Nghiên cứu tạo rễ tơ khoai lang chuyển gen cry3 kháng sâu non bọ hà (Cylas formicarius

I HC QUC GIA HÀ NI
TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN





LÊ XUÂN THAO




NGHIÊN CỨU TẠO RỄ TƠ KHOAI LANG CHUYỂN GEN CRY3
KHÁNG SÂU NON BỌ HÀ (Cylas formicarius)




LUC





Hà Nội - 2012



I HC QUC GIA HÀ NI

TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN



LÊ XUÂN THAO


NGHIÊN CỨU TẠO RỄ TƠ KHOAI LANG CHUYỂN GEN
CRY3 KHÁNG SÂU NON BỌ HÀ (Cylas formicarius)


Chuyên ngành: Vi sinh vật học
Mã số: 60 40 42

LUC


NG DN KHOA HC: TS. Phm Bích Ngc





Hà Nội - 2012



MỤC LỤC
DANH MC CÁC BNG I
DANH MC CÁC HÌNH II

BNG KÝ HIU CÁC CH VIT TT III
M U 1
t v 1
2. Mc tiêu c tài 2
3. Ni dung c tài 2
NG QUAN TÀI LIU 3
1.1. Vai trò và giá tr ca cây khoai lang 3
c v cây khoai lang 3
1.1.2. Giá tr ng và giá tr kinh t cây khoai lang 3
1.2. B hà hi khoai lang (Cylas formicarius) 7
m sinh hc ca b hà hi khoai lang 7
1.2.2. Tp tính sng và gây hi ca b hà 8
1.3. K thut chuyn gen thông qua Agrobacterium rhizogens và ng dng 9
1.3.1. Gii thiu vi khun A. rhizogens 9
1.3.2. H vector nh th 11
1.3.3. ng dng nuôi cy r  13
1.3.4. Yu t ng lên quá trình chuyn gen nh Agrobacterium 17
1.4. Gen có hoc  Bacillus thuringiensis (Bt) 18
c v Bt 18
1.4.2. Phân loc t ca Bt 20
1.4.2.1 Các gen nc t cry 20
1.4.2.2. Các gen ngoc t khác 21
1.4.3. C ng cc cho côn trùng 23
1.4.4. Mt s thành tu to cây khoai lang chuyn gen 25
T LIU 27
2.1. Vt liu, hóa cht và thit b 27
2.1.1. Vt liu 27
2.1.2. Hóa cht 27
2.1.3. Thit b 27
u 28

2.2.1. Chuyn gen thông qua Agrobacterium 28
2.2.1.1. To dch huyn phù Agrobacterium 28
2.2.1.2. Nhim vi khun vi mnh lá 28
2.2.2. ánh giá cây trng chuyn gen qua biu hin tm thi ca gen gus. 29
2.2.3. Tách, tinh sch DNA tng s 29
2.2.4. Kim tra gen bin np bng k thut PCR 29
n di sn phm PCR trên agarose, nhuc
kt qu trên máy soi gel 31
2.3. Tách protein tng s thc vt 32
ng protein b 32
nh hot lc dit côn trùng ca protein lên sâu non b hà 33
2.5.1. Nuôi sâu non b hà 33
2.5.2. Tho cho sâu non b hà 34
2.5t lc ca protein lên sâu non b hà 34
 lý s liu 34
 KT QU VÀ THO LUN 35
3.1. Kt qu phân tích biu hin tm thi ca gen gus 35
3.1.2. ng ca thng nuôi cn kh n np 36
3.1.3. ng ca m t bào vi khun kh n np 37
3.1.4. ng ca cht cm n kh n np 39
3.2. Kt qu chuyn gen cry3 vào khoai lang thông qua vi khun A. rhizogens 41
 t qu chuyn gen thông qua A. rhizogens mang vector
pIBT/cry3 42
3.2.2. Kt qu tinh sch DNA khoai lang tng s 45
3.2.3. Kt qu chuyn gen cry3 vào khoai lang thông qua A. rhizogens 45
3.3. Kt qu tách protein tng s 48
3.4. Kt qu kim tra hot lc dit côn trùng ca protein bin np 49
KT LUN VÀ KIN NGH 52

