tóm tắt luận án phân lập và tuyển chọn 1 số dòng aspergillus niger sinh pectin methylesterase hoạt tính cao







MSHV: 62030803




ASPERGILLUS NIGER SINH






62 42 01 07







3































- 
- 
- 


M U  TNG QUAN V  
1. 
Vi n, nhu ci enzyme phc v
trong ch bin thc pht ln.  Vi
ng sn xut ch phm enzyme, hc ta vn phi nhp ngoi mt
khi lng ln nhng loi enzyme ng Th Thu  Nguyn Th 
2009b). Pectin methylesterase (PME, EC 3.1.1.11)  mt enzyme thu 
 dng n  nhiu quc gia (Saurel, 2003;
 vn ch s y c
ca t c vu sut  c qu y 
sy rau qu (Van Buren, 1979). V
PME
ng thi v nhm ln trong hiu bit v PME
, vic u h thng s thu nhn PME 
ng dng thc tin ca u kin hin ti ca Vi
v cn thit, c tin cao.
              
(Taragano et al.n bi Patil Dayanand, 2006). My

phi tt c nm mc   sinh enzyme nh  nhng
 t gi ng hp enzyme vi ho
 ng (Nguy        na, h
  PME            
         ;  
Chatanta, 2000 n ph ph
dcm    ng hp PMEc
         
 
 Voragen, 1993).
Vi nhng m PME mang lng nghip thc ph
trng cn chn  Aspergillus niger (A. niger) p
sn xut enzyme, tng hp PME
n chn  A. niger c hiu vi PME n
viu king hp, ng
dng hiu qu trong c ci thin c.
2. 
2.1 Mục tiêu chính
u sinh tng hp ng dng PME t b m
ng rn (SSF)  A. niger c hiu n chn t i
v qu   ng bu Long.

2.2 Mục tiêu cụ thể
(1)  A. niger 
s
PME.
(2)  A. niger 
PME 
(3) PME, 
 

(4) 
2.3 Nội dung nghiên cứu
c thc hin vi 4 n (i) Phn
chn c  A. niger t v qu   tng hp PME
(m; (ii) Phu t 
men b m ng rn sinh tng hp PME t A. niger (m ;
(iii)Phn 3: Tinh s m ca PME thu nhn t 
A. niger c hiu (m; (iv) Phu ng dng ch
phm PME sau tinh s c ci thin cn ph
 i chua (m.
3. 
3.1 Đối tượng nghiên cứu
-  A. niger PME 
-      A. niger  hoa
n Lomonosov -
MGU)  A. niger   
T

- PME 
3.2 Phạm vi nghiên cứu
- d A. niger 
sPME.
- P 

-  

4. 
A. niger, bao
 




Những kết quả có ý nghĩa khoa học
-           
A. niger 
2

Roi (R
1

- PCR 28S- rRNA gene) 
A. niger 

- 
A. niger So
2
A. niger R
1

   

+

2+
.
Những kết quả có ý nghĩa về mặt ứng dụng
- 
A. niger 
A. niger So
2

A. niger R
1
).
- 

- 

- 


5.  
(i) ng hp PME A. niger

c     (Klich, 2002; Schmitz, 2002; Joshi et al., 2006; Hamdy,
2005). (ii)  m     u qu sinh tng hp PME ca hai
 mng rng
PME 5 ln so vi SmF (Nguyen et al., 2010).
(iii) HoPME c khi s dbt
v tru) th 5 li ng hp s d
(Tran et al., 2009).  xut s d php
s ta, v cam, v 
u sinh tng hp PME.
6. 
5 
1:  
    7 trang  27        
- 2 
T 32 6
33 207 6 
 



 
1.1  enzyme pectin methylesterase
1.1.1 Khái quát chung
Pectin methylesterase (PME, EC  
n ng tht C-O c methyl ester  C
6
ca 1 gc GalA
trong homogalacturonan (HG) ca pectin, t    chuy i
 (Gonzalez  Rosso, 2011). PME 
hay  khet al., 2003). PME thu nhn t
nhng ngum  n (pI) ng nhau (Bordenave,
1996). PME th ya D-galacturonan, trong
 PME c sinh tng hp t nm m c bit t   Aspergillus)
ng et al., 1979; Limberg et al.,
2000). Phn ng tip theo c ester rn ng
th   kh  t
hin din c   ng chc.
enzyme polygalacturonase (PG) enzyme pectate lyase (PL) s
hoch polymer ca pectin (Duvetter, 2007).
1.1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến động học PME
  
