Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất thu sản phẩm magnesi lactat từ lactobacillus acidophilus

B Y T
I HC HÀ NI



LÊ TH HÀ

NGHIÊN CU MT S YU T NH
N HIU SUT THU SN
PHM MAGNESI LACTAT T
Lactobacillus acidophilus

KHÓA LUN TT NGHI



HÀ NI  2015

B Y T
I HC HÀ NI



LÊ TH HÀ


NGHIÊN CU MT S YU T NH
N HIU SUT THU SN
PHM MAGNESI LACTAT T
Lactobacillus acidophilus

KHÓA LUN TT NGHI
ng dn:

2. DS. Nguyn Minh Ngc
c hin:
BM. Công nghic


HÀ NI  2015

LI C
Vi tt c s kính trng và lòng bic, em xin chân thành gi li
cn cô giáo   và DS. Nguyn Minh Ngc, nhng
i c ting d em trong sut quá trình hc tp
và nghiên cu khoa hc.
i li ci thy TS. Nguyi, thy
DS. Lê Ngc Khánh, thy ThS. Nguyn Khc Tip cùng toàn th thy cô giáo và
các anh ch k thut viên b môn Công Nghing d
và tu kin thun li cho em trong sut quá trình làm khóa lun.
Do thi gian làm thc nghin thc ca bn thân còn có hn,
khóa lun này còn có nhiu thiu sót. Em rt mong nhc nhng ý ki
góp ca thy cô và các b có th hoàn thiu ca mình.
Em xin chân thành c
Hà N
Sinh viên


Lê Th Hà

MC LC
T V 1
NG QUAN 3
1.1. Magnesi lactat 3
1.1.1. m [35] 3
1.1.2. Công dng 3
1.1.3. Mt s sn ph ng 5
1.2. n xut Magnesi lactat 5
1.2.1. ng hp hóa hc 5
1.2.2. t 6
1.3. Vi khun sinh acid lactic 7
1.3.1. m nhóm vi khun sinh acid lactic 7
1.3.2. Chi Lactobacillus 7
1.3.3. Loài Lactobacillus acidophilus 8
1.4. Các nghiên c 10
T LIU 12
2.1. Nguyên vt liu, thit b 12
2.1.1. Nguyên vt liu 12
2.1.2. Thit b s dng 14
2.2. Ni dung nghiên cu 15

2.2.1. Nghiên cu ng cu kin kt tinh thu sn phm 15
2.2.3. Kho sát nh hng c  ng nuôi c n hiu sut sn
phm Magnesi lactat 15
2.3. u 15

2.3.1. ng và nuôi cy 15
2.3.1.1. ng 15
2.3.1.2. ng hp Magnesi lactat 15
2.3.2.  dch lên men 16
2.3.3. nh cu trúc Magnesi lactat 16
2.3.5.  nh m t bào vi sinh vt. 17
2.3.6. ng Magnesi lactat theo ion Magnesi 18
2.3.7. u sut tiêu th ng ca vi khun 18
2.3.8.  18
C NGHIM, KT QU VÀ BÀN LUN 19
3.1. Kho sát ng ca mt s yu t n hiu sut thu tinh th Magnesi
lactat. 19
3.1.1. ng cn hiu sut thu sn phm. . 19
3.1.2. ng ca nhi kn hiu sut thu sn phm. 22
3.1.3. ng ca thi gian kn hiu sut thu sn phm. 23
3.2. Kim nghim sn phm theo tiêu chun Anh (BP 2010) 27
3.3. Kho sát các yu t cng lên men n hiu sut
thu sn phm Magnesi lactat 28
3.3.1. Kho sát nh hng cng nuôi cn hiu sut thu
sn phm 28
3.3.2. Kho sát ng ca các ngun hydratcacbon ti quá trình lên
men 30
3.3.3. Kho sát  ng ca n  glucose ti hiu sut sinh sn
phm 32
KT LU XUT 36

