Nghiên cứu khả năng hấp thụ thuốc diclofenac của màng cellulose vi khuẩn lên men từ môi trường chuẩn

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI 2
KHOA SINH-KTNN

NGUYỄN THỊ NHƢ HOA

NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG HẤP THỤ
THUỐC DICLOFENAC CỦA MÀNG CELLULOSE
VI KHUẨN LÊN MEN TỪ MÔI TRƢỜNG CHUẨN

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
Chuyên ngành: Sinh lý học ngƣời và động vật

Ngƣời hƣớng dẫn khoa học

ThS. NGÔ THỊ HẢI YẾN

HÀ NỘI, 2018


LỜI CẢM ƠN
T
hiệ

g

h h

hv

ỡ

h

h

y

về mọi mặ ừ

Q

ây

i ũ g xi gửi ời ảm ơ

hầy

ih

h h h

Lầ
h g

gi

g h

pv h
ầ

iê

T i xi

hƣ

g

bạ bè. Đặ biệ

giúp

hầy

ủ việ NCKH & ƢD

i phò g Đ

ạ T ƣờ g ĐHSP H

ghiê
v

hâ

Si h - KTNN

h v bạ bè

hiệ

h h i h
hầy

ƣợ

ạ mọi iề

iệ giúp ỡ

.

ảm ơ gi

h họ

h

ƣ phạm H Nội 2.

Nội 2
T i xi

i

hầy

h ủ ThS. Ng Thị Hải Yế

T ƣờ g ại họ

ủ

hiệ

h
ứ

hỗ ợ

i

g

ố

hế

ê

y.
h

g hiế
bạ

ộ g viê

họ hơ

hời gi

.T i

i h viê

m g h
h

ủ

ò hạ
ƣợ

g p

ih

h h hơ .

h h ảm ơ !
Hà Nội, ngày 05 tháng 5 năm 2018
Sinh viên thực hiện
Hoa
Nguyễn Th Nhƣ Hoa

i
b

LỜI CAM ĐOAN
T i xi

m

h

g g viế

g h

“Nghiên cứu khả

năng hấp thụ thuốc Diclofenac của màng cellulose vi khuẩn lên men từ
môi trƣờngchuẩn”

g

ế hừ v ph h y h
h

ƣ i

ƣợ

h

iệ

hƣ

g

í h
bổ

h

ủ

iv h

h ghiê

ứ

iê

ghiệm v

xử

g ù g ặp v i b

mộ ố
g h

g

ứ

ủ ThS. Ng Thị Hải Yế . T

h p ừ h
hép v

g

h ghiê

iệ
h

ủ mộ ố

h h ê
ủ
ả h

ứ

i iệ

h g
.T

g ề

giả. T i xi phép

ủ m h. Nế

i

giả

g ố iệ

hố g ê h

ơ ở

i ủ

ề
ố
i

giả ƣợ

í h

hị

h

i xi h

hiệm.
Hà Nội, ngày 05 tháng 5 năm 2018

Sinh viên thực hiện
Hoa
Nguyễn Th Nhƣ Hoa


MỤC LỤC
MỞ ĐẦU ........................................................................................................... 1
1. Lí

họ

ề i ............................................................................................ 1

2. Mụ

í h ghiê

ứu ..................................................................................... 2

3. V t liệ v phạm vi ghiê
4. Ý ghĩ h c tiễn củ

ứu .................................................................... 2

ề i........................................................................... 3

NỘI DUNG ....................................................................................................... 4
CHƢƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU ........................................................... 4
1.1. Gi i thiệu tổ g

ối ƣợ g v ĩ h v

ghiê

ứu ............................ 4

1.1.1 Thuốc diclofenac ...................................................................................... 4
1.1.2. M g BC ................................................................................................. 6
1.1.3. T h h h ghiê
1.1.3.1. T ê

ứu về m g BC ở Việ N m v

ê

hế gi i ............ 9

hế gi i ......................................................................................... 9

1.1.3.2. Ở Việt Nam ........................................................................................ 10
CHƢƠNG II: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ............. 11
2.1. Ng yê v t liệ

ghiê

ứu ..................................................................... 11

2.1.1. Chủng vi sinh ........................................................................................ 11
2.1.2. V t liệ
2.1.3. Thiết bị v

ghiê

ứu ............................................................................... 11

