Nghiên cứu tái sinh giống cây Chùm Ngây (Moringa oleifera L.) chất lượng cao bằng kỹ thuật in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)

--------------o0o--------------

(Moringa oleifera L.)
IN VITRO

Chuyên ngành
Khoa

:
:
:
:
:

Chính quy
K43 - CNSH
CNSH CNTP
2011 - 2015


--------------o0o--------------

tài:
(Moringa oleifera L.)
IN VITRO

Chuyên ngành
Khoa

Khoa CNSH

:
:
:
:
:
:

Chính quy
K43 - CNSH
CNSH CNTP
2011 2015
1.


i

L IC

M
cô giáo trong khoa

Em xi

. Lê T

,
cho em.

nghiên

.

Sinh viên

àng


ii

DANH M C CÁC B NG
Trang
B

ng c a Chùm Ngây.....................................7

B ng 4.1: K t qu nghiên c u

ng c a dung d ch H2O2

n kh

vô trùng m u Chùm Ngây (sau 15 ngày nuôi c y) ...................................27
B ng 4.2: K t qu

ng c a HgCl2

n kh

g vô trùng m u Chùm

Ngây (sau 15 ngày nuôi c y) ......................................................................29
B ng 4.3: K t qu nghiên c u

ng c a th i gian kh trùng kép s d ng k t

h p dung d ch H2O2 (20%) và viên kh trùng Johnson (2,5 mg/l)

n kh

u Chùm Ngây (sau 15 ng y nuôi c y)..........................31
B ng 4.4: K t qu

ng c a n

n kh

i Chùm

Ngây (sau 20 ngày nuôi c y) ......................................................................33
B ng 4.5: K t qu

ng c a n

n kh

i Chùm

Ngây (sau 20 ngày nuôi c y) ......................................................................35
B ng 4.6: K t qu

ng c a s k t h p gi a n

n hi u

qu tái sinh ch i Chùm Ngây (sau 20 ngày nôi c y) ................................37
B ng 4.7: K t qu

ng c a s k t h p gi

n hi u qu tái

sinh ch i Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi c y)...........................................39


iii

Trang
Hình 2a: Hoa Chùm Ngây .............................................................................................4
Hình 2b: Qu Chùm Ngây .............................................................................................4
Hình 2c: H t Chùm Ngây ..............................................................................................4
Hình 2d: Cây Chùm Ngây .............................................................................................4
Hình 2e

các

Hình 4.1: Bi

n phân hóa t bào............................................................11

th hi n

ng c a dung d

n kh

trùng m u Chùm Ngây (sau 15 ngày nuôi c y)......................................28
Hình 4.2: Bi

th hi n

ng c a HgCl2

n kh

m u Chùm Ngây (sau 15 ngày nuôi c y) ...............................................30
Hình 4.3: Bi

th hi n

ng c a th i gian kh trùng kép s d ng k t h p

dung d ch H2O2 (20%) và viên kh

n kh

u Chùm Ngây (sau 15 ngày nuôi c y) .......................32
Hình 4.4a: Bi

th hi n

ng c a n

n kh

ch i Chùm Ngây (Sau 20 ngày nuôi c y)...............................................34
Hình 4.4b: Hình nh th hi n

ng c a n

n kh

ch i Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi c y)................................................34
Hình 4.5a: Bi

th hi n qu

ng c a n

n kh

h i Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi c y) .................................................36
Hình 4.5b: Hình nh th hi n qu

ng c a n

n kh

sinh ch i Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi c y)........................................36
Hình 4.6a: Bi

th hi n

ng c a s k t h p gi a n

BAP và IAA

n hi u qu tái sinh ch i Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi c y) ............38
Hình 4.6b: Hình nh th hi n

ng c a s k t h p gi a n

BAP và IAA

n hi u qu tái sinh ch i Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi c y) ............38


iv

Hình 4.7a: Bi

th hi n

ng c a s k t h p gi

n hi u

qu tái sinh ch i Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi c y) ...........................40
Hình 4.7b: Hình nh th hi n

ng c a s k t h p gi

n hi u

qu tái sinh ch i Chùm Ngây (sau 20 ngày nuôi c y) ...........................40


v

DANH M C CÁC C M T

2,4 D

: 2,4 Diclorophenoxy acetic acid

BA

: 6-Benzylaminopurine

Cs

: C ng s

CT

: Công th c

CV

: Coeficient of Variation

VI T T T

i ch ng
GA3

: Gibberellic acid

IAA

: Indole-3-acetic acid

IBA

: Indole butyric acid

Kinetin

: 6-Furfurylaminopurine

LSD

: Least Singnificant Difference Test

MS

: Murashige & Skoog (1962)