DANH MC CÁC CH VIT TT
ATCC Trung tâm gi ging quc gia M
(American Type Culture Collection)
BP Bristish Pharmacopoeia
 n Vit Nam IV
EP European Pharmacopoeia
h Gi
1
H-NMR
Ph cng t ht nhân proton
(
1
H - Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy)
IR Ph hng ngoi (Infrared Radiation)
kl Khng
MRS ng nuôi cy vi khun (de Man, Rogosa, Sharpe)
L.acidophilus Lactobacillus acidophilus ATCC 4356
MS
Ph khng (Mass spectrometry)
OD M quang (Optical density)
tt Th tích
USP United States Pharmacopoeia
PLA Polylactid

DANH MC CÁC BNG
1.1. Mt sng .5
Bng 2.1. Các nguyên liu và hóa cht12
ng nhân ging13
ng lên men 13
Bng MRS lng13
Bng 2.5. Các thit b s dng 14
Bng 3.1. Bng kt qu u kin k20
Bng 3.2. Bng kt qu so sánh các thí nghim  nhi 22
Bng 3.3. Bng kt qu so sánh các thí nghim  th24
Bng 3.4. Kt qu phân tích ph hng ngoi ca sn phm25
Bng 3.5. Kt qu phân tích ph khng ca sn phm25
Bng 3.6. Kt qu phân tích ph cng t ca sn phm  26
Bng 3.7. Kt qu kim nghi 27
Bng 3.8. Hiu sut thu Magnesi lactat khi lên men  các pH khác nhau29
Bng 3.9. Hiu sut thu Magnesi lactat khi lên men dùng các loi hydratcacbon
khác nhau 31
Bng 3.10. Kt qu lên men lactic vi các n glucose khác nhau 33

DANH MC CÁC HÌNH
Hình 1.1. Cu trúc không gian ca Magnesi (L-) lactat
Hình 1.2. L. acidophilus i kính hin vi quang hc
Hình 1.3. L. acidophilus i kính hin t
Hình 3.1. Hình dng tinh th  các thí nghim
Hình 3.2. OD
600
ca dch nuôi cy L.acidophilus sau 24 gi tng nuôi
cy có pH khác nhau
Hình 3.3. Bi so sánh hiu sut to Magnesi lactat  các pH khác nhau
Hình 3.4. Bi  so sánh hiu sut sinh Magnesi lactat khi s dng các ngun
hydratcacbon khác nhau
Hình 3.5. Bi so sánh hiu sut to Magnesi lactat  các n ng

1

T V
Trong thi công ngh sinh hc lên ngôi, các sn phm lên men t vi sinh vt
c ng dng ph bic ci sc bit là
c phm vu th giu thuc v các
thuc sinh hc. Trong các sn phm ca công ngh lên men vi sinh vt, acid lactic
và mui lactat là nhng sn phi t rt sm và ng dng rng rãi, vì th

Lactobacillus acidophilus, mi din hình ca nhóm vi sinh vt sinh lactic
c quan tâm nghiên cu nhiu [2], [9]. Tuy nhiên  c ta hin nay, loi mui
c nghiên cu tng hp ch yu mi ch dng  dng mu  
n mt dn cht khác ca acid lactic có tính ng dng cao, li ích kinh t
ln mà quy trình sn xun, hiu sut cao và tinh khit là mui Magnesi
lactat.
Magnesi là mt trong bn khoáng cht ph bin cn thit cho s phát trin ca
 i [36], [57], [60], [66]. Thiu Magnesi có th d n nh  i
nghiêm trng [28], [40], [54], [68]. Hin nay vic cung cp Magnesi t th 
hng ngày  gim nhiu [31], [58], [61]. T các loc góp
phn ci thing Magnesi,  vic hp thu Magnesi s b hn ch khi 
suy yu [23],[45]. Hiu qu ca các dng thuc còn ph thuc nhiu vào sinh kh
dng ca dng mui và bào ch cha Magnesi [19], [50]. Các mui Magnesi 
có sinh kh dng thng mui Magnesi h [29], [46], [56], mui
Magnesi lactat sinh kh dng cao (41%) [52]. Ngoài tác dng cha bnh, Magnesi
lactat còn là nguyên liu sn xut calci lactat, acid lactic, polylactid (PLA, nha
sinh hc) là nhng sn phm thông dng không ch s dc mà
còn trong các ngành công nghip thc phm, công ngh cht
do [27], [47]. Bi tính ng dng cao ca Magnesi lactat và tip ni nghiên cu
c, chúng tôi la ch tài:
Kho sát mt s yu t n hiu sut thu sn phm Magnesi
lactat t Lactobacillus acidophilus
2

