Nghiên cứu sinh tổng hợp kháng sinh từ streptomyces 184 213

B Y T
I HC HÀ NI



NGUYN TH DUYÊN

NGHIÊN CU SINH TNG HP
KHÁNG SINH T STREPTOMYCES
184.213

KHÓA LUN TT NGHI


ng dn:
Ths. T Thu Lan
thc hin:
B môn Vi sinh- Sinh hc



HÀ NI - 2015





Li c
Tôi xin trân trng gi li cc n ThS. T Thu Lan  cô giáo c

ting dn tôi thc hin và hoàn thành khóa lun này.
Tôi xin chân thành cy, cô giáo, các cán b, k thung
dy, công tác ti b môn Vi sinh- Sinh hc, b môn Công nghic, Vin v
sinh dch t i hc quc gia Hà Nn tình giúp
 tôi trong quá trình hoàn thành khóa lun này.
ng xin gi li ci Ban giám hiu, cùng toàn th các thy, cô
giáo, cán b i hc Hà Nn tình truyn
t kin thc và tu kin thun li cho tôi trong quá trình hc tp nghiên cu
tng.
Tôi xin gi li cng viên tôi trong sut thi
gian thc hin khóa lun.
Do thi gian thc hin khóa lun có h ca bn thân còn hn ch nên
khóa lun này còn nhiu thiu sót. Tôi rt mong nhc nhng ý ki góp
ca các thy cô và các b khóa luc hoàn thi
Tôi xin chân thành c
Hà Ni ngày 9 
Sinh viên
Nguyn Th Duyên






MC LC
T V 1
NG QUAN 2
1.1.  kháng sinh 2
1.1.1. c s nghiên cu kháng sinh 2
1.1.2.  2

1.1.3. Phân loi kháng sinh 3
1.1.4. Các ng dng ca kháng sinh 4
1.1.5.  tng quát sinh tng hp kháng sinh 5
1.2.  x khun. 6
1.2.1. Phân loi và phân b ca x khun trong t nhiên 6
1.2.2. m hình thái ca x khun 6
1.2.3. m x khun chi Streptomyces 7
1.3. Mt s p VSV sinh kháng sinh: 8
1.3.1. y dch chit lên b mt thch: 8
1.3.2. t trc tip lên b mt tha sn VSV kinh
: 8
1.3.3. t: 8
1.3.4. ng phân lp: 9
1.4. Tuyn chn, ci to và bo qun ging x khun. 9
1.4.1. Chn chng có HTKS cao bng sàng lc ngu nhiên: 9
1.4.2. t bin ci to ging 9
1.4.3. Bo qun ging x khun 9
1.5. Lên men sinh tng hp kháng sinh 10


1.5.1. Bn cht ca quá trình lên men. 10
1.5.2. Nhân ging VSV 10
1.5.3.  11
1.6. Chit tách và tinh ch kháng sinh t dch lên men. 12
1.6.1. t xut 12
1.6.2.  13
1.6.3. Tinh ch kháng sinh 13
1.7. nh cu trúc kháng sinh. 13
1.7.1. Ph t ngoi- kh kin. 13
1.7.2. Ph hng ngoi 13

1.7.3. Khi ph MS 14
1.8. Mt s nghiên cu g 14
1.8.1. Sn xut kháng sinh t Streptomyces sannanensis SU118 14
1.8.2. Phân lp, th nghim, tách các thành phn kháng sinh t Streptomyces sp.
SCA7. 15
U 15
2.1. Nguyên vt liu và thit b 15
2.1.1. liu 15
2.1.2. Máy móc thit b 18
2.2. Ni dung nghiên cu 19
2.2.1. nh hình thái ca Streptomyces 184.213 19
2.2.2. Chn lc, ci to ging 19
2.2.3.  19
2.2.4.  20


