Sinh Phôi Thể Hệ

SỰ PHÁT SINH PHÔI SOMA Ở CÁC KIỂU GENE KHOAI MÌ
VÙNG ĐÔNG BẮC BRAZIL

NỘI DUNG
1. GIỚI THIỆU
2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4. KẾT LUẬN

1. GIỚI THIỆU
•
Khoai mì (Manihot esculenta), hay còn gọi là sắn, là một nguồn thực
phẩm thông dụng khắp các vùng nhiệt đới trải dài từ Châu Phi, Châu
Á đến châu Mỹ.
•
Phương pháp phát sinh phôi soma và phát sinh cơ quan ở cây khoai
mì ở vùng Đông Bắc Brazil vẫn còn chưa phát triển.

2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
•
Các loại khoai mì trong nghiên cứu này: Água Morna, Amansa
Burro, Aparecida, Mata Fome, Milagrosa, Rosa, Rosinha và
Sacai
•
Các mẫu cấy sử dụng là các đỉnh chồi phân lập từ các cây
trưởng thành in vitro và từ các chồi mọc từ các cành cây nhân
giống (stem cuttings). Sự phát sinh phôi soma đạt được tần số
cao khi thêm vào môi trường chất kích thích auxin picloram ở
khoảng rộng các nồng độ. Các tử diệp (lá mầm) của phôi soma
sơ cấp được sử dụng làm các mảnh cấy cho sự hình thành phôi

soma thứ cấp trong một môi trường kích thích bổ sung picloram

2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
•
Nhân giống in vitro sử dụng các đoạn cây giống tươi dài 20-30cm với 5-8
lóng được lấy từ các cây trưởng thành. Các cành này được gieo vào khay
plastic (50 x 30 x 8 cm), đổ đầy khoáng và tưới với môi trường ½ muối
MS, giữ trong điều kiện nhà kính. Khi các chồi mới mọc cao 2 cm, chúng
được cắt từ cây mẹ, đưa vào phòng thí nghiệm, khử trùng bằng cách ngâm
vào 1.5% sodium hypochlorite, 0.01% dung dịch Triton X-100 trong 5
phút. Các đỉnh chồi chứa 3 lá sơ khởi được tách vô trùng và chuyển vào
ống nghiệm chứa 10 ml môi trường MS rắn bổ sung BA 0,1mg/L. Các
ống nghiệm chứa mảnh cấy được ủ ở 26±2 ºC trong một một tủ tăng
trưởng cài đặt chương trình cho chu kỳ sáng – tối 16/8 giờ, dùng đèn
huỳnh quang trắng (25,3 µmol m-2 s-1). Việc nuôi cấy duy trì bằng cách
cấy chuyền hàng tháng các mảnh cấy trong cùng điều kiện môi trường.

2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
•
Đối với việc kích thích sự sinh phôi soma, các mẫu cấy là các
đỉnh chồi chứa 3 lá sơ khởi phân lập từ cây trưởng thành in
vitro và từ các cành nhân giống. Các mảnh cấy được chuyển
dưới điều kiện vô trùng vào đĩa petri chứa 25 ml môi trường
MS rắn bổ sung 2% sucrose, 0.5 mg/L đồng sulphate và
picloram nồng độ 1, 3, 6, 9 12 hay 15 mg/L tạo rắn nhờ 0.6%
agar. Sau 3 tuần ủ trong tối 26±2 °C, ghi nhận sự hiện diện
của phôi soma.
•
Phương pháp mô tả bởi Zhang et al. (2001) sử dụng cho giai
đoạn trưởng thành của phôi soma. Cụm gần 10 phôi được

chuyển vào đĩa Petri chứa 25 ml môi trường muối MS và
vitamin, 2% sucrose, 0.5 mgL-1 đồng sulphate và 0.1 mgL-1
BA, pH 5.8, tạo rắn nhờ 0.6% agar, ủ từ 3 đến 4 tuần ở 26 ±
2ºC dưới chu kỳ sáng là 16h.