PME; (ii)  ,
(iii) PME

 PME ; Duvetter, 2007)
1.1.3. Vai trò của pectin và PME đối với sự thay đổi cấu trúc của thực phẩm
nguồn gốc thực vật
n phm ch bin t rau qu  cng ch

sn phm rau mui  vic tin x  
liu  nhi i s b sung dung dch mui CaCl
2
, s 
hot PME na pectin, tu ki
kt vi ion Ca
2+
, ci thin cu. ng hp rau qu cha r
PME nng thi vic tin x  nhi n   
hot s   mong mun, vic b sung PME ngo 
PME  t thc vt hay PME t vi sinh vion Ca
2+
 u kin nhi
c thc hin  PME  t 
thu nhn t A. aculeatus c ng dng trong vic ci
thin c  (Duvetter, 2007). Vic b sung kt hp PME
t nm m
2+
i hiu qu ci thin a
nhiu loi rau qu  (Suutarinen et al., 2000; Suutarinen et al., 2002),
et al., et al., 2004), nh
(Sirijariyawat et al., 2012)  n phm mu
(Bell et al., 1950).
1.2 PME Aspergillus niger 
- A. niger

- , PME
-  A. niger 
PME 
1.3 Aspergillus niger

1.3.1 Giới thiệu chung
Aspergillus niger  bin nht trong chi Aspergillus r
t t n ph nhi
    gii. Hin nay, A. niger c s dng ch y 
nghip sn xut enzyme (    - amylase, glucoamylase, pectinase,
protease, p ch bin thc php sn xut
mt s acid h,et al., 2010).
KA. niger  n
Amastigomycota, n  ,  ,  
Plectomycetidae,  ,  ,  Aspergillus, 
Aspergillus niger (Sumbali, 2005).
1.3.2 Định danh Aspergillus niger
- :   
 et al., 2007; Zhao et al., 2009).
- K: 
Aspergillus p1/D2 
--5,8S rRNA-ITS (Henry et
al., 2000; Hinrikson et al., 2005; Mirhendi et al., 2007; Etienne et al., 2009; Xia
et al., 2009; Nganou et al., 2012). 

(Hinrikson et al., 2005; Mirhendi et al., 2007).
1.4 ng pháp tuy Aspergillus niger 
PME
Vic tuyn chn  A. niger sinh PME ho ti qua 3
bng: (i) Chn lc hii vi pectinase, dng
ng pectin  (ii) Tuyn chn
 A. niger c hiu vi PME b d
agarose 0,5 Khanh et al., 1991) (iii) L
ng CZ, s dng t cm p (Sharma et al., 2011)
1.5 PME  


- 
 ; (ii)  
.
- 
-: L
SmF (Fogarty et al., 1983; Sakai et al.,1993). 

n SSF cho

-  PME SSF
- PME : 
m;  t
l.
1.6 
-

pectinase, cho A. niger 
      Theo Linde et al.    
   A. niger          
A. oryzae. Hannan et al. (2009)   A. niger  , chanh,

   


 50  A. niger  

A. niger
 
A. niger  


Rogaiza Al-Gasgari, 2002; 
; Gupta et al., 2012). 
 A. niger,  

Gupta et al.
 