Kt Lun 52
Kin ngh 52
TÀI LIU THAM KHO 53
PH LC 62
i

DANH MỤC CÁC BẢNG
Bng 1.1. Tình hình sn xu 6
Bng 1.2. Phân loc t cry 21
Bng 2.1. Thành phn phn ng PCR 30
Bng 2.2. Chu k nhit cho phn ng PCR 31
Bng 3.1. ng ca thi gian lây nhin kh n np 36
Bng 3.2. ng thng nuôi cn kh n np 37
Bng 3.3. nh ng m t bào vi khun kh n np 38
Bng 3.4. ng n cht cm n kh n np 40
Bng protein trong các dòng KB1 48
Bng 3.6. Hot lc dit côn trung ca protein lên sâu non b hà 49
ii

DANH MỤC CÁC HÌNH
Hình 1.1. B ng thành 7
Hình 1.2. Cu trúc plasmid Ri ca A. rhizogenes 11
Hình 1.3. Hình nh to khi u gây ra do A. tumefaciens và r A.
rhizogenes 13
Hình 1.4. Nuôi cy r G.glabra 15
Hình 1.5. Mt s ng dng ca r  17
Hình 1.6. Bào t và tinh th c  Bacillus thuringiensis 19
Hình 1.7. Cu trúc cc t Cry3A 23
Hình 1.8. Mô hình hong ci vi côn trùng
25

Hình 3.1. Kt qu bin np A. rhizogens mang vector pPTN289/Gus 39
Hình 3.2. Kt qu bin np A. rhizogens mang vector pPTN289/Gus 41
Hình 3.3. R  các mô chuyn gen 43
Hình 3.4. Kt qu bin np gen cry3 vào khoai lang KB1 44
Hình 3.5. Kt qu n di kim tra tách DNA tng s 45
n di sn phm PCR các dòng r khoai lang vi cp mi cry3
46
n di sn phm PCR các dòng r khoai lang vi cp mi virC
47
Hình 3.8. Kt qu th hoc lên sâu non b hà 51
iii

BẢNG KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT

AS
Acetosyringone
A.rhizogenes
Agrobacterium rhizogenes
ATCC
American Type Culture Collection
Bt
Bacillus thuringiensis
Cs
Cng s
DNA
Deoxyribonucleic acid
Gus
-glucuronidase
Km
Kanamycin

MS
Murashige and Skoog
OD
Optical Density
PBS
Phosphate buffer saline
PCR
Polymerase Chain Reaction
Ri plasmid
Root inducing plasmid
T
L
 DNA
T Left - DNA
T
R
 DNA
T Right - DNA
WPM
Woody Plant Medium
X-Gluc
-D-glucuronide Cyclohexylamine
1

MỞ ĐẦU
1. Đặt vấn đề
Khoai lang (Ipomoea batatas) 

khoai lang  khá cao. Khoai lang ,
  [73]. 

             
 

, 

 hoai lang là



  
. T 800 ha
 317  (, 2010 lang bình quân
 
châu 

 , 







 
n 30  50%, % [18].  


 





 ; 







 ; B
2

 bi
trong  Tuy nhiên 
 và nhân công
 các vùng chuyên canh và i

Ngày nay  là Công
trong phòng tr
. P
pháp này  





 ng. V
n Bacillus thuringiensis vào khoai lang 
        Agrobacterium     . Tuy

nhiên
 trì Agrobacterium, 
gen   .
 
hà
chúng tôi 
cry3 Cylas formicarius
2. Mục tiêu của đề tài
- các  en vào khoai lang
thông qua Agrobacterium.
- T khoai lang mang gen cry3 thông qua Agrobacterium
rhizogens  h giá  gen 
3. Nội dung của đề tài
-   trong quy t
A.rhizogens thông gus.
- cry3 vào khoai lang KB1 A. rhizogens và
  trong .
3

CHƢƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. Vai trò và giá trị của cây khoai lang
1.1.1. Sơ lược về cây khoai lang
Khoai lang (Ipomoea batatas),         
(Ipomoea    Convolvulaceae   Solanales).    