Vi nhng mc tiêu sau:
- nh cu trúc Magnesi u ch bng
hp s dng chng ging Lactobacillus acidophilus và la chu kin
kt tinh sn pht tiêu chun Anh 2010.
- La chc mt s thông s ng nuôi c nâng cao hiu
sut thu sn phm Magnesi lactat.

3

NG QUAN
1.1. Magnesi lactat
1.1.1. m [35]
 Công thc tng quát: C
6
H
10
MgO
6
.
 Tên khoa hc (theo IUPAC): Magnesi 2  hydroxyl propanoate.
 Thành phn: C 35,60%, H 4,98%, Mg 12,01%, O 47,42%.
 Khng phân t: 202,45g/mol.
 Công thc cu to: gm cation Mg
2+
và 2 anion lactat.



Magnesi lactat là mui kt tinh ca acid lactic vi ion Mg
2+
, tn ti trong t
nhiên dng dihydrat (C
6
H
10

MgO
6
.2H
2
O) và trihydrat (C
6
H
10
MgO
6
.3H
2
O).
Cu trúc không gian
Hình 1.1. Cu trúc không gian ca Magnesi (L-) lactat
 Tính cht: Magnesi lactat tn ti dng kt tinh màu trng, không mùi, v cay
c lnh, tan tc nóng (1g bt tan trong c
l 96
0
.
1.1.2. Công dng
Magnesi c s dng trong nhic:
 Trong Y hc:
-  i ln chn 30g Magnesic c
nh     mô mm, 1% trong huy . Magnesi là cation
nhiu th hai trong ni bào, tham d vào các chuyn hóa glucid, lipid, protid
4

ca ni bào, cân bng kim toan, oxy hóa kh
trnh bi nhng ri lon do thiu hng lên quá

ng, gi giúp calci và phospho c nh trên
 [11], [62].
- Magnesi c kê cho ph n có thai dùng mt cách có h th
u tr  cung trong thai k [25].
- Magnesi lactat là tác nhân bo v tim mc s dng trong bnh vin
nhiu nht trong các khoa cp cu bnh nhi máu.[12], [16], [48].
- Magnesi ng trong hong chng li các hin
tc kt hp vi lão hóa [15], [65].
- Magnesi   n thit cho quá trình phát trin và ho ng bình
ng ca t chc bin chuyn hóa [67] và các hong
ca não [63], [64], làm gimc ting typ II,
t áp và tim mch [71].
 Trong công ngh thc phm:
- Magnesi lactat là mt ph gia thc ph u v và x lý bt.
- Magnesi ng có trong các sn phm b 
cht b  ung [20], [27].
 c:
- Magnesi c s du vu chnh pH.
- c trong dp viên: Magnesi lactat sn xut by
phun có nhi nóng ch bi y cao, góc ngh thp,
có t l gii th ci thin nên rt phù hp vi mc s dng
c dc trong sn phm m phm: sn ph
ng [47].
 Trong công nghip:
- Magnesi lactat là tin sn phm trong công nghip lên men sn xut acid
lactic, các mui lactat khác, tiêu bilci lactat. Acid lactic và các dn xut
5

cc dùng rng rãi trong công nghic phm, thc phm, công nghip
dt, tng hp vecni, cht do, nha gia công bng nhit.

