CHƯƠNG 1 CÁC ENZYME DÙNG TRONG TẠO DÒNG PHÂN TỬ

CÔNG NGHỆ DNA
TÁI TỔ HỢP
CHƯƠNG I: CÁC ENZYME DÙNG
TRONG TẠO DÒNG PHÂN TỬ

ĐHKH HUẾ


NỘI DUNG CHÍNH
I. Các enzyme hạn chế
II. Các enzyme trùng hợp
III. Các enzyme gắn
IV. Các enzyme phân cắt
V. Các protein liên kết DNA sợi đơn


I. Các enzyme cắt hạn chế
Nguồn gốc
Được phân
lập từ các
sinh vật
prokaryote

Type
I

Type
II
Type
III

Phân loại


Các enzyme hạn chế type II
Cách gọi
tên

Chữ thứ nhất của tên chi

Eco

Hai chữ đầu của tên loài

RI
Chủng liên quan + Bậc xác định

Ví dụ : EcoRI => Escherichia coli + chủng RY13 , I :
bậc xác định đầu tiên trong vi khuẩn


Các enzyme hạn chế type II
- Enzyme nhận biết các trình tự đặc hiệu gồm :
4,6 hoặc 8 cặp base có trình tự đối xứng đảo
ngược nhau (palindrome)
Vd: Enzyme EcoRI nhận biết chuỗi 6 nucleotide




Đầu dínhvà đầu bằng

Đầu dính

Đầu bằng

Cắt ở vị trí gần đầu 3’
hoặc 5’ tạo ra các đầu
lồi

Cắt ở vị trí chính giữa
trình tự nhận biết

Nối các đoạn DNA :
sự có mặt của enzyme
ligase của phage T4
tăng tốc độ gắn

Nối các đoạn DNA lại:
Ngoài enzyme
ligase,có thể sử dụng
các linker hay dùng
terminal transferase


Đầu dính và đầu bằng
EcoRI

HaeIII

Tạo ra đầu dính và đầu bằng

Đầu dính và đầu bằng


Đầu dính và đầu bằng
Nối đầu dính


Đầu dính và đầu bằng
Nối đầu bằng


3. Isochizomer
* Khái niệm
Vd : MboI và Sau3AI cùng nhận biết trình tự

BamHI nhận biết trình tự


4. Methyl hóa
Bảo vệ DNA chống lại sự
phân hủy của các enzyme
cắt hạn chế


4. Methyl hóa
Tất cả các chủng E. coli đều chứa 2enzyme methyl hóa
DNA là: dam và dcm .

dam

dcm


5. Cắt DNA bằng enzyme cắt hạn chế

Các loại đệm dùng trong phản ứng cắt DNA
Nhóm
đệm

Các
enzyme
hạn
chế
chia
làm 3
nhóm

Hoạt độ
ion

Pha chế dd đệm stock (mM)

NaCl

Tris.HCl
pH 7,5

MgCl2 Dothiothreitol

Cao (H)

Cao

0

10

10

1

Trung
bình
(M)

Trung
bình

50

10

10

1

Thấp (L)

Thấp

100

50

10

1


II. Các enzyme trùng hợp


1. DNA polymerase


1. DNA polymerase I của E.coli


Ứng dụng


2. Đoạn Klenow của DNA polymerase I của
E.coli



3. DNA polymerase của bacteriophage T4

Ứng dụng


4. Taq DNA polymerase

Được sử dụng nhiều trong kỹ thuật PCR