       Chúng l    

  

 


hâu M, l
  


 [16].
1.1.2. Giá trị dinh dưỡng và giá trị kinh tế cây khoai lang
V giá tr ng, trong 100g c trung bình c;
0,8g protein; 0,2g lipid; 28,5g glucid (24,5g tinh bt, 4g glucoza) và 1,3g cellulose,
có th cung c khong 122 
nhiu vitamin và mui khoáng (34mg canxi, 49,4mg photpho, 1mg st, 0,3mg
caroten, 0,05mg vitamin B1, 0,05mg vitamin B2, 0,6mg vitamin PP, 23mg vitamin
C ). c và cht khô ph thuc vào các yu t ng,
ng, khí h dài ngày, lot, k thut trng trt. n
hc, giá tr ng c
4

c, 2,2g protein, 0,5g lipid, 80g glucid, 3,6g cellulose, nhiu loi vitamin và
mui khoángc, 2,6g protein, 2,8g glucid, 1,4g
cellulose canxi, 54mg PP, 11mg vitamin C [73]. n cung
c  ng là ch y         khoai tây là
75Cal/100g [12].
 c trng khoai lang trên th gic s dng rng rãi vi
mc, thc phm, cung ci, ch bin thành nhiu sn
phm khác nhau. Tinh bt khoai lang c s dng ch bin thành sn phm tinh bt bin
tính, các sn phm lên men thu phc s dng rng rãi trong nhiu ngành công
nghip thc phm, dt, giy, vt liu xây dng, cao su nhân to là nguyên ling
 sn xut th, nguyên liu sn xut ethanol sinh hc có giá thành cnh

tranh, thân thin vng, góp phn phát tring tái to thay th 
ng hoá thch. Ngoài ra, khoai lang còn là v thuc có tác dng nhun tràng, b tì v [9].
Theo s liu thng kê ca T chc và Nông Nghip ca Liên Hp
Quc, trên th gii 77% khoai lang s dc, 13% làm th
làm nguyên liu ch bin thành nhiu sn phm khác nhau [9], [12]. Phn loi b t ít
chim 6%, phn thân lá ngn vc s dng làm rang thi là
ngun th. Tuy nhiên vic s dng khoai lang nhiu vào mc
 thu phát trin cc trng.  c phát tring
khoai lang c c s dc chi dng làm nguyên
liu ch bin 25% [87].
 Vit Nam t n thng s d
thc thc phm và thn phm khoai lang s dng ch yu
 vùng nông thôn, 60% sc s dng làm th
i dng c  [12], [10].
Do giá tr ng cao, thun tin trong ch bin vi nhiu m
ngày nay cây khoai lang ngày càng khnh giá tr ca mình trong nn kinh t. n
c trng ph bin trên c c (Bng 1.1). Tuy nhiên do có nhng hn
5

ch v  sut, bo qun ch bin sau thu hoch nên nhn tích trng
git thnh.

6

Bảng 1.1. Tình hình sản xuất khoai lang trong nƣớc theo địa phƣơng

Vùng
Diện tích (1000ha)
Sản lƣợng (1000 tấn)
Năng suất (tạ/ha)

2006
2007
2008
2009
2010
2006
2007
2008
2009
2010
2006
2007
2008
2009
2010
C c
181,2
175,5
162,6
146,4
150,8
1460,9
1437,6
1325,6
1207,6
1317,2
80,6
81,9
81,5
82,5