PDA (McClenny, 2005; Gupta et al.
A. niger 

McClenny, 2005). 
A. niger 
(Mirhendi et al., 2007; Etienne et al., 2009; Sugita & Nishikawa, 2003). Mirhendi
et al. (      -PCR (Random Amplification of
  A. niger A. fumigatus. Trong
et al. (20 A. niger
      gene      
Tarai et al. (2006) A. niger 
 
Sandhu et al. Nganou et al. (2012) 
A. niger 
1
/U
2



tPME  
 


  men sinh PME          
, Patil 
A. niger 
men SSF SmF. Jayani et al. (20
PME. Suresh et al. (2009)
               
A. awamori 
               
(Duvetter, 2007).
U
2.1 ng ti
2.1.1 Địa điểm, thời gian
T 11/2008  9/2012 tm B m Thc phm, Khoa
c ng di hc C 
nghi
2.1.2 Thiết bị, hoá chất
- 

- 

            
A. niger:  
1
/U
2
(Sandhu et al.,    260 bp
 D1/D2 gene 28S rDNA: U
1f
GC (5' - CGC CCG CCG CGC
GCG GCG GGC GGG GCG GGG GTG AAA TTG TTG AAA GGG AA  3';

Sigma); U
2r
(5' - GAC TCC TTG GTC CGT GTT  3'; Sigma); Thang DNA

1000 bp, Thermo Scientific).

2.2 ng pháp nghiên c
2.2.1 Chuẩn bị mẫu
-        A. niger:     
(Malus domestica)(Ziziphus mumularia) 
Q.TP ; (Ficus racemosa) 
  TP  ;    (Citrus maxima)    (Citrus
grandis) (Citrus medica), cam Citrus sinensis), cam
Citrus nobilis var nobilis) (Citrus microcarpa) 
- 
- PME: (i) 
  1 1% (Joshi et al.,


; (ii) 
   50%
).
- : (i) 
(Ananas comosus)  .

  ; (ii)
Cucumis sativus L.) 
 
 

2
-  :  
A. niger 
Nga (k
 
2.2.2 Phương pháp phân tích và đo đạc
i. Phần phân lập và tuyển chọn chủng A. niger đặc hiệu đối với PME
- A. niger: ng PDA, sau 2   nhi 30
n khun l

- m mnh lo
 nhi 25C, cha A. niger theo
i cng k thut PCR gi gene 28 S
u bng phn m nh loA. niger.
-            -  
 
2C (Khairnar et al., 2009).
- Tuyn chn A. niger sinh tng hp PME hoA. niger
            c hi i vi pectin
methylesterase
1. S dng pectin  c nhn
thy bng s a thuc th  c ct (Khanh et al.,
1991).

2. C A. niger 
b    
(Sharma et al., 2011).
- 
t Thanh Mai et al., 2009)

ii. Phương pháp xác định hoạt tính PME
       et al.     

0,01 N.  
 
  C).

- 
- 
- 
iii. Phương pháp phân tích và đo đạc các chỉ tiêu hóa lý

Ch 

 m (%)
Sy  n khi (AOAC 934.06)
Pectin, (% ch
et al., 2005)
 a pectin
 DE, %)
 acid  base (Food Chemical Codex, FCC,
n bi Singthong et al., 2005)
ng protein tng
(mg/mL enzyme)
 dng bovine serum albumin
ng chun, vi ch th 
 
Protein 
-D)
ng khng tng

s (%)
 Eynon, dt kh
oxy c  
ng (Ranganna, 1986)
u ch
ng
 c pH kh

 cng (g lc)
S dng thit b 
i vi m (Fleming et al., 1978)
Mc c
n tht qu bng lu v:
- Lng: 25 kg; T 
- u: 50%
i vi mc c 
c ct mu v:
- Lng: 25 kg; T 
- u bu HDP/BSK
- Kho: 50% (Nguyen et al., 2009)

iv. Phương pháp tính toán, đánh giá hiệu quả tinh sạch sơ bộ chế phẩm PME
kỹ thuật


    PAGE (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide


2PME



PME, Y%
(Ngo et al., 2008)
1
(%) 100
0
TA
Y
TA




(Ngo et al., 2008)
protein
A
S
C



(Ngo et al., 2008)
0
1
S
S
P 

PME 


PAGE 
 2009a)
3.2.3 Phương pháp phân tích và xử lý số liệu
  


Centurion 16.1.
S dng phn m ng di truyn gi
. T
m

max
Prism 5.0 x
SAS 9.0.
3.3 
4 2.2.