2.3. Tin hành thc nghim 20
2.3.1.  20
2.3.2.  nh hình thái x khun theo ISP 20
2.3.3.  20
2.3.4. ng nuôi cy thích hp 21
2.3.5.  22
2.3.6.  22
2.3.7.  23
2.3.8.  bn nhi bn pH ca dch 24
2.3.8.1.  bn nhit 24
2.3.8.2.  bn pH 24
2.3.9. t kháng sinh t dch lc bng dung môi h 24
2.3.10.  24
2.3.11.  25

2.3.12.  25
2.3.13.  26
 27
3.1. Streptomyces 184.213 27
3.2.  27
3.3. Kt qu th HTKS sau SLNN 28
3.4.  28
3.5. Kt qu t bin ci to ging ln 2 29
3.6. Chn MT lên men chìm 30
3.7. Kt qu chn chng lên men 30


3.8. Kt qu ng ca pH và nhi  bn 31
3.9. Kt qu chn dung môi chit sut kháng sinh 32
3.10. Kt qu sc ký lp mng chn h dung môi 33
3.11. Kt qu sc ký ct ln 1 34
3.12. Kt qu SKLM chn h DM ln 2 35
3.13.  36
3.14. Kt qu  nh kháng sinh tinh khic. 37
3.14.1.  37
3.14.2.  37
3.14.3.  38
KT LUN VÀ KIN NGH 39
2. Kin ngh 39
TÀI LIU THAM KHO 41

DANH MC CÁC KÝ HIU, CH VIT TT
ISP International Streptomyces Project
ADN - deoxyribonucleic
CW Cell wall (Thành t bào)
DM Dung môi
DMHC Dung môi h
 t bin
Gr Gram
Gr (+) 
Gr (-) Gram âm
HTKS Hot tính kháng sinh
IR Infrared (Hng ngoi)
L-DAP L-diaminopimelat acid
MS Mass spectrometry (Ph khi)
ng
MTdt ng dch th
P. mirabilis Proteus mirabilis
B.subtilis Bacillus subtilis
RAPD Random amplified polymorphic DNA
i ngu nhiên)

SLNN Sàng lc ngu nhiên
TK Tinh khit
UV Ultraviolet (T ngoi)
VK Vi khun
VSV Vi sinh vt






DANH MC CÁC BNG



.1

2.2

2.3

2.4
 dng
3.1
m hình thái Streptomyces 184.213

Kt qu th HTKS chng nuôi cy thích hp
3.3
Kt qu th HTKS sau sàng lc ngu nhiên
3.4


3.5

3.6

3.7

3.8

3.9

3.10

3.11

3.12

3.13











DANH MC CÁC HÌNH V

Tên hình
Ni dung
Hình 1.1
 tng quát lên men sn xut kháng sinh.
Hình 1.2
Các loi khun ty  x khun.
Hình 1.3















 8





1

T V
Cùng vi s phát trin v vi sinh vt hc, s phát minh u
tiên là p0 tr c ngot lch s m ra k nguyên mi trong
c y hc. T  sn xuc khai sinh và ng
dng mnh m u tr bi. Mc dù thành công vang di trong
vic tìm ra kháng sinh và s ci tin trong quá trình sn xu
bnh lý nhim trùng vn là nguyên nhân th hai dn t vong trên toàn th gii
và nhim trùng do vi khun gây ra xp x 17 triu ca t vong h yu trên
tr i già. Vic t ý s dng và lm dng kháng sinh là mt yu t quan
trng tc nghiên cu và phát trin các kháng
sinh mi có hiu qu cao, ít b c tính th thành nhu cu tt
yi vi nn y hc th gii, trong t Nam- mt quhát trin
có t l nhi l kháng kháng sinh rt cao.
Hin nay khong 80% các lo   c sinh tng hp t
Streptomyces. ng khí hu kin cho nhiu loi vi
sinh vt phát trit nhiu x khuc bit là x khun thuc chi
Streptomyces. Vi thc trc ta hin nay nhu cu s dng kháng sinh rt ln
 ngành công nghip sn xun, hu ht
kháng sinh trên th ng là nhp khu( dng thành phm hoc bán thành phm).
ng nghiên cu tìm ra kháng sinh mi t n xuu
tr u sinh tng hp kháng sinh t Streptomyces
n vi các mc tiêu sau:
 Chn lc, ci to gi nâng cao hiu sut sinh tng hp kháng sinh.
 u kin t lên men, chit tách kháng sinh.
    nh mt s tính cht lý, hóa c    c.
2