87,3
ng bng sông Hng
39,0
36,5
32,3
22,8
27,0
327,2
327,6
291,8
194,7
247,0
89,0
89,8
90,3
85,4
91,5
Trung du và min núi
phía Bc
44,7
44,2
41,4
38,2
39,0
278,3
285,1
267,5
238,2
256,2
62,3

64,5
64,6
62,4
65,7
Bc trung b và duyên
hi min Trung
69,8
66,7
61,1
55,1
54,0
426,3
407,6
374,7
328,9
341,0
61,1
61,1
61,3
59,7
63,1
Tây Nguyên
12,3
12,3
13,0
14,1
14,0
125,0
125,2
131,1

151,0
150,7
101,6
101,8
100,8
107,1
107,6

2,0
2,0
2,1
2,5
2,0
12,6
12,6
17,4
20,7
15,8
63,0
63,0
82,9
82,8
79,0
ng bng song Cu
Long
13,4
13,8
12,7
13,7
14,8

271,5
279,5
243,1
274,1
306,5
202,6
202,5
191,4
200,1
207,1
Nguồn: Tổng cục thống kê
7

1.2. Bọ hà hại khoai lang (Cylas formicarius)
1.2.1. Đặc điểm sinh học của bọ hà hại khoai lang
B hà khoai lang, Cylas formicarius, thuc chi Ipomea, có ngun gc t Indonesia,
và c mô t b [90]. V hình thái bên ngoài, b ng
thành mình thon, chân dài, trông tt nh u
en, mt kép hình bán ct. Ngt cui râu và
m. Bt cui râu b ng thành hình
ng dài, ca con cái có hình trng. Ngc có chiu dài gu r n
to. B ng thành dài 6-8,5mm [52].

Hình 1.1. Bọ hà trƣởng thành
(ngun:
Tu thuu kin nhi i ca b hà có th kéo dài t 4-6 tun,
trung bình mi con cái  khong 200-250 trng. Trng b hà có màu trc, mm,
hình bu dc 0,7 c trong nhng h nh do b
c trên b mt dây gc hoc c khoai. Pha trng kéo dài t 5-8 ngày. Sau khi n ra,
c ngay vào trong dây hoc c khoai. Sâu non khi n ra có màu tr có

8

c 6mm1,6mm.  u kin nhi 30
0
C thi gian phát dc ca sâu non b hà
là 15-20 ngày [19], [90]. Nh  c 5,0  u màu trng, sau
chuyn dn sang màu nâu. Thi gian phát dc ca pha nhng là 5-
b ng thành nc 6-9 ngày. Trong th b
hà bii dn t trng ngà sang nâu, cua loài, b
hà có th cho t 5-8 th h trong m . Khi b ng thành chui ra khi c 
thêm và tin hành giao phi. Sau 2-3 ngày b ng thành b trng. Thi gian
sng ca b ng thành có th kéo dài t 70-90 ngày [52].
1.2.2. Tập tính sống và gây hại của bọ hà
Tp tính gây hi ca b hà có nhc thù riêng bit so vi các loài sâu hi khoai
lang khác. B n biu bì ca lá, cung, dây và c khoai khin cho
cây héo và chu này ít khi xy ra nên không n sng c.
Thit hi ch yu xy ra do sâu non b t c và thng
c. Nhng c khoai b b hà gây hi, dù ch  mt phn nh y xut hin nhng
vt thâm, mùi hc và v ng khó ch phn ng li s gây hi ca b hà, c khoai sinh
ra chc bit. Chc này có th gây hi vi phi và tim ci và
 b hà.
B ng thành có th hong c i hot
ng din ra mnh m nht vào lúc chiu t nên nhng rung
khoai tng b phá hoi nng ru hà
ng thành có th bay rm khi bay, s lây lan ca chúng t vùng
này sang vùng khác ch yu là do coi. B hà xâm nh trng vào c khoai
qua các k nt ct, vì vy vùng khô hn, t l gây hi ca b i
nht m thp [15].
Theo nghiên cu ca nhiu tác gi, b hà khoai lang có mt vài kí ch cùng h vi
khoai lang, ví d Ipomoea aquatica còn gi là cây rau mung. Các cây này có th

 ca b hà gia các v trng và là ngun lây nhim b hà khi cây khoai lang
mc trng [42].
9

