sequence
UCH-L1 Ubiquitin Carboxy-Terminal Hydrolase L1
USP Ubiquitin Specific Protease








xiv

DANH MC CÁC HÌNH
Hình 1: - proteasome 8
Hình 2: a gen UCH-L1 trên nhim sc th i 8

Hình 3: ng sinh tng hp dopamine 13
Hình 4: ng thoái hóa dopamine 14
Hình 5: i ca rui gim Drosophila melanogaster 17
Hình 6: H thng UAS-GAL4 và cách thc hong 20
Hình 7:  siRNA ca quá trình RNAi 21
Hình 8:  miRNA ca quá trình RNAi 22
Hình 9: ng trình PCR 27
Hình 10:  mô t s chèn gen vào plasmid pBlue/T3,T7 32
Hình 11: Rui 44
Hình 1.1: Kt qu tìm thông tin v ng
gây bnh Parkinson 48
Hình 1.2: So sánh trình t amino acid ca UCH gia các loài Homo sapiens, Mus
musculus, Gallus gallus, Salmo salar, xenopus, Equus cabal, zebrafish và Drosophila
melanogaster. 50
Hình 1.3. D   a UCH-     n bnh
Parkinson. 51
Hình 2.1: A: Thu nhn gen NdUch-L. B: Thu nhn pBluescript/EcoRI,XhoI 53
Hình 2.2: Kt qu PCR khun lc trng bng mi T3/T7. 55
xv

Hình 2.3: Kt qu PCR plasmid bng mc hiu ca gen Nduch-L1 56
Hình 2.4: Kt qu kim tra vector tái t hp pBlue/NdUch-L1 57
Hình 2.5: Kt qu gii trình t ca plasmid tái t hp pBlue/NdUch-L1 58
Hình 2.6: A: Thu nhn gen NdUch-L1. B: Thu nhn pUAST/EcoRI, XhoI 60
Hình 2.7: Kt qu PCR khun lc bng mc hiu ca gen NdUch-L1 62
Hình 2.8: Kt qu kim tra vector tái t hp pUAST/NdUch-L1 62
Hình 2.9: Kt qu gii trình t ca plasmid tái t hp pUAST/NdUch-L1 63
Hình 2.10: Kt qu thu nhn dsRNA 64
Hình 2.11: Kt qu ng mRNA 65
Hình 2.12: dsCduch-l1 có kh ockdown dUCH-L1 66

3.1: Thu nhn gen duch 67
3.2 68
Hình 3.3: Kt qu kim tra PCR khun lc 69
Hình 3.4: Kt qu kim tra vector tái t hp pET28a/duch 70
Hình 3.5: Kim tra trình t gen mã hóa protein dUCH trong vector biu hin 71
Hình 3.6: Kt qu khu kin biu hin protein tái t--
PAGE 73
Hình 3.7: Kt qu khu kin biu hin protein tái t 6xHis-dUCH 74
Hình 3.8: Kt qu tinh ch 6xHis-dUCH 76
Hình 3.9
1000-15,63ng 78
xvi

3.10
-0,125ng 79
3.11 80
3.12:  81
Hình 3.13  Western blot vi m       - 
UAS-dUCH 82
Hình 4.1: Hiu qu knock-down dUCH trong các dòng rui chuyn gene 85
Hình 5.1: Knock-down dUCH gây kiu hình mt nhám trong rui chuyn gene 87
Hình 5.2: Kim tra s biu hin protein dUCH trong mô tin phân sinh mt rui 88
Hình 5.3: Kim tra s biu hin ca protein dUCH trong não rui 89
Hình 6.1 th biu din kh ng ca rui cái (A) và ruc (B) theo
thi gian 90
Hình 6.2: Nhum min dch hunh quang não rui vi kháng th kháng TH 91

xvii

DANH MC CÁC BNG
Bng 1.1: Kt qu  plasmid pBlue/EcoRI, XhoI và gen NdUch-L1 sau khi
tinh sch 54
Bng 1.2: Kt qu    plasmid pUAST/EcoRI, XhoI và gen NdUch-L1
/EcoRI, XhoI sau khi tinh sch 61
Bng 3.1: Kt qu  protein sau tinh ch 76
3.2
- 77

-i) 79
Bng 4.1. Danh sách các dòng rui mang phc hp gene UAS-IR.Duch 83
Bng 4.2. Kho sát ng ca knock-down dUCH ti các mô khác nhau trên rui
gim chuyn gene bng k thut biu hi   ng mô s dng phc hp
Gal4-UAS 92
- 1 -

PHN M U
1.  tài: To dòng rui gim chuyn gene uch-l1 nhm ng dng trong nghiên
cng ti sàng lc thuc cha bnh Parkinson
2. Ch nhi ng Th o
 c T c Gia Tp. HCM
4. Thi gian thc hin 10/2011
c duyng)
6. Mc tiêu c tài:
- To các dòng rui gim chuyn gene mang các phc hp gene cho phép

knock-down gene duch trong rui gim
7. Ni dung thc hin:
 thc hin m tài thc hin các n
1. S dng các k thut sinh tin h        ng vi
protein UCH-L1 ci  rui gim. Thit k các trình t dsRNA nhm knock-
down gene duch.
2. Thit k các vector mang và biu hit k in vitro và in
vivo và kim tra.
3. To kháng th kháng dUCH s dng cho m     biu hin gene
duch.
4. To các dòng rui gim chuyn genemang phc hp gene cho phép knock-down
gene duch
1. S dng k thu c tiêu vào trng rui gim
2. Thun chng các dòng rui chuynh v gene m
rui chuyn gene
3. Kim tra hiu qu knock-down gene duch
5. Knock-down gene mc tiêu trong rui gim chuyn gene
6. Kim tra và phân tích kiu hình ca dòng ru-down gene mc tiêu.
- 2 -

2. Sn phm c tài
- 02 dòng rui chuyn gene mang c knock-down gene duch
- Kháng th kháng dUCH
- Các dòng rui th nghim knock down gene duch
- Các d liu phân tích kt qu knock-down gene duch trong rui gim
- 05 công b khoa h; 01 báo báo tham d hi ngh
gi tp chí quc t)
- o 034 c nhân sinh hc và CNSH; 03 Tho vg
tin hành)

- 3 -

Bng tóm tt các công vic hin và kt qu i chiu theo
hng khoa hc)
Công ving
Công vic hin
TT
Tóm tt ni dung
Sn phm ct

n I
1.