MT
NAA
TDZ

ng
-naphthlene acetic acid
: Thidiazuron


vi

Trang
U ......................................................................................................1

PH N 1: M
tv

................................................................................................................1

1.2. M

tài..................................................................................................2

1.3. Yêu c u c

tài....................................................................................................2
c ti n c

tài..................................................2

c..................................................................................................2
c ti n. .................................................................................................3
PH N 2: T NG QUAN TÀI LI U..........................................................................4

2.1. Gi i thi u chung v cây Chùm Ngây.....................................................................4
m th c v t h c cây Chùm Ngây.............................................................4
2.1.2. Phân b ..................................................................................................................6
2.1.3. Phân lo i................................................................................................................6
2.1.4. Giá tr c a cây Chùm Ngây .................................................................................7
2.2. Khái quát v nuôi c y mô t bào th c v t............................................................10
2.2.1. Khái ni m v nuôi c y mô t bào th c v t .......................................................10
khoa h c c
2.3. M t s y u t

y mô t bào th c v t......................10
n quá trình nuôi c y mô t bào th c v t................12

2.3.1. V t li u nuôi c y.................................................................................................12
u ki n vô trùng..............................................................................................12
ng hóa h c............................................................................................12
ng v t lý...............................................................................................16
n chính trong nuôi c y mô t bào th c v t......................................17
2.4.1.

n chu n b ..............................................................................................17

2.4.2. Tái sinh m u nuôi c y ........................................................................................18
2.4.3.

n nhân nhanh ch i ................................................................................18


vii

2.4.4. T o cây hoàn ch nh ............................................................................................18
2.4.5. Chuy

...........................................................18

2.5. Tình hình nghiên c u v cây Chùm Ngây

c và trên th gi i ..........19

2.5.1. Tình hình nghiên c u v cây Chùm Ngây trên th gi i...................................19
2.5.2. Tình hình nghiên c

c......................................................................20

PH N 3: V T LI U, N

U ....21

ng và ph m vi nghiên c u........................................................................21
ng nghiên c u ........................................................................................21
3.1.2 Ph m vi nghiên c u.............................................................................................21
m và th i gian nghiên c u ........................................................................21
m nghiên c u ...........................................................................................21
3.2.2. Th i gian nghiên c u .........................................................................................21
3.3. N i dung nghiên c u.............................................................................................21
u ......................................................................................22
3.4.1. Nghiên c u

ng c a m t s ch t kh trùng (H202, HgCl2

n kh

u Chùm Ngây. .................................................................................22
3.4.2. N i dung 2: Nghiên c u
kh

ng c a m t s ch

u ti

n

i Chùm Ngây..............................................................................24

3.5. X lý s li u...........................................................................................................26
PH N 4: K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N ...................................27
4.1. K t qu

ng c a hóa ch t kh

n kh

u Chùm

Ngây...............................................................................................................................27
4.1.1. K t qu nghiên c u

ng c a HgCl2

n kh

u

Chùm Ngây...................................................................................................................29
4.1.2. K t qu nghiên c u
kh trùng Johnson (2,5 m

ng c a s k t h p dung d ch H2O2 (20%) và viên
n kh

u Chùm Ngây ..................31


viii

4.2. K t qu nghiên c u

ng c a ch

u ti

n kh

sinh ch i Chùm Ngây...................................................................................................33
4.2.1. K t qu

ng c a n

n kh

i Chùm

Ngây...............................................................................................................................33
4.2.2. K t qu

ng c a n

n kh

i Chùm Ngây

........................................................................................................................................35
4.2.3. K t qu

ng c a s k t h p gi a n

n hi u qu

tái sinh ch i Chùm Ngây..............................................................................................37
4.2.4. K t qu

ng c a s k t h p gi

n hi u qu tái sinh

ch i Chùm Ngây...........................................................................................................39
PH N 5: K T LU N VÀ KI N NGH ................................................................42
5.1. K t lu n ..................................................................................................................42
5.2. Ki n ngh ................................................................................................................42
TÀI LI U THAM KH O