. TNG QUAN
1.1.  kháng sinh
1.1.1. c s nghiên cu kháng sinh

   ming( 1881-1955), mt nhà khoa h i
Scotland, lu tiên thng t cu vàng nu có ln nm Penicillium
notatumthì khun lc gn nm s không phát tric. 
t nhóm nhà khoa hc mi tách chic ch phm
pc loi nt nht là chng
Penicilium chrysogenium, ch ra loi penicillin có ho    triu ln
penicillin do Flemming tìm thy l     c coi là mt trong
nhng thành ti nht th k XX.
T i kì vàng son ca kháng sinh bu. Hàng lot kháng sinh mi có
giá tr trong y h     Streptomycin( Selman Waksman và Albert
193
 Viu tiên nghiên c.
 ly dch nuôi cy nm Penicillium  ra v
trong chin d-1952.
Tip t  nghiên cu kháng sinh  i hc
c khoa Hà Nc thành ln ph trách. Ti
c hàng nghìn chng x khun t các mt khác nhau.
T i Vin Khoa hc Vit Nam ( nay là Vin Khoa hc và Công
ngh Vit nhóm nghiên cu v kháng sinh. Nhiu chng VSV cho
kháng sinh có hot tính mc ng dng trong bo v ng vt, thc vt. Mt
s ch phm kháng sinh : Tetravit, biovit, bacitracc sn xu
d[8]
1.1.2. 
Kháng sinh, theo quan nim hp là: bt kì sn phm t VSV nào mà ngay c
 n th kìm hãm hoc tiêu dit các VSV khác( nm
men, nm mc, vi khut cách chn lc. Thut ng antibiotic bt ngun t
3

ch Hy Lbiotic sng. Tuy nhiên thut ng này không
pht ct nhi

kháng sinh.
Tuy nhiên, ngày nay vi s phát trin ca khoa hi ta có th tng hp
hoc bán tng hp các kháng sinh t nhiên( chloramphenicol), tng hp nhân to
các cht có hot tính kháng sinh ( sulfamid, quinolon)-   kháng
sinh trong y hc hic m rng.
Tóm li, hi :Kháng sinh là nhng
sn phc bit nhc t VSV hay các ngun khác có hot tính sinh hc cao,
có tác dng kìm hãm hoc tiêu dit mt cách ch lc lên mnh
(vi khun, nm, protozoa ) hay t  n thp. [4,10]
1.1.3. Phân loi kháng sinh
Có nhi phân loi kháng sinh :
 Phân loi theo ngun gc : Kháng sinh có ngun gc t nhiên, kháng sinh có
ngun gc bán tng hp, tng hp.
 Phân loi theo tính nhy cm ca vi khun vi kháng sinh: kháng sinh dit
khun , kháng sinh kìm khun
 Phân lo tác dng: c ch tng hp vách t bào vi khun, c ch
tng hp protein, c ch tng hp acid nucleic, c ch chuyi tính
thm ca màng t bào.
 Phân loi theo cu trúc hóa hc i khoa hc nht vì nó
c s dng ph bin. Phân loi kháng sinh theo cu trúc hóa hng chia
ra các nhóm:[9,10]
 Nhóm có cu trúc -lactam:
- Penicilin: benzylpenicilin, oxacilin,
 Nhóm có cu trúc aminoglycosid 
 Nhóm macrolid
 Nhóm lincosamid: lincomycin, clindamycin.
 Nhóm phenicol: cloramphenicol, thiamphenicol.
4