ụng cụ................................................................................ 12

2.2. Phƣơ g ph p ghiê

ứu.......................................................................... 13

2.2.1. C h bố í hí ghiệm ........................................................................... 13
2.2.2. Phƣơ g ph p ghiê

ứu....................................................................... 13

2.2.2.1. Tạo chủng vi khuẩn Acetobacter từ dị h

x h ê me v chế tạo

hệ mạ g ƣ i BC ............................................................................................. 13
2.2.2.1.1. Tạo chủng vi khuẩn Acetobacter từ dị h

x h ê me ............ 13

2.2.2.1.2. Chế tạo hệ mạ g ƣ i BC ................................................................ 13


m g BC ƣ c khi h p thụ thuố

2.2.2.2. Xử

h gi

ộ tinh khiết của

m g BC .......................................................................................................... 14
2.2.2.2.1. Xử

m g BC ƣ c khi h p thụ thuốc ......................................... 14

2.2.2.2.2. Đ h gi
2.2.2.3. Xây
2.2.2.4. X
thuố

ộ tinh khiết củ m g BC .............................................. 15

g ƣờng chuẩn diclofenac. ................................................... 16
ị h ƣợng thuố

ƣợc h p thụ v

2.2.2.5. Xử

ƣợc h p thụ v

m g BC. Tí h hiệu su t

m g ........................................................................ 16

hố g ê .................................................................................... 18

CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ................................................ 19
3.1. Tạ m g BC từ vi khuẩn A. xylinum ...................................................... 19
3.1.1. Tạo chủng vi khuẩn Acetobacter từ dị h

x h ê me ................. 19

3.1.2. Tạo m g BC ........................................................................................ 20
3.2. Th m g BC h ..................................................................................... 21
3.3. Xử

m g BC ƣ c khi h p thụ thuốc .................................................. 21

3.4. Xây

g ƣờng chuẩn Diclofenac ......................................................... 22

3.5. Khả

hả ă g h p thụ thuốc củ m g BC ...................................... 23

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ......................................................................... 30
I. KẾT LUẬN .................................................................................................. 30
II. KIẾN NGHỊ ................................................................................................ 30
TÀI LIỆU THAM KHẢO ............................................................................... 31


DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT

Â. xylinum

Acetobacter xylinum

cs

Cộ g

BC

Ce

ĐHSP

Đại họ Sƣ phạm

NCKH&UD

Nghiê

ứ Kh

Nxb

Nh x

bả

MT1

M i ƣờ g 1

MT2

M i ƣờ g 2

MT3

M i ƣờ g 3

PC

Plant cellulose

OD

Optical density

e vi h ẩ
họ v Ứ g ụ g


DANH MỤC BẢNG
Bả g 2.2. C

hiết bị sử dụ g

g ghiê

Bả g 2.3. Th h phần của m i ƣờ g ê me

Bảng 3.1. Nồ g ộ diclofenac v gi
Bảng 3.2. Gi

ứu ............................................ 12
h m g BC ....................... 14

ị OD ƣơ g ứng (n = 3) ..................... 22

ị OD h p thụ thuốc củ m g BC (n = 3) ............................. 24

(OD - 278 nm) ................................................................................................. 24
Bả g 3.3. Lƣợng thuốc h p thụ v
Bảng 3.4. Hiệu su t thuốc h p thụ v

m g BC tại thời i m 2 giờ ................. 26
m g BC trong 2 giờ ........................ 27


DANH MỤC HÌNH
H h 3.1. Dị h

ƣờ g ê me

H h 3.2. M g BC ƣợ

i

7-10 g y ........................................... 19
g m i ƣờng chuẩn ................................. 20

H h 3.3. M g BC

ộ

y 0 5 m............................................................. 21

H h 3.4. M g BC

ộ

y 1 m................................................................ 21

H h 3.5. Phƣơ g

h ƣờng chuẩn của Diclofenac .................................... 23

H h 3.6. M u l y

OD

hời gian h p thụ ......................................... 24

H h 3.7. Bi u hiệu su t h p thụ củ m g BC ê me
v i h

h g ép

H h 3.8. Bi
chuẩn v i h
H h 3.9. Bi

chuẩn v i ộ
H h 3.10. Bi
chuẩn v i ộ

ừ m i ƣờng chuẩn

ại ƣ c ...................................................................... 27

ồ hiệu su t h p thụ củ m g BC ê me
ép

ừ m i ƣờng

ại ƣ c 50% .............................................................. 28

ồ hiệu su t h p thụ củ m g BC ê me

ừ m i

ƣờng

y 0 5 m .................................................................................. 28
ồ hiệu su t h p thụ củ m g BC ê me