PH L C


1

M

U

1.1.
Chùm Ngây hay cò

uan,
Moringa oleifera L. Là

Sinh

gây (Moringa)
vùng nam Á

Á và châu phi [5].
c

nh và
i

q

u

[5].
itamin C, beta-caroten, acid amin và
eatin, quercetin,

alphag không kém các

, Potassium
[22].
[21],
kháng

[19]
cholesterol trong máu [27]

làm

m.


2

Chùm

1.2. M
- Nghiên c u

ng c a m t s ch t kh

n kh

trùng m u cây Chùm Ngây.
- Nghiên c u

ng c a m t s ch

u ti t

n kh

i Chùm Ngây.
1.3. Yêu c u c
-

tài

nh

ng c a m t s ch t kh

n kh

m u Chùm Ngây.
-X

c

ng c a m t s ch

u ti t

ng

n kh

i Chùm Ngây.
c ti n c

tài

c
- Quá trình nghiên c u s
trùng, ch
Ngây b

u ti t

c
n kh

in vitro.

ng c a m t s ch t kh
g vô trùng, tái sinh,cây Chùm


3

- Nghiên c u góp ph n phát tri n vi c nghiên c u k thu t nhân gi ng in
vitro

c li u nói chung và cây Chùm Ngây nói riêng.
c ti n.
- K t qu nghiên c u s

nh

quy trình nhân gi ng cây Chùm Ngây b ng

ng c a m t s y u t

n

in vitro,

cho

nh ng nghiên c u v sau.
- Góp ph n b o t n và nhân gi ng Chùm Ngây, t o ra m t s
gi ng l n
tiêu dùng.

u có ch

ng cao cung c p cho s n xu t và th

ng cây
ng


4

PH N 2
T NG QUAN TÀI LI U

Chùm Ngây
cây Chùm Ngây
Chùm Ngây thu c nhóm cây thân g , có th m c cao t

n 10m, phân

nhánh nhi u, thân có ti t di n tròn, thân non màu xanh có lông, thân già màu
xám n t s n.

Hình 2a: Hoa Chùm Ngây

Hình 2b:

Hình 2c:

Hình 2d: Cây Chùm Ngây


5

2.1.1.1. Lá
Lá kép hình lông chim 3 l n l , dài t 30-60cm, màu xanh m c, m c
cách, có t 5-7 c p lá ph b c 1, 4-6 c p lá ph b c 2, 6-9 c p lá chét. Lá chét
dài t 12-20mm hình tr ng, m
cl

i, m

có lông

lá hình lông chim, n i rõ m
chùm sim m c

i, lá non kích

ch phân nhánh lá kép lông chim. Gân

i. Cu ng lá dài t 18-25cm. C m hoa d ng

nách lá hay ng n cành [5].

2.1.1.2. Hoa
ng tính, màu tr
gi

u, có cu ng dài 1-

ng
c phát hoa màu xanh, có

lông dài 10-15cm. lá b c hình v y nh
cong hình lòng mu ng, màu tr ng dài 1cm, r ng 0,4cm. Cánh hoa 5, r i,
u, cánh hoa d ng thìa, màu tr
nh b t th

n n m ngoài

i di n v i cánh hoa, nh b t th n m xen k cách hoa. Ch nh
c to

i, màu vàng, dài kho ng 0,6-1cm, có lông. Bao ph n 2

ô, hình b u d

ng trong. B nh y có 3 lá noãn dính, t o thành

b u trên m t ô, mang nhi u noãn, dính noãn bên, có lông. Vòng nh y màu
xanh, dài 1,8cm, có nhi

u nh y hình tr , màu vàng có lông. Cây

cho nhi u lá vào cu i mùa khô và tr hoa vào các tháng 1-2. Cây ra hoa r t
s

u tiên, kho ng 6 tháng sau khi tr ng. Cây kho ng
tu i là cho h t t t. Qu chín, h t gi ng phát tán kh
c ho

ng v

u
t [5].