1

0:



C
protein

TA
0


TA
1
 


 A. NIGER 
PME  
 A. niger 


  

  sinh PME 

  sinh PME 

 A. niger PME 


PME (10 
A. niger 


PME

PME 


PME


 PME

PME (6 

PME  

PME A. niger

2



PME A. NIGER 
 
 
PME  PME 
(2   
2.2 

KT QU THO LUN
3.1 A. niger 

3.1.1 Phân lập và xác định đặc điểm hình thái các dòng nấm có đặc tính giống
A. niger trên các loại quả giàu pectin
-  Aspergillus
 
 
.   sau 24
, sau 48    
. 


 
Sa
1
, Sa
2
, Sa
3
), 4  So
1
So
4
), 6  
M
1
M
6
), 4  H
1
H
4
), 5   (X
1

X
5
), 3   NRoi (R
1
, R
2

, R
3
), 5  G
1

G
5
), 3  
1
, N
2
, N
3
), 8  RD
1

RD
8
), 8  GA
1
 GA
8
), 6  T
1
T
6

 S
1
 S

5
). 
3.1.


3.1 
Tiy truy nm m
i th  th (Klich, 2002).
-  
(i) 

3.2 S
2
G
1


() 
2
(MEA)

3


3



 G
1

 S
2

 H
4



   Aspergillus
niger  
 A. niger (Klich, 2002)
 

3.hai
 
2
 G
1

2


(ii) : 
 A. niger. 

2500  
nh. 






elip. 

hai 


3.3).

3.3: 
  So
2

3.1.2 Tuyển chọn dòng nấm mốc đặc hiệu đối với PME
-  
T 60  nm m i chng, tuyn chc 14
 cho ho    t, th hin    
i pectin t 20 mm, xp theo th t n (bng 3.1). Mi chng
R92 thu
    i chng V p t t thu



Bng 3.1: Kt qu th i pectin (D) c
 nm mc thuc hiu cao vi pectinase
Dm mc
D (mm)
Dm mc
D (mm)

G
2

20,00
ab

X
3

21,83
cd

H
4

20,00
ab

GA
2

22,00
cde

GA
1

20,25
ab


R92
22,25
def

T
2

20,59
abc
7
Sa
3

22,33
def

Sa
2

21,17
abcd

T
1

23,38
efg

G
4

21,50
abcd

N
1

23,67
fg

RD
4

21,75
bcd

So
2

24,33
gh



R
1

25,58
h


Các giá trị có mẫu tự đi kèm giống nhau ở cùng một cột khác biệt không ý nghĩa về mặt thống kê theo phép
thử Duncan ở độ tin cậy 95%
Kt qu  ng cao vu c trong
  c (       , 2005; Patil 
Chaudhari, 2010; Sharma et al., 2011). V t trong nhng ngu
ln chn  nm mc c hiu cho kh ng hp PME cao
(vi 3/14 y, 14  nm mi pectin
t 20 i  A. niger i chc tuyn chn cho kh
chn la  nm mc c hii vng hp PME.
-  PME 
ng ca  nm mn hiu qu sinh tng hp PME nh
d t v i pectin ng pectin
 agarose  ng. Kt qu c
tng hp  bng 3.2.
3.2
 
 
(mm)

G
2

10,95
ab

5,43
ab

H
4

11,43
bcd

5,53
bc
0
GA
1
11,77
d

5,52
bc

T
2
11,43
bcd


5,48
abc

Sa
2
11,80
d

6,00

cd

G
4

10,46
a

4,94
a

RD
4
11,37
bcd

5,30
ab

X
3
11,87
d

6,03
cd

GA
2
11,60

cd

5,44
ab

R92 (Nga)
10,97
abc

5,30
ab

Sa
3
11,73
d

6,03
cd

T
1
13,17
e

6,59
ef

N
1

13,10
e

6,34
de

So
2
14,87
f

7,50
g

R
1
14,47
f

7,00
fg

Các giá trị có mẫu tự đi kèm giống nhau ở cùng một cột khác biệt không ý nghĩa về mặt thống kê theo phép
thử Duncan ở độ tin cậy 95%
Dt qu  bng 3.2, 4  c hiu cao v 
sinh tng hp PME tt, c th  T
1
(php t 
1
p t v

qu 
2
p t v qu 
1
p t v qu
i ).
Tip tu kh nh tranh khi kt hp tng cp ca 4  nm
mc hii vi PME ( T
1
, N
1
, So
2
, R
1
)  cho vic
chn ra t l kt hp gia hai  nm m 
nhn PME t hiu qu cao nht. Kt qu  n ca nm m
s ng pectin  agarose
cho thy, vic kt hp hai  nm mhop (T
1