- Magnesi c s d ch to các linh kin t, thit b k
thut (máy tính xách tay, máy tính bng [47]
1.1.3. Mt s sn ph hành trên th ng
t sng
STT



1
Maglek B6

Magnesi lactat,
Pyridoxin

Lek-AM, Poland Lek-AM,
Ba Lan
3
Magne B6 Stada
Stada-VN JV, Vietnam
Stada-VN JV, Vit Nam
4
Magne - B6 Corbière
Mekophar, Vit Nam
5
Magnelis B6
Pharmstandard, Liên bang
Nga
6
Magvit
GlaxoSmithKline, Ba Lan

7
Amfamag B6
Ampharco USA, Vit Nam
8
New - Mag
Whan, Hàn Quc
9
Magne-B6 Boston
Boston Pharma, Vit Nam
10
Magnerot
Magnesi lactat,
Acid orotic
Wörwag Pharma, Nga
11
Magnesium recip
Magnesi lactat,
Magnesi citrat

Recip, Thn
12
Magnesium
NYCOMED, Romania
13
Oromag
Theramex, Tunisia
14
Magnegon
Takeda Pharma, Th
15

Wamag
Magnesi lactat, hn
hp mui calci
Hasco, Ba Lan

16
Magnesium
Glycocolle Lafarge
Magnesi lactat và
glycin
SERP, Monaco


1.2. t Magnesi lactat
1.2.1. ng hp hóa hc
Bng hp hóa hc, các nhà khoa hu
tng hc Magnesi lactat t các ngun nguyên lin
xut acid lactic [13], [22].
 m [6]:
- D c Magnesi lactat t nhiu ngu
6

+ Th halogenid acid t acid  cloropropionic.
+ Kh hóa ceton acid bng hydro m acid pyruvic.
+ Cng hp ái nhân vi tác nhân HCN t ngun acetaldehyd.
- Chi phí r, sn ph tinh khit cao.
- Thi gian ngn.
  m: Tng hp Magnesi      ng to
dng racemic Magnesi lactat, dung môi hóa cht s dng gây ô nhing.
 c áp dng rng rãi to Magnesi lactat cho các ngành công

nghip khác: tng hp cht ph gia thc phm, cht do, sn phm khác [47].
1.2.2. t
 ct là tiu kin k
khí hoc vi hiu khí vi các chng vi sinh vt sinh acid lactic. Trong quá trình
chuyn hóa các vi sinh vt nh có h enzym lactat dehydrogenase chuyn pyruvat
thành acid lactic.
Vic b sung các chm Magnesi ng lên men dn dn hoc
ngay t u s to ra mui Magnesi ng lên men. Sau
khong thi gian thích hp tin hành thu dch lên men, x lý dch lên men, kt tinh
và tinh ch  thu sn phm. Thc ch       t to
Magnesi lactat là quá trình lên men to acid lactic.
ng hp Magnesi lactat t vi sinh vt có nhim
ng hp hóa h
- An toàn vm ca quá trình c tn d
làm nguyên liu cho thc phân bón.
- Nhi sn xut thng sn xut thp, thit b và quy trình
sn xun, d áp du kin kinh t Vit Nam.
- Tn dc các sn phm tha ca ngành thc phm, vy nên giá
thành sn phm r.
- Tc sn phm tinh khit dng Magnesi L  lactat [37], [49].
7

Thc t hin nay  90% sn ng acid lactic s dng trên th gic
tng hp bng hp [69].
1.3. Vi khun sinh acid lactic
1.3.1. m nhóm vi khun sinh acid lactic
Vi khun sinh lactic gm các trc khun hay cu khun Gram (+), t l GC
(guanin và cytosin) thp, chc acidng không sinh nha bào, k khí hoc vi
hic phân nhóm di cht và
 u, các vi khuc tìm thy trong thc v

