Báo cáo thực hành Định lượng Vitamin B12 bằng quang phổ UVVIS

BÁO CÁO THỰC HÀNH
ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN B12 BẰNG
QUANG PHỔ UV-VIS
I.
Định tính vitamin B12
1. So sánh phổ của 2 dung dịch
 Tiến hành
- Quét phổ dung dịch chuẩn 30ppm và dung dịch thử mẫu G trong cuvet thạch
anh với bước sóng từ 240-640nm.
- Nếu thu được hai phổ trùng nhau hay tương tự nhau thì chứng tỏ trong dung
dịch thử có chứa vitamin B12.
 Kết quả:
- Phổ của dung dich thử mẫu G:

- Phổ của dung dịch thử mẫu G và dung dich chuẩn:


- Nhận xét: Hai phổ tương tự nhau và có cực đại hấp thụ giống nhau chứng tỏ
có vitamin B12 trong dung dịch thử.
- Kết luận: Trong dung dịch mẫu thử có chứa vitamin B12.
2. Dựa vào đặc trưng của phổ
Vitamin B12 ,dung dịch 0,0030% trong nước có 3 cực đại hấp thụ ở 3 bước
sóng 361±1 nm, 550±2 nm, 278±1 nm
 Tiến hành
- Quét phổ trong cuvet thạch anh với bước sóng từ 240-640nm.
- Tính các tỷ số hấp phụ.
- So sánh với tỷ số của B12.
 Kết quả
A

549

0,2356

361
0,7598

278
0,5716

→== 3,22
Tỷ số này nằm trong khoảng tỷ số hấp phụ (3,15-3,45) của vitamin B 12, chứng tỏ
trong dung dịch mẫu thử có chứa vitamin B12.


II.
Định lượng vitamin B12
1. Phương pháp đo trực tiếp.
- Đo mật độ quang của dung dịch phân tích mẫu thử ở bước sóng 361nm
- Từ công thức A=E1%1cm .l.C
Với A=0,7598;

E1%1cm=207

l=1cm;

→ Cthử= 36,7.(g/ml) = 36,7 ppm
Vậy nồng độ của dung dịch phân tích mẫu thử là 36,7 ppm
2. Phương pháp đường chuẩn
 Tiến hành
- Pha một dãy dung dịch chuẩn B 12 có nồng độ lần lượt là 10ppm, 20ppm,
30ppm, 60ppm, 100ppm từ dung dịch chuẩn 1000ppm.

- Quét phổ của 5 dung dịch chuẩn và dung dịch thuốc thử mẫu G ở bước sóng
361nm.
 Kết quả

C (ppm)
A

10
0,3028

20
0,50385

30
0,75195

Gọi y là biến của độ hấp thu
x là biến của nồng độ
Phương trình đường chuẩn có dạng y = ax + b
Với a = = 0,0218
b=

= 0,0741

60
1,33435

100
2,2807

Với A361Thử=0,7598
- Phương trình hồi quy tuyến tính là A=0,0218C + 0,0741
→ Cthử= 31,45 ppm
3. Phương pháp so sánh một điểm.
- Theo nguyên tắc so sánh thì chọn một điểm so sánh càng gần với nồng độ
cần xác định thì phép so sánh càng chính xác.
Với A361T =0,7598. Ta chọn ra dung dịch có độ hấp thụ quang gần với 0,7598
nhất, đó chính là C3 có A3=0.75195
Ta có công thức:
=  =  Ct= 30,31ppm
Vậy nồng độ vitamin B12 có trong dung dịch phân tích mẫu thử là 30,31ppm
● Khi dùng ba phương pháp khác nhau để tính nồng độ dung dịch thử, ta thu được
các kết quả có độ chênh lệch khá nhỏ