1
) hay
So
2
, R
1
i dng tng

3.4a minh ha s kt hp c
2

1
), trong khi s kt hp
ca mg mu (T
1

1
; N
1

1
; N
1

2
, T
1

2
)
u t3.4b).


3
v- agarose
Kt qu c s 
PME thu nhn  c kt hp cho thy,  t l kt hp hai  nm
m : 1, vic kt hp hai  

1

1
vi hai 
 (T
1
So
2
, T
1
R
1
hay N
1
So
2

1
R
1
u qu trong
vic ci thin hot
u  mng i  T
1

1
    kt hp ca hai d  ng nhau
(T
1
N

1

1
So
2
u cho hiu qu ci thin t(s lic th hin 
S kt hp ca hai  R
1

2
cho hiu qu thu nhn t tri
so vm thi (ho 7,61


6,92  ng v
 14,76 1 18 55  
1,01 mm). Dt qu kh nm mp t v qu
cam s
2
 qu i  (R
1
c la ch u t l
kt hp ca hai  ng hp PME, kt qu c tng
hp  bng 3.3. t qu kh l kt hp ca R
1
: So
2
 : 1
c s du tu kin sinh tng hp PME vi vic
u khi

3.3 R
1

2


T l kt hp R
1

2

i (mm)
Honh PME (U/mL)
1: 1
16,10
bc

8,05
b

1: 2
16,27
c

8,12
b

1: 3
15,13

ab

7,52
a

1: 4
14,90
a


7,42
a

4: 1
14,43
a

7,15
a

3: 1
14,77
a

7,35
a

2: 1
15,23
abc


7,42
a

Các giá trị có mẫu tự đi kèm giống nhau ở cùng một cột khác biệt không ý nghĩa về mặt thống theo phép thử
Duncan ở độ tin cậy 95%
3.1.3 Bước đầu định danh một số dòng A. niger đã phân lập bằng kỹ thuật sinh
học phân tử
Tin dim vi ng vi A. niger 
ng hp PME hoKt qu cho
thy, u  l ng di truyn vi A. niger, c th:
-  T
1
 l ng i A. niger 
-  R
1
 l i A. niger 
-  So
2
 l i A. niger 
-  N
1
 l 100% vi A. niger 

 : Aspergillus niger T
1
, N
1
, R
1

So
2
.  A. niger
So
2

1

men SSF sinh t
3.2 
3.2.1 Xác định thành phần cơ bản của cơ chất lên men
c bi DE, %) ca
ba ngu ph php sn 
ta, v qu    qu i  nh, t  cho vic
u  sinh tng hp PME tip theo. Kt qu c tng
hp  bng 3.4.
3.4
u
 m (%)
Pectin (%cbk)
 DE* (%)
ng (%)
Protein (%)






V qu 






V qu i
75,61 




* Độ DE được xác định trên mẫu khô có độ ẩm 4 ± 1%
T kt qu c  bng 3.4  nhn th
   trong khi pectin thu nhn t v qu i   DE cao
(84,77%), cho thy trin vng ca vic s dt cho
ng hp PME t nm mc A. niger. Mt v c
ng protein trong v qu 
 i t l protein t

cn thit cho hong ca nm mc. Kt qu n s kt hp ca
 qu citrus nhm ci thi
3.2.2 Ảnh hưởng của thành phần môi trường đến quá trình sinh tổng hợp PME
S   cht, ngun dinh
ng b sung n hiu qu c kh
t qu t  ng 3.5, 3.6, 33.8 vi
 t ct biu th s   tin
cy 95%, kt qu m th hin hot so vi.
3.5PME 
Ngut
T l kt hp