phân hy và các sn phm ca acid lacm chung ln nht ca vi khun nhóm
này là s lên men hydratcarbon sinh ra acid lactic là sn phi cht cui
cùng [3], [43].
Vi khun sinh lactic ch yu thuc 4 chi: Lactobacillus, Pediococcus,
Streptococcus, Leuconostoc; ngoài ra có mt s loài nm thuc chi Rhizopus [2].
Hình dc ca vi khun sinh lactic rng và phc tp:
hình cu, hình oval, hình que, mc mc thành chui.
Sinh lý ca vi khun lactic khá ging nhau, chúng là các vi khun Gram (+),
không to bào t, ht, là vi khun ym khí hoc vi
hiu khí, s dng t phân gii glucid và tit ra acid lactic. Chúng phát
trin và tn ti tt  pH thp (4,5  6,8), nhi khong 10  50
0
C [2], [3].
Vi khun lactic là vi khun d i
phc tp, giàu chng, gm: các vitamin, các acid amin, các peptid ng
Chúng có kh  ng hóa nhiu lo ng: glucose, saccarose, lactose,
  dng cao phân t [2].
1.3.2. Chi Lactobacillus
Là chi ln nht trong các vi khun sinh lactic vi nhiu ch  c
nghiên cu và ng dng trong sn xut. Chi Lactobacillus c phát hin v
125 loài, da vào s chuyn hóa glucid trong t bào và sn phm to ra trong quá
trình lên men, chia thành 3 nhóm chính [3]:
8

 Nhóm 1: Nhóm vi khung hình, sn phm cui cùng ca quá
trình lên men ch yu là acid lactic (90 - 98%), các sn phm khác ch tn ti dng
vt nhi din: L. acidophilus, L
 Nhóm 2: Nhóm vi khun lên men d hình không bt buc, sn phm ca quá
trình lên men có th là acid lactic, acid acetic, acid formic, ethanol tùy loi ng
i din: L. plantarum, L. casei, L. leichman

 Nhóm 3: Nhóm vi khun lên men d hình bt buc, sn phm cui cùng là
acid lactic, acid    i din: L. brevis, L. fermentum, L.
buchneri
1.3.3. Loài Lactobacillus acidophilus
Loài L. acidophilus thuc gii vi khun, ngành Fermicutes, lp bacilli, b
lactobacilliales, h lactobacillaceae, ging lactobacillus [3], [5].







Hình 1.2. L. acidophilus i kính
hin vi quang hc

Hình 1.3. L. acidophilus i kính hin
n t
L. acidophilus là trc khun Gram (+), dng hình que, m   
hoc to chui ngn, không sinh bào tng, phn ng catalase âm tính;
là vi khut, nhi t phát trin là 37  45
0
C, ch
i thp (5  6); hô hp hiu khí và k  yu là k khí; có kh n
chuyn hóa hydratcarbon cho sn phm là D (-), L (+) lactic [2], [3], [7].
L. acidophilus n có li trong h thng tiêu
hóa giúp chng li vi khun có hi gây bnh, góp phn duy trì h vi khun có li. L.
acidophilus c phân lp t dch rut tr em và dch rut bê. Hin nay, L.
9

acidophilus c s dng nhiu trong các ch ph     
 u tr ng hp ri lon tiêu hóa  tr mm hoc do
dùng kháng sinh dài ngày [9].
L. acidophilus thuc nhóm vi khung hình, sn phm cui cùng
là acid  c ng dng rng rãi trong thc ti  o qun thc phm,
dung dch v sinh ph n (D 

 Cu trúc ca acid lactic
- Công thc tng quát: C
3
H
6
O
3
.
- Khng phân t: 90,08.
- Công thc cu to:


- Các dng ca acid lactic: do trong phân t ca acid lactic có 1 carbon
bi nên acid lactic có 1 ci quang: acid D (-) lactic, acid L (+)
lactic.




Acid D (-) lactic Acid L (+) lactic
- Cu trúc không gian:

Acid D (-) lactic Acid L (+) lactic
10

Acid lactic còn mt dng chng thi quang là hn hp racemic.
Dng acid racemic  ng là kt qu t g pháp tng hp hóa
h   hp cht lactonitril hoc nh ho ng ca enzym DL 
lactatdehydrogenase do mt s loài vi sinh vt có kh ng hp acid lactic
to thành [44].
Các acid lactic có tính quang hot khi b ánh sáng phân cc dng
phân cc có th chuyn thành dng acid i tác dng ca enzym racemase
t mt vài loài vi khun lactic.
- Tính cht ca acid lactic:
Dng dung dch: acid lactic là cht lng trong sut, không màu, không mùi,
v t trong n
Dng tinh th: d tan  áp sut khí quyn to cht lng.
 pha lng: acid lactic d chuyn sang dng dimer mch thng lactoyl lactate
và polymer mch tha phân t này liên kt
ester vi nhóm carbonyl ca phân t khác. Dng dimer m
th c hình thành nc thc hi     140
0
i áp sut
thp.
1.4. Các nghiên cagnesi lactat
Peter Johannes Marie Baets và các cng s n xut Magnesi lactat
bng cách lên men vi khun sinh lactic B. coagulans ng cha ngun
nguyên liu thc vt, lá cây C du nhii (Elaeis guineen-sis và Elaeis oleifera),