 Nhóm có cu trúc 4 vòng

 Nhóm peptid:
- Glucopeptid: vancomycin.
- Polypeptide: polymycin, bacitracin
 Nhóm ansamycin : rifamycin, rifampicin
 Nhóm antracyclin:, daunorubicin
 Nhóm actinomycin: dactinomycin D
 Nhóm kháng sinh polyen :nystatin, amphotericin B
 Nhóm quinolon
 Nhóm co- trimoxazol: co- trimoxazol.
1.1.4. Các ng dng ca kháng sinh
  c y h     u tr và d phòng các bnh nhim
c ng dng rc khác :
 Trong trng trt: tiêu dit các nm và vi khun gây bnh cho cây trng. Kháng
c dùng kích thích ht ny mm.
 tr các bo ôn, khô vn, bc lá, lép ht, thi m,
hoa cúc, mc xám; m lá trên bp ci, ci xanh, héo r l c r trên cà chua,
thi qu trên xoài, vi, nhãn, nho; vàng lá trên hoa cúc.
 
Vd: Doxyvet ( d

 Trong             
 [5]






5

1.1.5. 






























Ging x khun truyn  trong phòng thí nghim
nghimnghim nghim
Bình nhân ging quy mô thí nghim
Nhân ging trong thit b nhân ging
Lên men tng hp kháng sinh
Dch lên men
Sinh khi
Dch chit sinh khi
Dch lc
Dch chit
Sn phm tinh ch
Sn phc kim nghim
Sn ph
6

1.2. .
1.2.1. 

+C trong ADN trên 55%. 
 
                
Streptomyces

 bùn, 

 


      -    m 9-
22].

-60%
                
(amylase, cellulose, protease ) Ngoài ra x 
: tham gia vào các quá trình        
[13,17]
1.2.2. m hình thái ca x khun
 X khun có h khun ty phát trin thành si, có cu to si dng phân nhánh.
H si ca x khun chia thành khut và khung
kính ca khui t 0,3-1,0 n 2-3 µm. Khun ty ca x khun
 n. Màu sc ca khun ty
rt phong phú: tr [6,14,19]
- Khut : mng nuôi cy, không phân ct trong
sut quá trình phát trin, b mt nhn hoc sn sùi, có th tit ra MT mt s
7

lo, có loc, có loi ph thuc pH, có loi ch tan trong
DM h . Ch yu ca khung .[19]
- Khun ty khí sinh: Do khut phát trin dài ra trong không khí.
Ch yu là sinh sn ( Hình 1.2)

Hình 1.2 : Các loi khun ty  x khun
 Khun lc: là tp hp mt nhóm x khun phát trin riêng r to thành. Khun
lc x khuc bing xù xì có dng thô ráp,
dng phn hoc vôi không trong sut, có các np ta ra theo hình phóng x.[6](
Hình 1.3).

Hình 1.3 : Khun lc x khun.
1.2.3. Streptomyces
 Streptomyces 


8


Streptomyces 
--7,5. [6]
 



[6]
1.3.  : [10]
1.3.1.  :
Cân 1


 

1.3.2. 
 :
Trên hp Png và cha sn VSV ki
gieo cy trc tit lên b mt th t m 24-48 gi, mang ra quan
sát. Nu xung quanh các ht t có vòng vô khun, ta bic trong VSV trong
ht có sinh ra kháng sinh chng li VSV kinh. T ht n hành
phân l nghiên cu tip.
1.3.3. t:
 chu thy
tinh, gi  nh- thnh thong ta li cho them mt ít VSV kinh vào,
tru. Nuôi  t m sau mt th
m i kháng vi VSV kinh
mt rt ít.