Ho

10:0
4,83
b
 0,29
V qu cam
10:0
1,20
a

V qu i
10:0
1,90
a

 qu cam
8:2
6,63
c


7:3
9,80
g


6:4
8,74
f



5:5
7,77
de
 0,62

4:6
7,13
cd

 qu i
8:2
8,85
f


7:3
10,34
gh


6:4
11,14
h


5:5
13,17
i



4:6
8,29
ef


3.6
 A. niger
Lo
N (%)
Ho
i chng
0%
12,87
c



KCl
0,5%
12,08
ab


1,0%
13,83
cd


1,5%
16,87
g


2,0%
2,87
a




MgCl
2
0,25%
4,05
b


0,5%
16,55
g


0,75%
15,47
f


1,0%

13,72
cd




CaCl
2
0,5%
14,06
de


1,0%
14,90
ef


1,5%
16,90
f


2,0%
15,23
f


3.7 
 A. niger

c kt hp c
Ho,U/g
M ci thin hot t,ln
i chng
12,78
a

1
KCl 1,5% + MgCl
2
0,5%
20,16
b

1,58
KCl 1,5% + CaCl
2
1,5%
19,44
b

1,52
MgCl
2
0,5% + CaCl
2
1,5%
21,55
c


1,69
KCl 1,5% + MgCl
2
0,5% + CaCl
2
1,5%
19,14
b

1,50

3.8PME 
A. niger
Ngun nitrogen b sung
T l b sung
HoPME (U/g)
i chng
0
21,55
a

Urea
0,05%
25,66
c

0,10%
27,87
d


0,15%
25,82
c

0,20%
23,46
b

(NH
4
)
2
SO
4
0,05%
23,16
b

0,10%
25,27
c
 0,21
0,15%
26,14
c

0,20%
25,93
c


NH
4
H
2
PO
4

0,05%
21,65
a

0,10%
23,59
b

0,15%
25,79
c
0
0,20%
23,33
b


PME  
n c
,  - 
A. niger 
(Bayoumi et al., 2008)v



2
; 1,5% CaCl
2

 A. niger 
PME 27,87

 
3.2.3 Tác động của một số điều kiện lên men đến hiệu quả thu nhận PME


 u cn  hai yu t ng ln n
kh ng hp enzyme t vi sinh vt (Tewari et al., 2005). Tuy
u chnh  i  n hiu qu
thu nhn PME. Dnghim nh
ng ca viu chu cn pH 4,0 (Joshi
et al., 2006) bng 3 loi dung dch m citrate, citrate phosphate,
acetate) n hoc thc hin, kt qu tng hp  bng 3.9.
g 3.9
A. niger
Dung dm pH 4,0 s dng
HoPME (U/g)
m citrate
41,17
c

m citrate phosphate
34,10
b


m acetate
32,44
b

c ct u chnh pH 4,0)
28,25
a

i chc ct pH 6,7 )
27,85
a

Các giá trị có mẫu tự đi kèm giống nhau trong cùng một cột khác biệt không ý nghĩa về mặt thống kê theo
phép thử Duncan ở độ tin cậy 95%.

Kt qu khy, vic s dng dung d u ch
 n ch s bi u c
men (Doelle et al., 1992), ho
khi sng hp s dc ct. Hoc cao nht
ng hp s d u ch u c

(ii) PME 

Hoa enzyme ph thuc rt l n ca t m m
thy hay thm thu nhn ch pht trong nhng
 quan trng quynh hoa enzyme cao hay thp. Kt qu thu
c   cho thy, hoa PME n khi thi gian 
n 96 gi, sau mc th, ng ca nm mc
gim d sinh tng hp enzyme gim. S n

 pH ca dgim dn,  i gian c bit
n 0  120 gi  u gim mnh sau
48 gi  (bng 3.10 hic t ng ca nm m
tng hp PME.
15,21c
0,36a
0a
12,80c
22,88d
41,16e
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
0 24 48 72 96 120
Thời gian ủ (giờ)
Hoạt tính PME (U/g)

 3.5 A. niger

3.10:  theo 
Thi gian  (gi)
Pectin (%)