ừ m i ƣờng

y 1 m ..................................................................................... 29


MỞ ĐẦU

1. Lí do chọn đề tài
Di

fe

h

ủ

e i . Th ố
Di

fe

ụ g
mộ

giảm
h

h

g

ạ

g gi

ủ

ip xyge

i

ev

T y hiê

ứ

g

i

h ù g h ố

hâ phù

hắ phế

ị ứ g ( ặ biệ

Đối v i phụ

g iệ

h iv

ƣ

y h

fe

y)
y

m
h

g

ƣờ g

e

ại phâ

hối h

v

ũ g hƣ ại iệ

h gặp h
ầ

h

bồ

ă

g ê
y

vù g

iê ù

ê

h

mờ

ghiê

iề

ị.

ứ vè ộ
bú h g

ƣợ g ù g v i bệ h

g h .
h h phầ

p yme

ả phẩm

i

g phả vệ

g h

i

h

mắ

ù g v hƣ

ối v i phụ

ụ g

hồ

h
ả

mẹ. Giảm iề

ử phổ biế

g

h gặp g y ả ở iề

h í h ũy diclofenac

e vi h ẩ (BC)

e

ũ g iề hò

hắ phế

b i iế

Ce
Ce

xyge

ả ở gƣời bệ h he ) h

ẻ em h

y

giảm ố mạ h.

y i v h mb x

g bụ g

hứ g

ủ h ố v i 2 ối ƣợ g
ù gv h ố

y

hƣ: hứ

p viêm mũi m y
h

v

gƣời bệ h

h ố ở bộ m y iê h

hứ mắ ,… Đây

hố g viêm h g

ầ .

hảy

hâ

p

h viêm. Di
ế ụ i

ả ụ h yế

h ố

hế mạ h h ạ í h ủ

hƣợ g vị b ồ

ê

ei

hố g viêm giảm

h hp

g

phụ hẹ ủ

phe y

hí h ủ

g ại b

ổi h

ơ

pv

i h

ủ vi i h v .
hủ yế

ạ m g

bả vệ.
BC ƣợ

ạ

ừ h

g ợi mi

h h mạ g ƣ i e
ă g h m hú

fib i ạ

e v i ộ bề

ƣờ g í h ợi h

i h hiế

. Ng i

ồ g hời

mộ h g

m g BC ò
ả

xi v

ơ họ

h

gb

ợi

hứ

g

ộ i h hiế

hả ă g p yme h
i hv

1

ê

hiề

v

ƣỡ g h
h

gă

ả

g
hả

ạ g h i
xi h

ơ

phâ hủy


ơ h

ở

g ếb

í h ộ
h hú

ả

ƣờ g m g ồ

ƣợ

hú

ủ

ƣợ ứ g ụ g

gi y m

BC ƣợ

ổi ộ h

m g BC ò

ù g

ộ g ủ UV, … Nhờ h

ủ

ù g

m h

1989)

m

phẩm m g BC ƣợ
phẩm ợi ụ g h

ử ụ g
ghiê

y. N

họ

g y ừ ử

ĩ hv

h

h

hƣ: T

ử h

ƣợ g

gi y iệ

m g ặ biệ
ợi

g

ei h y h

ắ

b

h

g

g

g

xử í ƣ

v

,

ếb

m i ƣờ g ơ h
.T

g ĩ hv
g ĩ hv

v

h y

ầ

mỹ
ƣợ

h ố .

ứ v ứ g ụ g m g BC ò ở mứ

ƣợ

giảm

g ghiệp

ợi pi v

ủ m g BC
ừ g ại bƣ

XIX v

;T

í. T

ạ ƣỡ g

g

h 1998). Ng i

m g BC ê m i ƣờ g h ẩ

hắ phụ

g

h

mộ
v

hế

h

yề

m mặ

ứ ứ g ụ gm i h

í h ạ

i h họ

iệ m i hiệ

h

ố ị hp

g ặ í h

Ở Việ N m việ
V i mụ

h

g ặ

g ồ p yme m i

(Brown, 1989, Jonas v F

ử ụ g

ghiê

mộ

g yê

ả x

ƣ

ă g ƣợ g (B w

ố

i

ử ụ g m g BC m m g phâ

ƣợ

g i h họ

hiề

g hiề

nghiệp m i ƣờ g
biế

gă

ê m m g BC ƣợ

giải ph p ê
hiệ

v

ộ hiêm

ghiê

ứ .