2.1.1.3. Qu
Qu d ng nang treo, dài 25-30cm, ngang 2cm, có 3 c nh, ch có h
g lên, d c theo qu có khía rãnh, qu khô màu vàng xám. H

có 3 c nh, l n c h

u hà lan [5].


6

ng phát tri n
Cây Chùm Ngây d tr ng, có th tr ng t h t, hom cành, hom c và
tr

Vùng thi

c nên tr

kho ng tháng

c, nhi u cát
ch
c

ng, h
u ki

tx

sâu b nh h

c bi t c v

m c, ch u
ng cây không

i [15].

Tuy nhiên cây không ch

c úng ng p và d ch t n u không thoát

c t t. H th ng r phát tri n n
tr ng v i nh ng r

c tr ng t h

màu

u tr ng b ng cách giâm cành h th ng r s
y. Cây b

u cho qu t thân và nhánh t

n8

tháng tr ng [24].
Chùm Ngây là cây nhi

i và c n nhi

u ki
hán, nên

i, thích h p tr ng

u ki n khí h u kh c nghi t, ch
nhi

gi

ch n

c tr ng làm hàng rào xanh

che bóng cho các khu s n xu t nông nghi p, ch n gió, ch n cát [1].
c tr ng ph bi n
Chùm Ngây m c t nhiên

Châu Á và Châu Phi.

Vi t Nam,

Ninh Thu n, Bình Thu n. Tuy nhiên trong nh ng

u nghiên c
loài cây này mà di n tích gây tr
nam [10].
Gi i Th c v t: Plantae
Ngành Ng c lan: Magnoliopsida
B Chùm Ngây: Moringales
H Chùm Ngây: Moringaceae
Chi: Moringa

Loài: Moringa oleifera Lam [14].

ng minh công d ng tuy t v i c a
c m r ng, ch y u

các t nh phía


7

2.1.4. G

a cây Chùm Ngây

2.1.4.1. Giá tr

ng

Trong Chùm Ngây có ch

ng t ng h p (7 lo i

vitamin, 6 lo i khoáng ch t, 18 lo i axit amin và 46 ch t ch ng oxi hóa), các
b ph n c a cây ch a nhi u khoáng ch t quan tr ng và là ngu n cung c p
ch

m, vitamin, B-carote, axit amin và nhi u h p ch t phenolic. Cây Chùm

Ngây cung c p h n h p ph i tr n nhi u h p ch

quercetin, B-

stosterol, caffeoylquinic axit và kaempferol r t hi m g p
Trong lá Chùm Ngây r

ng vitamin C nhi u

n, vitamin A nhi
l n, ch t s t nhi

loài cây khác [25].

t 4 l n, canxi nhi

i bó xôi 3 l n, vitamin E nhi

kali nhi

a4

nh nhân 3 l n,

i 3 l n [22].

Theo báo cáo ngày 17/7/1998 c a Campden and Chorleywood Food
Research Association in Conjunction
ng c a qu

b

ng

t khô c a lá cây Chùm Ngây

[23].

