PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH SHIGELLA TRONG THỰC PHẨM

PHƯƠNG PHÁP PHÂN
TÍCH ĐỊNH TÍNH
SHIGELLA TRONG THỰC
PHẨM


1. Phạm vi áp dụng :
– Phương pháp dùng để phát hiện Shigella trong các
loại thực phẩm

2. Tiêu chuẩn tham chiếu:
– FDA – BAM, 2001, chapter 6 – Shigella,
Bacteriological Analytical Manual Online.


3. Định nghĩa:
• Shigella là trực khuẩn Gram âm, hiếu khí và
kỵ khí tùy nghi, không sinh bào tử và không di
động, thuộc họ Enterobacteriaceae
• Có phản ứng LDC âm tính, không lên men
đường Lactose trong 2 ngày
• Lên men Glucose và một số đường khác sinh
acid nhưng không sinh hơi
• Không có khả năng sử dụng citrate và
malonate


4. Nguyên tắc:
• Tăng sinh kỵ khí trong môi trường lỏng chọn
lọc một lượng mẫu xác định
• Cấy phân lập huyền phù tăng sinh sang môi

trường rắn chọn lọc
• Những khuẩn lạc nghi ngờ sẽ được thử nghiệm
sinh hóa và kháng huyết thanh


5. Môi trường và thuốc thử:
•
•
•
•
•
•
•
•

Canh Shigella với novobiocin
Thạch MacConkey (MC)
Canh Glucose
Motility test medium (semisolid)
Thạch triple sugar iron (TSI)
Tryptone
Thuốc thử Kovac’s
Kháng huyết thanh của Shigella: Shigella polyvalent
nhóm A, B, C, D

• 6. Thiết bị chính:

• Tủ ấm 37.0 ± 1.0oC
• Bể điều nhiệt 42 ± 0.2 oC và 44 ± 0.2 oC
• Bình ủ kỵ khí với GasPak

7. Quy trình:

25 gam mẫu +
225g Shigella broth
Rót dịch nổi vào bình
ủ kỵ khí 42.0oC trong 20 ± giờ

Cấy ria lên môi trường
MacConkey
Ủ 35oC, 20 ± 2 giờ

Đọc kết quả
và cấy chuyển lên TSA
Ủ 37oC, 20 ± 2 giờ

Thử nghiệm sinh hóa
và kháng huyết thanh


7.4. Thử nghiệm sinh hóa
Môi trường thử

Biểu hiện

Đặc tính

1 Canh Glucose

Môi trường chuyển vàng,
không sinh hơi

Lên men glucose
glucose (+)
sinh acid, Gas (-)

Lysine
2 Decarboxylase
(LDC)

Môi trường chuyển vàng

LDC (-)

Thạch thử tính
3 di động
(Mortility agar)

Vi khuẩn không mọc lan
khỏi đường cấy

Không di động

4

Canh Tryptone
(44oC)

Thạch Triple

5
sugar iron
(TSI)

Không xuất hiện vòng đỏ với
Indol (-)
thuốc thử Kovac’s
Phần nghiêng đỏ, phần đáy
vàng, không chuyển màu
đen và không sinh hơi

Lactose(-),sucrose(-)
glucose (+), H2S (-),
Gas (-)


7.5 Khẳng định bằng kháng huyết thanh
Kháng huyết thanh được sử dụng thuộc nhóm A, B,
C và D

7.6 Báo cáo kết quả
Có (hoặc không có) Shigella trong 25g mẫu.


Định lượng
Pseudomonas aeruginosa
bằng phương pháp màng lọc
ISO 16266: 2006
ISO 16266:2006 specifies a method for the isolation and enumeration of Pseudomonas
aeruginosa in samples of bottled water by a membrane filtration technique. This method

can also be applied to other types of water with a low background flora, for xample, pool
waters and waters intended for human consumption

.


Sơ đồ
Water sample filtration
Membrane
CN agar
Reading/ enumeration

Reading at λ= 366 nm- UV light
Wood lamp

Nutrient agar
Acetamid broth

Oxidase test

Nessler reagent

King B

Reading/ enumeration
ammonia producing colonies

Raeding at λ= 366 nm- UV light
Enumeration fluorescent colonies

Pseudomonas agar base/CN-agar
Môi trường thạch để phát hiện Pyocyanin của Pseudomonas

1.Thành phần môi trường cơ bản:
• Gelatin peptone:
16,0 g
• Casein hydrolysate:
10,0g
10,0 g
• K2HP04 khan:
• MgCl2 khan :

10,0g

• Agar :
• Glycerol:

11-18,0g
10,0 ml

• Nước cất:

1000 ml.

2.Thành phần CN supplement:
• Hecxadecyltrimethyl ammonium bromide(cetrimide)0,2g
• Nalidixic acid
0,015g

Giải thích kết quả
Tạo NH3
trên canh
acetamide

Thử
nghiệm
Oxidase

Phát hùynh
quang trên
King’s B

Khẳng định
P.aeruginosa

NT

NT

NT

POS

Phát hùynh quang (Không xanh
lục hay xanh lá cây)

+

NT

NT

POS

Nâu đỏ không phát hùynh quang

+

+

+

POS

NT

NT

NT

ND

Khuẩn lạc trên
CN agar
Xanh lục hay xanh lá cây

Các dạng khác
NT: không kiểm tra