ừ

hế ạ m g

ụ g phụ ă g hả ă g h p hụ ủ

h ố

i

fe

hố g viêm hạ ố . Đ

í

hú g

i

họ

ề

i: “Nghiên cứu khả năng hấp thụ thuốc Diclofenac của màng

cellulose vi khuẩn lên men từ môi trƣờng chuẩn”.
2. Mục đích nghiên cứu
Thiế

ế hệ hố g m g BC ê me

diclofenac v
hiề

ghiê

ứ

ừ m i ƣờ g h ẩ

hả ă g h p hụ h ố

h .

3. Vật liệu và phạm vi nghiên cứu
-V

iệ

ghiê

ứ :

2

ƣợ

ạp h ố

m g BC h p hụ ƣợ


+ M i ƣờ g h ẩ : 20 w/v g
2,0 w/v MgSO4.7H20; ƣ

e; 2 0 w/v (NH4)2SO4; 2,0 w/v KH2PO4;

ừ : 1000 m ; pH 5 0; S/V = 0 38.

+ M g BC.
+ Th ố diclofenac.
- Phạm vi ghiê
- Nội

+N

ứ : Nghiê

g ghiê

ứ

h

hiệ ở

y m phò g hí ghiệm

ứ :

i ạ m g BC ê m i ƣờ g h ẩ .

+ Nghiê

ứ

+ Nghiê

hả ă g h p hụ diclofenac ê m g BC
ứ

ạ

iề

iệ

hí h hợp ă g

hả

i ạ

ƣợ .

ă g h p hụ h ố

diclofenac ê m g BC.
4. Ý nghĩa thực tiễn của đề tài
- Ý ghĩ

h

họ : xây

ƣờ g h ẩ ; ạ

iề

iệ

g ƣợ

iề

- Ý ghĩ h
h ố ố

h

ị giảm

ƣợ

h

ê m i

hả ă g h p hụ diclofenac

g

ụ g phụ h

gm gm ố

hố g viêm bằ g diclofenac.

iễ : Từ ế
ải hiệ

h ạ m g BC ê me

hí h hợp â g

ê m g BC hằm hắ phụ
g việ

y

hƣợ

ả ghiê

ứ

họ

ƣợ

i m ủ h ố dicclofenac

3

ƣờ g hợp h p hụ
g iề

ị bệ h.


NỘI DUNG
CHƢƠNG 1
TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. Giới thiệu tổng quan đối tƣợng và lĩnh vực nghiên cứu

1.1.1 Thuốc diclofenac
Tê

ố ế: Diclofenac

L ại h ố : Th ố

hố g viêm h g e i .

Dạ g h ố v h m ƣợ g:
é : 25mg 50mg 100mg.

-Viê

-Ố g iêm: 75mg/2m 75mg/3m .
ạ : 25mg 100mg.

-Viê
-Th ố

ƣ

h mắ : 0 01%

-Th ố ge
T

ụ g: Di

h g

Di

x

h

fe

h

e i . Th ố

fe

giảm

g i 10mg/g

mộ
ạ

g gi

ủ

ip xyge

ev

i phe y

ei

ụ g hố g viêm giảm

h

g

ủ

ứ

hế mạ h h ạ í h ủ

h hp

g

i

p

hố g viêm

v giảm ố mạ h.
xyge

e

y i v h mb x

h viêm. Dic fe
ế ụ i

y

h ố

ũ g iề hò

m
h

g

ƣờ g

ầ .

+ Chỉ định:
Điề

ị v i g y viêm h p mạ

h ih

h p.

Thố g i h g yệ ph .

Đ

p ( viêm

Viêm
+ Chố g h
Q

m

h

hƣơ g ƣ g ề) v

h p ạ g h p hiế

mạ .

iê .

ị h:
v i i

fe

h ( he viêm mũi m y

pi i h y h ố
y

hi

g

4

hố g viêm h g

pii )

e i


L é

ạ

y iế

i .