.
STT

THÀNH P

01

TRÁI
KHÔ
86,9 %

75,0 %

7,5 %

02 Calories

26

92

205

03 Protein ( g )

2,5

6,7

27,1

04

0,1

1,7

2,3

05 Carbohydrate ( g )

3,7

13,4

38,2

06

4,8

0,9

19,2

07

2,0

2,3

_

08 Ca ( mg )

30

440

2003


8

09 Mg ( mg )

24

25

368

10 P ( mg )

110

70

204

11 K ( mg )

259

259

1324

12 Cu ( mg )

3,1

1,1

0,054

13 Fe ( mg )

5,3

7,0

28,2

14 S ( g )

137

137

870

15 Oxalic acid ( mg )

10

101

1,6

16 Vitamin A - Beta Carotene ( mg )

0,11

6,8

1,6

17 Vitamin B - choline ( mg )

423

423

-

18 Vitamin B1 - thiamin ( mg )

0,05

0,21

2,64

19 Vitamin B2 - Riboflavin ( mg )

0,07

0,05

20,5

20 Vitamin B3 - nicotinic acid ( mg )

0,2

0,8

8,2

21 Vitamin C - ascorbic acid ( mg )

120

220

17,3

-

-

113

23 Arginine ( g/16gN )

3,66

6,0

1,33 %

24 Histidine ( g/16gN )

1,1

2,1

0,61%

25 Lysine ( g/16gN )

1,5

4,3

1,32%

26 Tryptophan ( g/16gN )

0,8

1,9

0,43%

27 Phenylanaline ( g/16gN )

4,3

6,4

1,39 %

28 Methionine ( g/16gN )

1,4

2,0

0,35%

29 Threonine ( g/16gN )

3,9

4,9

1,19 %

30 Leucine ( g/16gN )

6,5

9,3

1,95%

31 Isoleucine ( g/16gN )

4,4

6,3

0,83%

32 Valine ( g/16gN )

5,4

7,1

1,06%

22 Vitamin E - tocopherol acetate


9

2.1.4.2. Giá tr

c li u

Theo kinh nghi m dân gian

lá Chùm Ngây

kho ng 300 ch ng b nh khác nhau.

m t s qu c gia khác

Trung M , Saudi Arabia, và Vi

stan,

d ng Chùm Ngây làm thu c

ch a b nh, khoa h c hi n
d ng c

phòng và tr

y là m t s tác
c ch ng minh b ng th c nghi m.

Các qu

ns d

ch

c li u k t h p

i b nh hi m nghèo, b

b

phòng và tr

ng, thi

t y, viêm nhi m, m

dày, ng

c

c th n kinh, tr ch ng b t l
mu n tình d c.

ng kh

c bi t h p ch t zeatin v

c ch ng lão hóa m nh m

trong Chùm Ngây g p vài ngàn l n so v i b t k m
Chùm Ngây là cây có 2 h p ch t phòng và ch

ng s phát tri n c a kh i u,

khi

[10].

cm

Ho t tính ch ng viêm, kh i u: Theo các b ph
hoa, lá, r

c s d ng trong bài thu c dân gian ch

[21].

Ho t tính kháng n m gây b nh: D ch chi t thô và d u cây Chùm Ngây có
ho t tính kháng các lo i n m Dermatophyte gây các b nh ngo
Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, Epidermophyton floccosum
và Microsporum canis.
Ngoài ra,

m ts

s n xu t các s n ph

và các
ng da, th c ph m ch

[19].

2.1.4.3. Giá tr kinh t

, là


10

-900g
/

, sau 6 tháng

trung bình 2500kg lá /hecta/tháng
tháng/hecta [16].
2.2. Khái
2.2
Nuôi c y mô t bào th c v t là quá trình nuôi c y in vitro các nguyên
li

n r , v y c hay m

h

c nuôi c y trong ng nghi m v

thích h p

c phù
u ki n vô trùng

t o thành mô hay cây hoàn ch nh.
mc

t o ra s

ng

s nhân gi ng cao nên có th

ng cây l n trong th i gian ng n; Th c hi

thu

u ki n t nhiên; T o ra cá th m i gi

c tính c a cây ban

u [2].
2.2.2.

a

2.2

nuô

a t bào th c v t
Gottlieb Haberlandt (1902) nhà th c v t h

u tiên cho nuôi c y mô t bào th c v
a t bào trong cu

thuy t v tính toàn

c nghi m v nuôi c y t bào tách r

Theo ông m i t bào b t k c

sinh v t nào

thông tin di truy n c
ch nh khi g

t n n móng

u mang toàn b

ó kh

ng
hoàn

u ki n thu n l i [2].

2.2.2.2. S phân hóa và ph n phân hóa

th c v t hình thành là m t chính th th ng nh t bao g m nhi
quan ch

c hình thành t nhi u lo i t bào khác nhau. Tuy

nhiên t t c các lo i t
t ).

u b t ngu n t m t t

u tiên (t bào h p

u, t bào h p t ti p t c phân chia hình thành nhi u t bào


11

các t bào
phôi sinh này chúng ti p t

c bi

i thành các t

c hi u

(

u Hùng, 2003) [7].