DE (%)
pH d
 m (%)
0
17,69
e

74,82
e

4,16
d

60,07
a

24
12,26
d

74,38
de

3,86
c

64,29
b

48

5,61
c

73,58
d

3,28
b

65,15
b

72
3,78
bc

70,46
c

2,96
a

68,54
c

96
1,67
ab

57,63

b

2,93
a

69,30
c

120
0
a

55,33
a

2,86
a

69,51
c

Các giá trị có mẫu tự đi kèm giống nhau trong cùng một cột khác biệt không ý nghĩa về mặt thống kê theo
phép thử Duncan ở độ tin cậy 95%.
T  kt qu thu thp, th c gii hn cho vic
sinh tng hp PME  cao nht.

3.2.4 Sự tương tác giữa pH, độ ẩm ban đầu của môi trường, tỷ lệ huyền phù bào
tử nấm và nhiệt độ ủ đến quá trình sinh tổng hợp PME từ A. niger
Du sinh tng hp PME t  A. niger 
ngu s d et al., 2009; Joshi et al.,

ng hp pectinase t A. awamori (Suresh et al., 2009),
t l huy nm s dng, viu ch m u ca 
   ng l
Trong khnh ha 4
, bao gm t l huy nm s dng X
1
(12  20% v/w), pH ban
u cng X
2
  X
3
 m u
ng X
4
n ho PME thu nhn (Y, U/g) c thc hin.
Ma trn thit k  mng (RSM) v
phc hp t(CCD) c thit lp vi 5 m khng mi bin
 7 .
Dt qu i quy th hin s 
cu kin hoc thit l d
d u qu sinh tng hp PME. Hot)
nh bn v th3.1) sau:
Y = -3331,94 + 66,60 X
1
+ 323,06 X
2
+ 73,38 X
3
+ 31,34 X
4

- 1,68 X
1
2
-
3,12X
1
X
2
+ 0,36X
1
X
3
- 0,20X
1
X
4
- 48,31X
2
2
+ 1,10X
2
X
3
+ 1,31X
2
X
4
- 1,03X
3
2

-
0,18X
3
X
4
- 0,23X
4
2
(R
2
= 0,989) (3.1)

Kt qu  3.1) cho thy,  khu ng n
 mng SSF sinh tng hp PME t A. niger. H
s tng quan R
2
= 0,989 cho bit 98,9% s bin i honh
hng cn c lp X1, X2, X3 4  1 % s thay 
yu t nh  Ba  th biu dia
 kh  i   n ho
thu nhc th hin  3.6, 3.7 3.8 y, tt c  kho
ng thn hoa PME thu nhn.



3.6: T
 
 

(cố định độ ẩm và pH ban đầu

của môi trường là 60% và 4,0)
3.7: T



(cố định tỷ lệ huyền phù bào tử
nấm 16% và độ ẩm 60%)
3.8: T


A. niger
(cố định tỷ lệ huyền phù bào tử
nấm 16% và pH ban đầu 4,0)
3.1) , iu kin ti

u  t c hot (98,9%) nh sau: 
 A. niger (10
5
; ; 
4,0  . 

A. niger So
2

1



3.2.5. Ảnh hưởng của điều kiện ly trích đến hiệu quả thu nhận PME sau quá trình
lên men SSF

Du ng ca viu chu cng
  n   ng hp PME, dung d c s d
. u t n hiu qu 
men, bao gm pH ca dung dm citrate s dng, t l dung d
, nhi c kht qu
c th hin  bng 3.11, 3.12 3.9.
3.11ly
 ME
 pH ca dung
d
Ho
(U/g)
3,2
42,86
d

3,6
66,71
f

4,0
64,14
e

4,4
30,43
c

4,8
29,14

bc

5,2
16,87
ab

5,6
14,57
a

c ct (pH 
30,57
d

Các giá trị có mẫu tự đi kèm giống nhau trong cùng
một cột khác biệt không ý nghĩa về mặt thống kê theo
phép thử Duncan ở độ tin cậy 95%.
 3.12: 


T l dung dm
ng (v/w)
Ho
tng (U)
1 : 1
179,80
a

1,5 : 1
289,96

d

2 : 1
417,12
e

2,5 : 1
415,31
e

3 : 1
278,95
c
 6,79
3,5 : 1
200,07
b

Các giá trị có mẫu tự đi kèm giống nhau trong
cùng một cột khác biệt không ý nghĩa về mặt
thống kê theo phép thử Duncan ở độ tin cậy 95%.
V       
       

        

       
     
         
    

      
       

 
(Ghildyal et al., 1991).  
                 canh
9


  
. 