1.3. Kỹ thuật chuyển gen thông qua Agrobacterium rhizogens và ứng dụng
1.3.1. Giới thiệu vi khuẩn A. rhizogens
Agrobacterium là các loài vi khu t, thuc vi khun Gram âm, ym
khí, khi xâm nhp qua vn này gây ra các triu chng
bnh trên thc v  o khi u hay lông r. Agrobacterium thuc h
Rhizobiaceae, chi Agrobacterium có 4 loài chính: Agrobacterium tumefaciens,
Agrobacterium rhizogens, Agrobacterium radiobacter, Agrobacterium rubi.
A. tunefaciens và A. rhizogenes là hai loài c nghiên cu nhiu nht
gây ra bnh khi u (crown gall) và bnh lông r (hairy root)  các v trí tn
a thc vt hai lá mm (Hình 1.3).
Agrobacterium rhizogenes Phytomonas rhizogenesnh danh
lu [77].
Tác nhân gây bnh ca hai loài vi khun A. tumefaciens, A. rhizogenes
nh là do s có mt ca Ti (tumour inducing)  A. tumefaciens và Ri
(root-inducing)  A. rhizogenes [29]. Khi t bào thc vt b  tit ra các
polyphenol hp dn các vi khun, t    n T-DNA (Transfer
DNA) t T-plasmid hay R-plasmid vào h gen ca t bào vt ch. Nhìn chung,
 ca quá trình xâm nhi phân t ca quá trình vn chuyn T-
DNA vào t bào vt ch ca hai loài vi khu
nhau [83]. Tuy nhiên, s hình thành khi u  vi khun A. tumefaciens do gen mã
hóa sinh tng hng hp
auxin  vi khun A. rhizogenes có vai trò rt nh trong quá trình hình thành r 
 thc vt [32], [83].
Gi Ti-plasmid, Ri-plasmid là phân t DNA mch vòng, si kép,
có trng phân t ln, t 200 - 800 kb, gm hai vùng chính là T-DNA và
vir (virulence). Da vào kh   ng hp các opine  r  - ngun

cacbon và nit cho vi khun. Ri- c chia làm hai nhóm chính:
agropine (i din là plasmids pRiA4, pRi1855, pRiHRI, pRi15834, pRiLBA9402)
10

và mannopine (n plasmid pRi8196), mt s nhóm ph c tìm thy và
phân locucumopine và mikimopine. Mikimopine và cucumopine là
các stereo-y s ng gia các gen sinh tng hp
opine  m nucleotide. ng thuc nhóm agropine (A4, 15834,
  c ch      i các chng thuc nhóm
mannopine (8196, TR7, TR101) và các chc s dng ch yu trong
các nghiên cu to r  thc vt [17], [77], [83].
T-DNA  Ri-plasmid ca nhóm agropine bao gm hai vùng chính là vùng
biên trái T
L
-DNA và biên phi T
R
-DNA. T
L
-DNA và T
R
-c chuyn vào
c lp vi b gen ca t bào ch thc vt, trong khi quá trình chuyn T
L
-DNA
li cn thit cho s cm ng hi  to r , quá trình chuyn T
R
-DNA
không gây ra s hình thành r  t mu nuôi cy chuyn gen [60], [80]. Hai
    c khong 15 -    c xen k bi m n
 n DNA xen k  c chuyn vào h gen ca t bào vt ch.