S phân hóa t bào là s chuy n các t bào phôi sinh thành các t bào mô
m b o các ch
bi u th

u. Quá trình phân hóa t bào có th

[3].

Quá trình phân hóa t bào:
T

bào phân hoá

Tuy nhiên, khi t

bào có ch

bi t, chúng không hoàn toàn m t kh
c n thi t,

ic

ng h p

u ki n thích h p, chúng có th tr v d ng t bào phôi sinh và

phân chia m nh m

i là ph n phân hóa t

cl iv is

phân hóa t bào [9].
Phân hóa t bào

T bào phôi sinh

t bào dãn

t bào chuyên hóa

Ph n phân hóa t bào
Hình 2e.
V b n ch t thì s phân hóa và ph n phân hóa là m t quá trình ho t hóa,
c ch các gen. T i m t th
m ts

n cá th , có

c ho t hóa (mà v

m i, còn m t s gen khác l i b

c nay b
ho

c ch

cho ta tính tr ng
u này x y ra theo m t

c mã hóa trong c u trúc c a phân t ADN c a m i t bào
khi

ng phát tri n c

th c v

c hài


12

hòa. M t khác, khi t bào n m trong m t kh i mô c

ng b

c

ch b i các t bào xung quanh. Khi tách riêng t ng t bào ho c gi m kích
c c a kh i mô s t

u ki n cho s ho t hóa các gen c a t bào [6].

2.3

quá trình

2.3

y
V t li u nuôi c y là ngu n nguyên li u kh

u cho nuôi c y mô t bào

th c v t.
V t li u nuôi c y

ng khá l n t i k t qu nuôi c y. V nguyên t c

m i t bào c a mô chuyên hóa
u có kh

, lá, ch

sinh v t

t li u nuôi c y. Tuy nhiên, th c t tùy t ng lo i t bào

và các lo i mô khác nhau mà k t qu phát sinh hình thái khác nhau, v i kh
o ch i r hay mô s o [12].
Vì v y vi c ch n m u c y cho phù h p ph

vào: Tr ng thái sinh

lý hay tu i c a m u, m u non tr có s ph n ng v

u ki n và môi

ng nhanh, d tái sinh. Ngoài ra mô non m

m nh, m

nhi m m m b

2.3

n vô trùng

ng

[11].

i u ki n vô trùng là yêu c u quan tr ng nh t quy

c tiên

s thành b i c a vi c nuôi c y. Toàn b quá trình nuôi c y in vitro c
b

u ki n vô trùng tuy

vô trùng d ng c

n
m

i. Vô trùng bao g m: Vô trùng phòng nuôi c y,
ng, vô trùng m u c y [11].

2.3.3.

ng hóa h c cung c p ch
sinh

ng và phân hóa c a mô trong su t quá trình nuôi c y in vitro.

Thành ph n c
m

n c n thi t cho s

ng hóa h

i theo loài cây, b ph n cây,

ng có các nhóm ch t sau [8].


13

a, Nhóm nguyên t

ng

Nguyên t

ng là nh ng nguyên t mu
c s d ng

n

trên 30 ppm. Các nguyên t này có ch c
i ch t gi a các t bào th c v t v i môi

ng và xây d ng nên thành t
vi c hình thành ch i, v

ng nhi u nito thích h p cho
ng nhi u kali s

i

ch t di n ra m nh m [2].
b, Nhóm các nguyên t
Nguyên t

ng
ng là nh ng nguyên t

c s d ng

i 30 ppm g

c nm

nh

ng nuôi c

cho s

n
ng

n không th thi u

ng và phát tri n c a mô. N u thi u Fe quá trình phân chia c a

t bào b r i ro n, thi u bo mô nuôi c y phát tri n mô s o r
hi u su t tái sinh th
t

ng c a các nguyên t

ng ph thu c vào t

ng và các nguyên

ng nuôi c y và t

ng nuôi

c y [2].
c, Ngu n cacbon
M c dù m u c y v n có kh
b sung thêm ngu

t y u vì v y ph i
m u c y có th t ng h

iúp t

c các ch t h u

ng ngu n cacbon b

saccharose và glucose v i li

ng

ng 20-30g/l dung d ch [2].

d, Các Vitamin
Theo Czocowoki (1952) thì mô t bào th c v t khi nuôi c y in vitro v n
có kh

ng h

nhu c u c a chúng.