có ch  n 9,5% carbohydrat      c 9,5%
Magnesi lactat [52].
Jan Van Krieken và các cng s u ch Magnesi lactat bng cách
s dng mt trong các hp cht ca Magnesi là Magnesi hydroxyd, Magnesi oxyd,
     ng lên men các carbohydrat  pH 5  7 vi
chng vi khun thích hp [38].
11

Jan Van Krieken c Magnesi lactat rt tinh
khit t dch lên men s dng các ngusucrose,
tinh bt (lng, s dng Magnesi hydroxyd làm tác nhân trung hòa [39].
Ben - Yoseph Eliahu, Kogan Leni, Wajc Samuel (2000) sn xut Magnesi
lactat t vi sinh vt bu chnh pH v 6,5 bng
cách thêm Magnesi hydroxyd, nhi 50°C [17].
Aharon Meir Eyal, Rod Fisher (1998) sn xut Magnesi lactat thôn
 lactic trong a mt chc chi
Lactobacillus, loài Lactobacillus delbrueckii, hoc Lactobacillus
acidophilus. 
   pH c     c du    t nht trong
khong 6,0 - 6,5 bng các mui cacbonat, bicacbonat ca các kim loi kim th
Calci hoc Magnesi [14.]
       u sn xut Magnesi lactat bng
cách b sung Magnesi oxyd, Magnesi hydroxyd hoc Magnesi carbonat trong quá
trình lên men lactose ti pH 4,5  5,03 [42].
Bode Harold Eli và các cng s u ch Magnesi lactat b
pháp lên men r ng, sa, mía, mng c ci, hoc polyme monosaccharid
c thy
phân. To Magnesi lactat thông qua calci lactat bng cách thêm Magnesi hydroxyd
n kt thúc quá trình lên men [18].
Ngoài các nghiên cu v sinh tng hp, Magnesi c tng hp bng

c dùng làm nguyên liu trong công ngh thc phm, tng hp
Magie lactat t acid lactic và Magnesi hydroxyd [13], [22], [70].
Mc dù Magnesi c s dng rng rãi trong nhic
n ti Vit Nam hin có rt ít nghiên c liên quan hay quy
trình sn xu
12

T LIU U
2.1. Nguyên vt liu, thit b
2.1.1. Nguyên vt liu
 Chng ging: Lactobacillus acidophilus ATCC 4356.
 Nguyên liu và hóa cht
Bng 2.1. Các nguyên liu và hóa cht
Nguyên liu, hóa cht
Ngun gc

Glucose
Trung Quc
USP
Sa bt
Vit Nam
USP
Cao nm men
Mercc
EP
(NH
4
)
2
SO

4

Trung Quc
USP
KH
2
PO
4
Trung Quc
USP
MnSO
4
.4H
2
O
Trung Quc
BP
FeSO
4
.7H
2
O
Trung Quc
BP
MgSO
4
.7H
2
O
Trung Quc