Vùng T
R
-DNA mang các gen mã hóa tng hp DNA (tms1 và tms2), vùng T
L
-
DNA bao gc m n locus 10, 11, 12 và 15
mã hóa cho rol A, B, C và D (root locus). Các Ri-plasmid ca các chng A.
rhizogenes thuc nhóm mannopine, cucumopine và mikimopine cha vùng T-
   u trúc gi   
L
-DNA ca các chng thuc nhóm
t gen rolD [26], [32]. T
R
-DNA cha các gen ng
i vi T-DNA ca Ti plasmid  A. tumefaciens
Các gen rolA, rolB và rolC ng trong quá trình cm
ng to r  mô t bào thc vt. S biu hing thi ca ba gen này gây
nên kiu hình r  mô t bào thc vt b xâm nhim. Các r m sinh
ng, phân nhánh mnh và phát tri   t nhiu so vi r bình
ng [79]. Trong 3 gen rol trên, gen rolB , thm
chí khi mt mình gen rolB c biu hin, mô t bào thc vm ng to
kiu hình r c li khi bt hot gen rolB mô thc vt không to kiu hình
r [26].
11


Hình 1.2. Cấu trúc plasmid Ri của A. rhizogenes [70]
1.3.2. Hệ vector nhị thể
 c quá ln ca Ri-plasmid và Ti-plasmid  n 800kb) gây
nhi      n gen thông qua Agrobacterium và trong

các thao tác s d thit k gen vào các vector này. Mt khác các enzyme
gii hn có th ct DNA ca Ti-plasmid  nhiu ch khác nhau, trong khi công
ngh gen li cn nhng v trí ct duy nht cho hong ca mt s enzyme gii
h     A.tumefaciens, mt s gen mã hóa sinh tng hp auxin
c s dng làm ch th chn lc có tính tri cn tr quá trình tái sinh
ng  thc vt. Vi tin Ti-
plasmid thành mt h vector nh th gm có vector chuyn gen (mang cu trúc
12

T-DNA) và vector b tr (mang các gen virm nhim chn chuyn
T-DNA vào t bào thc vt [15].
- --
onc 
biên trái (T--

+ C            E. coli và
Agrobacterium;
+ Các ge: Do không phi toàn b các t bào và các mu chuyn
u mang gen chuyn nên nht thit phi tin hành sàng lc các t bào chuyn
gen. Da vào các gen chn lc thit k trong vector chuyi ta
s dng các kháng sinh phù h c các t bào, mu mang gen chuyn.
Gen chn ln hình là các gen mã hóa cho các loi enzyme có kh  c
i v    e (nptII), hygromycine (hyg), gentamycine
(gentc cht dit c glyphosate hay basta (bar nhng t bào mang
gen bin np có th sng cha cht kháng sinh hoc cht dit c
[3]. Các loc ng dng và mang li thành công trong vic chn
lc nhing cây trng chuy, cây hng, cây lúa, cây
bông vi, cây thu[2], [6], [7], [14], [19].
+ G: Có th nhum hóa t  khnh s ca mt ca sn
phm thông qua gen ch th c s dng ph bin trong chuyn gen thc vt là gen

gus hay gen uidA. Gen gus nm  locus uid ca vi khun E. coli và mã hóa cho
-t enzyme hydrolase có kh y các
hp cht có g- glucuronide to thành cht trung gian, khi cht này b oxi hóa s
nh rt d dàng và thun
tin bng hp cht indole- -glucuronide.
+ V 
- 
13

- vir 
i
b

Vector chuyn gen trong h vector nh th  A. tumefaciens có th s dng
 chuyn gen thông qua A. rhizogenes. Khi nhim A. rhizogenes vi thc vt s
làm chuyn T-DNA t vector chuyn gen cùng vi T-DNA ca A. rhizogenes
vào genome thc vt [9].
S tái sinh thành cây chuyn gen thông qua vi khun A. rhizogenes có th
xy ra thông qua s phát trin phôi soma hoc s  r. Tuy
nhiên, thc vt tái sinh t lông r ng b bii hình thái: lá b gp np, h
thng r ng cn ci và kh n kém.