9

1.3.4. Png phân lp:
X khun phát trin chn và nm mc. vì v d dàng phân
lp x khui ta cho thêm kháng sinh chng nm và kháng khun vi n
5-25 mng phân lng dùng là: tetracyclin,

1.4. Tuyn chn, ci to và bo qun ging x khun.
VSV sinh tng hp kháng sinh phân lp t  ng có
hot tính không cao. Ví d: các chng Penicillium phân lp t t ch t t 30-
ch nuôi cy. Vì v c các chng có hon
xu  i phi tuyn chn , ci to ging b     
[9,16]
1.4.1. Chn chng có HTKS cao bng sàng lc ngu nhiên:
Các vi sinh vt có s bin d t nhiên theo tn s khác nhau trong ng ging
thun khit, có dng chng có hot tính kháng sinh mnh  -30% nhng
chng khác. Cn phi chn ly dng chng có hot tính cao nht trong ng ging
 nghiên cu tip. [10,17]
1.4.2. t bin ci to ging[10,14,17]

 c ,dimethylsulphat, nitrosoguanidin,
 V


 


               
              

.
1.4.3. Bo qun ging x khun
10

 Ma bo qun gi ging VSV : gi ging VSV có t l sng sót cao,
c tính di truyn không b bii và không b tp nhim bi các VSV l.
[12,16]
 Ngày nay có nhio qun ging, la chn nh
bo qun ging tùy thuc kh ng phòng thí nghim: [6,11]
   bo qun lnh: các ch  c cy trên MT thích
hp(dch th hay trên thch) trong ng nghim hoc bình nón   trong
u kin thích hp cho VSV phát trio quntrong t lnh có
nhi 2ºCnh k cy truyn sang sau 3-6 tháng.
  trn t bào VSV vi các cht khô, cát, ht)
và làm khô  nhi ng.
 c huyn phù trong MT thích hc
làm lnh trong Mt chân không. Thit b   c và mu
s n mt mc nhnh.
 c bo qun trong MT dch th c cn
cho hong sng ca VSV b bt hot  nhi thp ( -70 ->-20ºC).
1.5. Lên men sinh tng hp kháng sinh
1.5.1. Bn cht ca quá trình lên men.
Lên men thc cht là quá trình oxi hóa kh sinh hc xy ra nh xúc tác ca
các enzym do VSV tng hp vi mng và to ra các sn
phi cht trong dch lên men. [10,16]
1.5.2. Nhân ging VSV[11]
M: T ng t bào VSV. Ging vi sinh vt dùng trong quá trình
lên men phi là các t  n phát trin mnh và có kh
ng hóa vt cht cao nht.Trong quy trình lên men, tùy tng chng ging
VSV khác nhau mà nhân ging nhng

có hai dng ging: t ng và bào t.
 ng hp ging là t   ng: N  ng chn Mt nhân
gim bo cho VSV tn ti thích hp nh vi thi gian ngn
11

nht cho sinh khi VSV ln nhng hng chn MT
dch th.
 ng hp ging là bào t: Tng chn c (nuôi cy bán rn:
cám go, bt by x khung cn thi gian khá dài
 to bào t. Bào t c thu hi cho vào bình khô, có gn ming bình bng
paraffin, bo qu dng h
1.5.3. [6,10]
Lên men b mt: Là thc hin nuôi cy VSV trên b mt rn, bán
rn, hoc lng. VSV hp th các cht t ng và s d
hô hp trên b mt ng.
 n, d thc hin, d x lý cc bi
thit b phc tp.
 m: 

 ng dng: ngày này ch s dng trong chn ging và gi ging.
Lên men chìm: VSV phát trin trong không gian 3 chiu c  ng
lng. Chng VSV cc phân tán khp mm và chung quanh mt t
c tip xúc vi dng. 


 

         
 lý cc b c.
 ng dc s dng ph bin trong công ngh vi sinh  sn xut

kháng sinh, enzym
 Phân loi: Lên men chìm chia thành 4 kiu chính
 Lên men m
 Lên men có b sung
12