BP
MgCO
3

Trung Quc
BP
c ct
Vit Nam

NaOH
Trung Quc
BP
NaK(C
4
H
4
O
6
)
Trung Quc

H
2
SO
4
98%
Trung Quc

Na
2

S
2
O
3

Trung Quc

Acid oxalic
Trung Quc

Natri EDTA
Trung Quc

NH
3
c
EP
NH
4
Cl
Trung Quc

HCl
Trung Quc

Lactose
Trung Quc

Maltose
Trung Quc


Saccarose
Vit Nam


13

 ng nuôi cy s dng
 ng nhân ging [6]
ng nhân ging


Glucose
4,0g
Sa bt
1,0g
Cao nm men
0,4g
(NH
4
)
2
SO
4

0,2g
KH
2
PO
4

0,25g
MnSO
4
.4H
2
O
0,001g
FeSO
4
.7H
2
O
0,001g
MgSO
4
.7H
2
O
0,03g

100ml
u chnh pH = 6,3  6,5

 ng lên men (MT) [6]
ng lên men


Glucose
7,0g

Sa bt
2,6g
Cao nm men
1,3g
(NH
4
)
2
SO
4

0,2g
KH
2
PO
4

0,25g
MnSO
4
.4H
2

0,001g
FeSO
4
.7H
2
O
0,001g

MgSO
4
.7H
2
O
0,03g

100ml
u chnh pH = 6,3  6,5

Bng MRS lng


Glucose
2,0g
Pepton
1,0g
Cao tht
0,5g
Cao nm men
0,4g
(NH
4
)
2
SO
4

0,2g
KH

2
PO
4

0,25g
MnSO
4
.4H
2
O
0,001g
FeSO
4
.7H
2
O
0,001g
MgSO
4
.7H
2
O
0,03g

100ml
u chnh pH = 6,3  6,5

 Các dung dch s dng
14

Các dung dng dn c
 Dung dch acid oxalic 10%: Hòa tan 10g acid   c và thêm
c v 100ml.
 Dung dch Schoorl A: Cân chính xác 34,66g CuSO
4
.5H
2
O, hòa tan trong
ng 2-3 git H
2
SO
4
c v 500ml.
 Dung dch Schoorl B: Cân 173g mui kép Natri kali tactrat NaK(C
4
H
4
O
6
) và
50g NaOH, hòa tan trong 300ml H
2
 ngui, thêm H
2
O v 500ml.
 Dung dch H
2
SO
4


2
SO
4
98% pha vi chính xác
500ml H
2
O, làm ngui.
 Dung dch Na
2
S
2
O
3
0,1N: Cân chính xác 25,0g Na
2
S
2
O
3
và 0,2g Na
2
CO
3
hòa
c ct không có CO
2
, thêm H
2
O v 1000ml.
 Dung dch HCl 0,01M: Pha loãng 2,4ml acid hydrocloric (TT) vc va

 100ml.
 Dung dch Trilon B 0,05M: Hòa tan 18,8g Trilon B (TT) c v
1000ml.
 Dung dm amoni pH 10: Hòa tan 5,4g amoni clorid (TT) trong 20ml
c, thêm 35ml dung dch ammoniac 10M (TT) c v 100ml
2.1.2. Thit b s dng
Bng 2.5. Các thit b s dng
Thit b, dng c
Ngun gc, xut x
Ni hp
ALP, Nht
T cy
Sanyo, Nht
T m
Memmc
T sy
Daihan, Hàn Quc

Hitachi U-1800, Nht

Mettler Toledo, M
Bp cách thy
HHS, Trung Quc
T lnh
Daewoo, Hàn Quc

15

2.2. Ni dung nghiên cu
2.2.1. Nghiên cu ng cu kin kt tinh thu sn phm

 t tinh.
 Nhi kt tinh.
 Thi gian kt tinh.
  H
1
 NMRnh công thc mui ngc.
2.2.2. Kim nghim theo tiêu chun Anh 2010.
2.2.3. Kho sát  ng c  ng nuôi cy n hiu sut sn phm
Magnesi lactat
 Kho sát ng ca pH ng nuôi cy: la chn pH nuôi cy t 6
 8.
 Kho sát ng ca ngun hydratcacbon: Glucose, Saccarose, Maltose,
Lactose.
 Kho sát ng ca n glucose: la chn n glucose t 2 
11%.
2.3. u
2.3.1. ng và nuôi cy
2.3.1.1. ng
ng nhân gic tit trùng  0,6 atm trong 20
 ngui xung 40  45
0
C s cy chng L. acidophilus.  trong t m 
nhi 37
0
C. Sau 24 gi nuôi cc ging cn thit.
Nu gi c gi  nhi  thp (trong t lnh) lâu ngày thì ph 
ging v trng thái hong bng cách  trong t m nhi 37
0
C trong 2 - 3
ngày ri ti [6]

