THIẾT KẾ MỒI PCR VÀ XÂY DỰNG VECTOR BIỂU HIỆN GEN SINH ENZYME β-LACTAMASE Ở TẾ BÀO VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS.

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI
THIẾT KẾ MỒI PCR VÀ XÂY DỰNG VECTOR BIỂU HIỆN GEN
SINH ENZYME β-LACTAMASE Ở TẾ BÀO VI KHUẨN
BACILLUS SUBTILIS.
GVHD: TS.LÊ QUANG HÒA
SVTH : Nguyễn Thị Diệp 20112848
Trần Thị Linh 20113543
Bùi Trung Hiếu 20112988
Mục lục
I. Tổng quan
II. Thiết kế mồi PCR
III. Xây dựng vector biểu hiện
Tài liệu tham khảo
I. Tổng quan
β-lactamase
-β-lactamase là một enzyme được một số vi
khuẩn sinh ra để kháng các kháng sinh thuộc họ
β-lactam.
-
Một số chủng có khả năng sinh β-lactamase
đã được phát hiện: E.cloacae, S.marcescens,
P.aeruginosa, B.subtilis,….
-
Protein cấu trúc β-lactamase ít có biến đổi sau
dịch mã : không glucosyl hóa.
I. Tổng quan
Nguồn gen
-Vi khuẩn B.subtilis BEST7003 phân lập từ đất
-Vị trí gen: nucleotide thứ 2014727-2015647
II.Thiết kế mồi PCR
Xác định trình tự gen đích

Xác định trình tự gen mã hóa protein enzyme
Kiểm tra lại trình tự gen
Kiểm tra lại trình tự gen
Thiết kế mồi
Thiết kế mồi
Kiểm tra sự bắt cặp của mồi với genome
Kiểm tra sự bắt cặp của mồi với genome
Kiểm tra primer-dimers
III. Xây dựng vector biểu hiện

Vector chọn là pET-32a

Hệ thống biểu hiện: vi khuẩn Escherichia Coli BL 21
Ưu điểm: tốc độ sinh trưởng nhanh, khả năng biểu hiện protein tái tổ hợp
mạnh, chỉ sau 8h nuôi cấy ở điều kiện thích hợp đã có sản phẩm protein tái tổ
hợp ( 50mg/l đến 500mg/l ).
Các đặc điểm di truyền được biết tương đối đầy đủ, tạo thuận lợi cho biểu
hiện protein tái tổ hợp.
E.coli ít sinh enzyme protease, sự tạo thành thể vùi thuận lợi cho tinh sạch

Vector sử dụng
Kiểm tra enzyme không cắt trình tự gen đích
Kiểm tra enzyme không cắt trình tự gen đích
Kiểm tra enzyme không cắt trình tự gen đích
Trình tự gen đầu vào

GATATC


ATGAAGTTGAAAACTAAAGCGTCAATAAAATTCGGAATATGTGTTGGGCTTTTATGTTTAAGCATTACTG

GTTTCACACCTTTTTTCAACTCAACACATGCCGAAGCAAAATCCATAGAAGACACAAACATGGCAAGCTG

TATAACGAATAAAAAATTTGTTCAACTTGAGAAAAAATTTGATGCCAGGCTTGGTGTTTATGCAATTGAT

ATAGGTTCAAACAAGACAATCGCCTATCGGCCGAATGAACGATTTGCTTACGCATCAACCTATAAAGTTC

TAGCCGCAGCTGCTGTCCTGAAGAAAAACTCAATTGAAAAACTTAATGAAGTCATCCACTACAGCAAGGA

CGATCTTGTTACATATTCTCCAATCACAGAGAAACACCTAGATACAGGCATGAGCCTAAAAGAAATCTCG

GAAGCGGCTATCCGTTACAGCGATAATACCGCTGGGAACATCTTGTTGCAACAGCTTGGCGGCCCTAAAG

GTTTTGAAAAGTCACTGAAACAGATTGGGGATCATGTAACGAAAGCTAAACGATTCGAGACGGATCTAAA

CTCTGCGATTCCTGGTGATATTCGTGACACCAGCACCGCAAAAGCACTGGCAACCGATCTTAAAGCCTTC

ACTTTAGATAACACTCTCACGACTGACAAACGCATGATCTTAACCGATTGGATGCGAGGCAATGCTACTG

GTGACGAACTGATTCGGGCAGGCGCTCCAATAGGATGGGAAGTCGGCGATAAATCCGGAGCCGGAAGTA

CGGGACACGAAACGACATTGCTATCGTTTGGCCGCCAAACAGAGCTCCTATTGTTGTGGCAATTCTGTCA

AACCGCTTTACGAAAGATGCTAATTATGATAATGCTCTTATCGCTGAGGCTGCAAAAGTCGTCCTTAACG

ATCTCAAATAA

CTCGAG

Tính lại mồi