 Lên men liên tc
 Lên men bán liên tc
1.6. Chit tách và tinh ch kháng sinh t dch lên men. [8,12]
Sau quá trình lên men, dng kháng
sinh không cao, cha nhiu tp chtn tách riêng kháng sinh khi tp cht
và tinh ch sn ph c các tiêu chun cn thit. K thut chit tách và
tinh ch kháng sinh thích hp là cho sn pht chng cao, bo qun lâu
ng th l thu hi và h giá sn phm.
1.6.1. Ct xut
c tính cc ti ng
nuôi cy hoc gi li trong t  la chn  chit xut kháng
sinh phù hp phi da vào bn cht hóa hc ca kháng sinh. Mt s 
chit xut:
 Chit bng DM h n kháng sinh c    
dch lc) sang pha DM hi tha mãn yêu cu: r tin,
d kic, khó cháy, có tính chn lc cao và d ct thu hi DM.
 t ta :da trên bn cht hóa hc ca kháng sinh là cht hu
 kt ta vi tác nhân phc hóa. Cht kt tc
bng cách lc hay ly tâm
 Hp ph bng nhi ion: da trên bn cht hóa khc ca kháng sinh
là acid, kim hay hp chc hp ph trên nhi ion
  s dng dung d phn hp ph
kháng sinh khi nha.
c khi chit xut kháng sinh ra khng nuôi cy cn phi loi

sinh khi t bào ra khi dch nuôi cy bc hay ly tâm:
 Lc: là quá trình phân riêng hn hng nht qua lp lc( giy lc
hoc bông) do chênh lch áp suta dch nuôi cy có ng
ti ving nhiu hay tích t  sinh khi.
13

 t có khng
là tách pha rn khi pha lng nh lc ly tâm.
1.6.2. C
Trong nghiên cu sinh tng h c s
d tách sn phc dùng:
 Sc ký lp mng: tách các cht trong hn hp da trên kh   hp
ph(là ch yu) khác nhau ca chúng trên b mt rn hp ph.
 Sc ký lng trên ct: tách các chnh da trên s phân b khác nhau
ca các cht gia hai pha. c gi trên c
 áp sut hoc trng lc. Quá trình ra gic thc hin bng cách
thêm liên tng mi cng.
1.6.3. Tinh ch kháng sinh
  tinh khin s d
kháng sinh. S kt tinh có th thc hin bng cách gim nhi hoi h
dung môi.
1.7. nh cu trúc kháng sinh.
1.7.1. Ph t ngoi- kh kin. [1,2]
Nguyên tc: Quá trình hp th các bc x t ngoi gây ra bin  
n t ca phân tn t  trn E
0
chuyn sang trng thái
kích thích E
1
, E

2
. Cu trúc hóa hc ca phân t cht nghiên cu vi quang ph hp
th có mi quan h cht ch. Phân t nào có càng nhiu liên k hp th
càng chuyn v n t tham gia vào hiu ng này có th là
n t trong liên kt t bi, h thp n t t do
không tham gia liên kt ca O, N, S.
1.7.2. Ph hng ngoi[1,18]
Nguyên tng bc x hng ngo l i trng
ng ca n t mà ch   i trng ca phân t.
Trong phân t khi có nhóm nguyên t p th i trng
ng thì to nên mt di hp th trên ph IR. Mc sóng hp th cc
14

i trên ph IR s t nhóm chc nên ph c s d nhn
bit mt nhóm chc bit trong phân t.
1.7.3. Khi ph MS
Ph khi là k thuc tip t s khn tích ca ion (m/z)
c to thành trong pha khí t phân t hoc nguyên t ca mu. T s c
biu th b khng nguyên t  khng nguyên t bng
1/12 khng ca carbon
12
C) hoc bng Dalton (1 dalton Da bng khng
ca nguyên t hydro).
c to thành trong buc gia tc và tách riêng nh
b phân tích khn detector. Tt c quá trình này din ra trong h thit
b chân không, áp sut trong h ng t 10
-3
n 10
-6
Pa. Tín hing