Vì v y ph i b sung các vitamin c n thi

ng nuôi c y

góp

ph n t o các cô enzyme xúc tác các ph n ng sinh hóa trong t bào. Các
cs d


14

panthotenic), B5 (axit nicotinic), B6 (piridoxin) v i n
1mg/l. Myo

ph bi n là

c s d ng vì nó có vai trò quan tr ng

trong sinh t ng h p thành t bào th c v t [8].
e, Các ch t ph gia h
Các ch t ph

a

ng nuôi c y nh m kích thích s

ng c a mô s

c d a, khoai tây, chu i,

d ch chi t n m men. Trong thành ph n c
h

ng, Myo

c d a ch a các axit amin, axit

inositol và các ch t có ho t tính Auxin, các gluoxit c a

Cytokinin. Ngoài ra, khoai tây và chu

c s d ng, vì trong

thành ph n c a chúng có ch a m t s vitamin và các kích thích t có tác d ng
tích c

ns

ng, phát tri n c a m u c y [8].

f, Các ch

ng (giá th )

M t s ch

c s d ng

t o thành giá th cho m u phát tri
làm t rong bi n và có kh
t nt i

ng nuôi c

ây là m t lo i polysaccharid
800C agar ng

c cao,

i 400C nó t n t i

tr ng thái l ng, còn
ng có tính axit cao, kh

cl

c và

tr ng thái r n. Trong

c c a agar gi m. N

ng s d ng 5-8g/l [2].
g, PH c

ng

Là y u t quan tr ng, nó
ch

ng t

ng tr c ti p t i quá trình h p th các

ng vào m u c y. Th c t

th p (PH < 4,5) ho

u gây ra c ch

tri n c a mô và t bào nuôi c y. N u PH c a môi
làm r i lo
ng c a m u c

ng minh khi PH
ng, phát

ng gi m m nh m s

i Fe, làm gi m hay ng ng h n quá trình sinh
ng PH

nuôi c y mô t bào th c v t [15].

ng trong kho ng t 5,5

6,5 trong


15

h, Các ch t

u ti t sinh tr

Các ch

u ti t

ng

ng là thành ph n không th thi u trong môi

ng nuôi c y, có vai trò quan tr ng trong quá trình phát sinh hình thái th c
v t. Hi u qu c a ch
c a ch

ng ph thu c vào: N

u hòa sinh

, ho t tính

ng và y u t n i sinh c a m u c y [8].

D a vào ho t tính sinh lý phân chia ch
nhóm: Nhóm ch

u ti t

ng thành 2

ng và nhóm ch t c ch

Trong nuôi c y mô, t bào th c v t, nhóm ch

ng.
ng là nhóm

c s d ng [4].
c phát hi n l

trai là Francis Darwin khi th nghi

ng sáng trên cây y n m ch. Sau

u nhà khoa h
này.

u tiên b i Charles Darwin và con

u và d n m r ng hi u bi t v nhóm ch t
th c v t t p trung nhi u

m m, trong ph n hoa. Auxin có nhi
và phát tri

các ch i, lá non, h t n y

ng t i các hi u

ng

th c v t. C th

ng t i tính

ng c a th c v t, tiêu bi
gây ra hi

t. Auxin

nh (s

nách). Auxin kh

ng c a ch

nh s

c ch ch i

ng vi c hình thành r bên và r ph do kích thích s

phân chia c a t bào tr bì

s

ng xuyên qua v và bi u bì.

n vi c hình thành ch i hoa, s phát tri n
c a qu và làm ch m s r ng lá [4].
c s d ng là NAA, IBA, 2,4D (các auxin nhân
t o), IAA (auxin t nhiên). Ho t tính c a các ch
t y
nhi

c x p theo th t

n m

yc m v i

và d phân h y trong quá trình h p kh

nh

ng nuôi c y mô. NAA và 2,4D không b bi n tính
cao. Tuy nhiên ch t 2,4D là ch t d
phân chia t bào và hình thành callus [4].

ng nh

nhi
ns