2.3.1.2. ng hp Magnesi lactat
Chun b 100ml mi các thành phn và t l
nghiên cu vào các bình nón 250ml. Các thành phn yêu cu tit trùng riêng bit thì
pha vào các bình nón khác nhau. Ting  
16

ngun nhi khong 40  45
0
C, trn ln các thành phn tit trùng riêng. Sau
y ging vào các bình này trong t cy vô trùng vi t l ging là 10%. [6]
Sau khi cy ging,   m  nhi 37
0
C. Sau mi
24h, b sung chm MgCO
3
 to Magnesi lactat. Sau 96h thu ly dch lên men
 kt tinh Magnesi lactat [10].
2.3.2.  Magnesi lactat t dch lên men
Dn nhi 80
0
C và gi  nhi
 dit t bào. Lc nóng bng phu Buchner  loi ta protein và
các thành phn không tan. B sung 2% (kl/tt) than hot vào dch lc  ty màu,
c nóng bng phu Buchner loi b than hot. Cô
cách thy hoc ct quay dch lc n còn 1/3 th tích kt tinh  nhi 4 
10
0
C qua  lnh. Thu tinh th (lc bng phu Buchner, ly tâm thu ta),
ra ta 2 ln bc c lnh. Sn phm màu trc sy khô  nhit
 40

0
C  50
0
C ng sn phc [10], [70].
2.3.3. nh cu trúc Magnesi lactat
Da trên các kt qu phân tích ph IR, MS,
1
H-NMR. [4]
 Ph hng ngoi (IR):
Ph hng ngoi c ghi trên máy FTIR Affinity  1S, phòng Thí nghim Hóa
 Khoa Hóa hc    vi k thut viên nén KBr
trong vùng 4000  400cm
-1
. Các mu ry khô vi
t l khong 1:200 ri dng film mi áp lc cao có hút chân không
 loi b m.
 Ph khng (MS):
i ti phòng Thí nghim Hoá vt liu - Khoa
Hoá hc - -  khng LCMS 
2010EV Shimadzu.
 Ph cng t ht nhân proton (
1
H-NMR):
c ghi trên máy Bruker AV-500 ti Phòng Phân tích cu trúc phân t, Vin
Hóa hc - Vin Hàn lâm Khoa hc và Công ngh Vit Nam.
17

 nh s phân t ngc :
nh khc mt do làm khô: Cân chính xác khong 0,500 g bt,
cho vào t st nhi 125

0
C, sy ti khi khi, tính khng
 nh công thc mui ngc. [24]
Sn phm Magnesi lactat là mui kt tinh ca acid lactic vi ion Mg
2+
, tn ti
dng hydrat C
6
H
10
O
6
Mg.nH
2
O. Tính s phân t c ngm theo công thc sau:
n= H/m x M
sp
/M
nc

H: Khc m
m: Khng bt
M
sp
: khng phân t Magnesi lactat
M
nc
: Khng phân t cc
2.3.4. Kim nghim Magnesi lactat
Sn phc tinh ch u 10g.

Mc kim nghim theo tiêu chun cn Anh 2010 [21] ti Vin
kim nghim nghiên cc và trang thit b y t i (phiu kim nghim s
15N-.
2.3.5.  c OD xác nh m t bào vi sinh vt
Nguyên tc: da trên s cn ánh sáng bi các phn t    ng
trong pha lng hình thành mt h huy     c do s hin din ca
chúng làm phân tán chùm ánh sáng t c ca huyn phù t l vi m t
bào. Trong gii hn nhnh c c và m t bào có th xác lp quan h
tuyn tính gia chúng. M vi sinh vt có th c tip thông qua 
 c (máy quang ph  c sóng 600nm).
Ti c OD: Ly 10ml d
4000 vòng/phút trong 15 phút. B dch lên men thu sinh khi. Ra sinh khi bng
c muc mui sinh lý vào sinh kh 10ml trong ng ly
tâm. Tin hành pha loãng mu vi h s ng vi các
h s [30]