Ngo
 
  

3.2.6 Ảnh hưởng của nhiệt độ bảo quản đến độ ổn định của dịch trích PME thô
c s d u s nh ho
c u kin bo qun lnh (4tr -18C).
Kt qu kh i hoa PME theo thi gian bo quc th
hin  bng 3.13 cho thc bo qun  u kin nhit
  i ho 
ci gian nh ho u kin nhi 
vic bo qun PME cc ti ng
hn 11 
3.13
o
 
u kin bo qun
Thi gian bo qu

A/A
o

L
0
1,00
c
3
1
1,63
d

2
0,29
b

3
0,16
b

4
0
a


L-
0
1,00
a
3

1
1,39
a

3
1,34
a

5
3,03
c

7
2,22
b

9
2,53
b

11
2,12
b
0,29
13
1,31
a

Các giá trị có mẫu tự đi kèm giống nhau trong cùng một cột , tương ứng với từng nhóm nhiệt độ khảo sát
biểu thị sự khác biệt không ý nghĩa về mặt thống kê theo phép thử Duncan ở độ tin cậy 95%.

A/A
0
: mức độ thay đổi hoạt tính PME so với mẫu đối chứng.
3.3 PME A. niger So
2
R
1
3.3.1 Tinh sạch sơ bộ PME bằng phương pháp kết tủa kết hợp lọc màng
Hiu qu kt ta PME c t l p nht ca
tng loc th bng 3.14.
Dt qu tng hp  bng 3.14 cho thy vic s dng ethanol vi t l 3: 1
u kip nht t tinh sch
gn 8 ln, hong h10,0U/mg
protein
.
Mc kt tng ethanol (t l i
trong dung dm   th khong
 u 150 rpm.

3.14

kt ta
T l

Ho
(U/mg
protein
)
Hiu sut
thu hi (%)

 tinh
sch (ln)
i chng

1,26
a

100
d

1,00
a

(NH
4
)
2
SO
4



6,87
c


62,23
b


5,45
c


NaCl


8,37
d


92,60
c


6,67
d


Ethanol
3 : 1 (v/v)

10,02
e


91,48
c


7,98
e


Aceton
1,5 : 1 (v/v)

4,40
b


33,54
a


3,47
b


Các giá trị có mẫu tự đi kèm giống nhau trong cùng một cột biểu thị sự khác biệt không ý nghĩa về mặt
thống kê theo phép thử Duncan ở độ tin cậy 95%
Kt qu y, ch phm PME k
thu
 1   U/mg
protein
. Ti  y
n di PME sau khi l  m khng
nh hiu qu tinh snh khi
   c   c. T kt
qu     PAGE  3.10)

cho thy, PME t A. niger 
t khop vu
 vi sinh vt. Do m
tinh sch enzyme sau l   p,
 vinh pI c
c ti y, vic kho
u t n hozyme
PME t A. niger v
cho vic s d
3.3.2 Một số đặc điểm của chế phẩm PME kỹ thuật từ A. niger So
2
và R
1




.

0 2 4 6 8 10
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18

V
max
= 17,69 mol.min
-1
.mg
-1
protein
K
m
= 0,6014 mg/mL
pectin
Pectin (mg/mL pectin)
PME (

mol.min
-1
.mg
-1
protein
)

3.11 3.12
PME A. niger 
T kt qu m cho thy, ho t
 n 4 g/L,  ng  
hoPME t A. niger h i.
0: Thang chuẩn
1: Enzyme thô sau trích ly, siêu lọc 0,2

m

2: PME sau quá trình kết tủa ethanol, lọc màng
50 kDa
3.10
SDSPME