vi các ion s c th hin bng 1 s v khác nhau tp hp li
thành mt khi ph  hoc ph khi. [18]
Ph khi cung cnh tính (khng phân t, nhn dng các
chnh cng các cht. [1,2]
1.8. Mt s nghiên cu g
1.8.1. Sn xut kháng sinh t Streptomyces sannanensis SU118[20]
Mt chng x khun c phân lp t t  h Loktak , Manipur,  
nh là Streptomyces sannanensis SU118. Chng SU118 có th phát trin
 nhi n 40ºC và pH9 vi n Nacl 3%. Chng SU118 có th s dng
glucose, arabinose, malnitol,xylose, meso-inositol, raffinose, rhamnose,
salicin,sucrose,galactose,fructose là ngun carbon mà không sinh ra acid. Chui gen
16S rRNA ca chc so sánh vi các chui nucleotide ca các chng
Streptomyces khác t d liu ca ngân hàng gen NCBI. Chng SU118 có chui gen
ng nht vi chng S.sannanensis 
dm hình thái, sinh lý, hóa sinh và s phân tích chui gen 16S
rRNA chng SU118 mi phân l   nh là S. sannanensis. Chng
Streptomycessannanensis SU118 sinh kháng sinh tt nht khi   28ºC trong 7 ngày
sau nuôi cc chit bng DM ethylacetat và tách
15

bng SKLM hot tính sinh hc ca mt hp cht có ticho hot
tính sau khi phân tách các thành phn t dch chit DM cho kt qu là: R
f
= 0,56;

max
=275,0 nm và có MIC= 0,5µg/ml trên Staphylococcus aureus MTCC 96 và
Staphylococcus aureus (phân l c ch cao
nht là 0,3 µg/ml trên Mycobacterium smegmatis MTCC 6 và Bacillus circulans
MTCC 8074. y x khuc phân lp t t nhiên có tin

trong vic sinh tng hp kháng sinh, góp phy tìm ra kháng sinh mi.
1.8.2. Phân lp, th nghim, tách các thành phn kháng sinh t Streptomyces
sp. SCA7. [21]
37 chng x khuc phân lp t mt phân lp t ng 
Vengodu, Thiruvannamalai, Tamil Nadu, . Các cht
tính kháng sinh trên 5 vi khun Gr(+) và 7 vi khun Gr(-) và 2 loi nm gây bnh.
u th nghim hot tính cho thy, 43% các chng x khun có hot tính yu,
16% có hot tính trung bình, 5% có hot tính tt, và 35% không có hot tính. Hot
tính kháng sinh mnh nhc khi nuôi cy x khung thch
ng i. Dch chic tách tng thành phn bng sc ký
ct  hon 10 có hot tính kháng sinh tt
chng li Staphylococcus epidermidis (31,25µg/ml) và Malassezia pachydermatis
nh có hp cht 2,4-bis(1,1-dimethylethyl)
phenol. Da vào cáng, phân t (chui 16S
rDNA) chng này c  nh là Streptomyces sp. SCA7. Nó có th c s
d phát trin các cht mc phm và mp.


U
2.1. Nguyên vt liu và thit b
2.1.1. liu
 Streptomyces 184.213 do b môn Vi sinh-Sinh
hc, ng i hc Hà Ni cung cp.
16

 -
 (bng 2.1)
Bng 2.1: Gii thiu các VSV kinh
VK Gr(+)
Vit tt

VK Gr(-)
Vit tt
Staphylococcus aureus
ATCC 1228
S. aureus
Escherichia coli
ATCC 25922
E. coli
Bacillus subtilis
ATCC 6633
B. subtilis
Proteus mirabilis BV
108
P. mirabilis
Bacillus cereus ATCC
9946
B. cereus
Shighella flexneri DT
112
S. flexneri
Bacillus pumilus
ATCC 10241
B. pumilus
Pseudomonas
aeruginosa VM 201
P. aeruginosa
Sarcina lutea ATCC
9341
S. lutea
Salmonnella typhi

DT220
S. typhi

 ng:
 
ng nuôi cy x khuc gii thiu  bng 2.2.
.2
MT


MT1
MT2
MT5
MT6
MT7

2
2
2,4
2

Glucose


1


Saccarose

3




1,5




0,3

0,3
Pepton


0,5

0,5
KNO
3

0,1