-    ng
ng ca UCH-L1 ca
i  rui gim, phân
  nh m 
 ng và các chc
c. Phân tích
 nh trình t gene
thích hp cho vic
knock-down gene mc
tiêu
-
ng ca UCH-L1 ca
i  rui gim
- M   ng ca
các protein
- Trình t 
knoc-down
-ng ca
UCH-L1 ci  rui gim
- M   ng ca các
protein
- Trình t  knock-
down
2.
- S dng các k thut

hóa gene mc tiêu vào
các vector
- Vector tái t hp mang
gene mc tiêu và các d

liu phân tích kim tra
trình t gene trên vector
- Tc vector tái t hp mang
gene mc tiêu
- Tng hp các d liu phân tích
kim tra trình t gene trên vector
3.
- To kháng th kháng
UCH-L1 ca rui gim
- Dòng vector biu hin
gene mã hóa cho protein
 ng vi UCH-L1
ci  rui gim
- ng vi
UCH-L1 ci  rui
gim
- Kháng th kháng protein
 ng vi UCH-L1
ci  rui gim
- Dòng vector biu hin gene mã
    ng vi
UCH-L1 ci  rui gim

- ng vi UCH-L1
ci  rui gim

- T c kháng th kháng
protein dUCH-L1 tái t h
tin hành ki  hiu ca
kháng th)

4.
Công b kt qu nghiên
cu
-     
tp chí chuyên ngành
-     
yu hi ngh khoa hc
- 01 bài (Nguyng
Th  o, Trn Thanh
Hòa, Yamaguchi Masamitsu, Trn
 c, To kháng huyt
thanh kháng Drome-UCH-L1
trong nghiên cu bnh
Parkinson, Tp chí Y hc Tp. H
- 4 -

Chí Minh, p 110  115, s 2,
2009)
- Nguyen Van Dung, Dang Thi
Phuong Thao, Yamaguchi
Masamitsu, Tran Linh Thuoc,
2009, Expression of drome-uch
in E. coli . The 7
th
Vietnam- Japan
joint seminar
5.
Kt qu o
-
03 khóa lun c nhân ngành

CNSH
n II
1
-S dng các k thut vi
    c tiêu
vào trng rui gim
- Các dòng rui chuyn
gene mang gen mc
tiêu
02 dòng rui mang các phc hp
gene sinh UAS-dsRNA/duch và
t rui gim
(dòng dUCH IR 3 và dòng dUCH
IR 3-TM3)
2
- Thun chng các dòng rui
chuy  nh v gene
m     rui
gim chuyn gene
- Các dòng rui
chuyn gene thun
chng
- Bng tng hp các d
liu v v trí gene mc
tiêu trên các dòng rui
chuyn gene
- 01 dòng ru ng hp mang
phc hp gene UAS-dsRNA/duch
- 01 dòng rui d hp mang phc
hp gene UAS-dsRNS/duch vi

balancer TM3
- Bng tng hp d liu v v trí
phc hp gene chèn trên b gene
rui gim chuyn gene và kiu
gene ca các dòng rui chuyn
c to thành
3
- Knock-down gene mc tiêu
trong rui gim chuyn gene
bng k thut RNAi
- Bng tng hp các d
liu v kt qu knock-
down gene mc tiêu
- Các kt qu knock-down gene
mc tiêu (kt qu real-time PCR
 ng mRNA duch, kt qu
lai western blot, kt qu lai min
dch (immunostain) ti mô mt và
mô não rui chuyn gene)
4
- Kim tra kiu hình biu
hin ca dòng rui chuyn
 knock-down gene
mc tiêu
- Bng d liu v kiu
hình, kiu gene ca các
dòng rui chuyn gene
 knock-down
- Bng d liu kiu gene ca các
dòng rui chuyn gene mang phc

hp dsRNA/duch và biu hin các
phc hp này t   
chuyên bit (mô mt, mô não)
- 5 -

- Các kt qu phân tích kiu hình
cho thy  ng ca vic
knock-down duch lên kh 
vng và kh ng sót ca
rui chuyn gene (kt qu
climbing assay và kt qu survival
assay)
- Các kt qu chng minh nguyên
nhân gây kiu hình bnh (gim
kh ng) ca rui gim
chuyn gene là do s knoc-down
gene mc tiêu duch
- Các kt qu nhum min dch ti
mô não nhm làm rõ nguyên nhân
gây ra kiu hình bnh ca rui
chuyn gene
- Các kt qu chng minh mi liên
quan gia vic knock-down duch
và các yu t quan trng trong con
ng sinh tng hp Dopamine
6.
Công b kt qu nghiên cu

- 01 bài báo g   p
n bin)

- 01 bài báo g  i tp chí
Neurobiology of Disease (gi

7.
Kt qu o

- 01 khóa lun c nhân CNSH
- 03 luc (01
o v; 02 chun b bo v)












TNG QUAN TÀI LIU