Hình 1.3. Hình ảnh tạo khối u gây ra do A. tumefaciens (trái)
và rễ tơ do A. rhizogenes (phải)
1.3.3. Ứng dụng nuôi cấy rễ tơ
T bào thc vt nói chung và r  nuôi cy d dàng,
ng nuôi cn, r tin, d dàng sn xut mng sinh khi ln
trong khong thi gian ngn và quan tr t bào thc vt không mang
các mm bi, c xem là mt trong nhng hic

14

s d biu hic phm sinh hc tái t hc bit r 
ng, phát trin tng không cn b sung các chu hòa
ng vì th loi b ng ca các cht này trong sn phm to ra.



























 




 . a các r  c nuôi cy to sinh khi liên tc,


 nhanh (

















 2500 -
5000 3 )  trong dây chuyn sn xut các cht th
cc phm sinh hc tái t hi thc vt

chuyn gen, nuôi cy mô t bào thc vm ln trong công tác sn xut
 c phm sinh hc tái t h    i din tích canh tác, không
chu ng vào khí hu, mùa v, sn phc không mang các yu t
c hi t thuc tr sâu, thuc dit c và rút ngc rt nhiu thi gian trong
trng trc bi  h thng nuôi cy lng các mô t bào thc vt vic
biu hic phm sinh hc tái t hng nuôi cy giúp làm
t nhiu trong quá trình tinh sch các phm sinh hc này [1].
Cho tu nghiên cu sn xut thành công các protein tái t
hc phm sinh hc tái t hp t h thng nuôi cy r 
(human secreted alkaline phosphatase), protein hunh quang kt hp vi protein
ricin B (GFP-ricin Bc bi là các kháng th và các
chui nng, chui nh ca kháng th [30], [85] (hình 1.4).
15


Hình 1.4. Nuôi cấy rễ tơ G.glabra
a: Bng h thng bioreactor
b, c: Thu hoch sinh khi r sau 30 ngày nuôi cy
(Nguồn:o/content/vol11/issue2/full/6/f4.jpg&imgrefurl)
 









 y r   







, .
Công ty Escagenetics (California, ) 




 

 . 











 







(Taxus brerifolia) 












. 















 . Escagenetics 


























.
16



 (1997) 





 Trigonella foenum-graecum








 4  Agrobacterium rhizogenes.  








 , 












 (semi-synthesis)
 .  0,040% 


 (





 -McCo


 1% sucrose)  2 










 4, 8
(0,024%) [57].
 (1997) 









 Hyoscyamus
muticus 



 Agrobacterium rhizogenes 
trên 34 







 . 











, scopolamine, , 




. Tuy nhiên, 










rol (A, B  C)  A. rhizogenes 



















. [68]


 (1997), 
















Datura stramonium 



Agrobacterium ATCC15834. 
 6 tung 100mg/l. 



, 

ca
các ion (NO
3
-
, SO
4
2-
, H
2
PO
4
-
, K
+
, Ca
2+

và Mg
2+
) ng 








 . 



 NO
3
-
, K
+
 ,
n các ion SO
4
2-

+
cao [71].
17

Hình 1.5. Một số ứng dụng của rễ tơ
(nguồn:
1.3.4. Yếu tố ảnh hưởng lên quá trình chuyển gen nhờ Agrobacterium




 , Agrobacterium  , 








 

 -



 

 . 
, 












 , 










  Agrobacterium
vào cây m

.  
h[8].
18

Agrobacterium o
   

  nghiên


Khi phâgus 

gen thông qua Agrobacterium so 
 [63], [64]8
cây khoai lang in vitro  [54].
1.4. Gen có hoạt tính gây độc ở Bacillus thuringiensis (Bt)
1.4.1. Sơ lược về Bt
Bt gram (+),  k
  .     -45
0
   
-32
0
C. Tdài 3-6m mao không dày, có

oval, - 2

khác              
0,6x2     
 khác nhau [6], [86]. Bt 
- 5,7Mb 
.
Bt              , ,  -
- - endotoxin là

   -endotoxin (Cry toxins), -       