Ngƣời bị he h y
ặ gh ặ

yg

Ngƣời

hắ phế

hảy m

g

g h ố

hố g

y im ứ m

y h

ộ ọ

ầ

h

ử

é

hảy m

ố

y h

g

giảm h

m i
í h

ầ h

<30m /phú (

h ố

g y ơx

ợi iệ h y

hiệ

y h )

ọ g:

Ngƣời

iề

Ngƣời bệ h

y h

yg

h ặ hủ g ƣờ g iê h .
bị

p

b

Ngƣời bệ h ă g h yế p h y bệ h im
Ngƣời
iề

bệ h im mạ h

ặ g.

Ngƣời bị
+ Th

ả

ị

iề

ử bệ h g . Cầ

i g y bằ g i

fe

h .
ứ ƣ

he

h ặ phù.

õi hứ

ă gg

hƣờ g ỳ hi

.

Ngƣời bị hiễm h ẩ .
Ngƣời
Cầ

iề

ử bị ối

h m h

ạ

h

gm

h

hảy m .

gƣời bệ h bị ối

ạ

hị gi

hi

g

diclofenac.
Di

fe

+T

h mắ

ƣ

g bụ g h

Í gặp:

é iế

i

ầm ảm m
h ẩ

m h m iề

ẹ .

ụ g phụ:

Thƣờ g gặp: hứ
hảy

h

h

bồ

ă

h

phù
m

gủ

giảm bạ h ầ

hiễm ộ g

ầ

hồ
iê ù i

ịứ g
m

â

bụ g hảy m
hảy

h

hị

giảm i

viêm b g

vù g hƣợ g vị b ồ

g

m

ƣờ g iê h

í h ứ g ại hỗ b ồ

ễ bị í h hí h viêm m g

ầ

hiế m

im

5

y h

ối

ạ

mổ
gủ
v

b p úi m

p hội hứ g h

hƣ.


1.1.2. Màng BC
- Ce
e
i h hối h
v . Ce
pv

ại phâ

v

ũ g hƣ ại iệ

e vi h ẩ ( B
hủ yế

ử phổ biế
ei

ê

i

h

h h phầ

p yme

e

e –BC)

hí h ủ

g ại b

ủ vi i h

ả phẩm

ổi h

ơ

ợi

g

ạ m g bả vệ.

Cấu tạo màng BC
- BC ƣợ

ạ

ừ h

h h mạ g ƣ i e

song

hả ă g h m hú
. Ng i

ơ ồ g hời

mộ h g

hủy

ơ h ở
-T

g

l g h h

i

v

ặc biệ

h g ộ v
g h
ứ

ơ họ

gb

ộ i h hiế

hả ă g p yme h
hứ

hiề

i hv
ả

h

v

ƣỡ g h
h

gă

ạ g

xi h
ả

phâ

ộ g ủ UV,….
hi i h hế v

m h

ạ

y 0 01 – 0,5 nm. Sản phẩm

hƣ: ộ tinh sạch cao, khả ă g

h h ản
y

h ng

hồi tố

ộ kết tinh

h bị phâ hủy sinh học, bề mặt tiếp xú

hơ gỗ

h g gây ị ứ g

hả ă g ản khuẩn. V i
ghiê

gă

ê

y ĩ h BC í h ũy ê bề mặ m i ƣờ g i h ƣỡng

ơ họ

g

xi v

hƣ gi y da v i ộ

í h h tr
hƣờ g

ả

p m g m g hƣ

phẩm ƣơ g
ộ bề

m g BC ò

g ếb

fib i ạ

e v i ộ bề

ƣờ g í h ợi h

h i i h hiế

v

g ợi mi

g ghiệp h

í h h
h

hả ă g hịu nhiệt tố

ặc biệt

y BC ƣợc ứng dụng r t nhiều
g

ă g hả ă g v n tải h p thụ của thuố

y họ
â g

ặc biệ hƣ ng
hiệu quả trong

iều trị bệnh.
Ứng dụng của BC
V i h

gƣ

hiề ứ g ụ g ộ g

i m ổi b

BC g y

i.

6

g ƣợ

ghiê

ứ

hiề v


Lĩnh vực ứng dụng

Th

phẩm

Sản phẩm
T

g miệ g ( hạ h ừ )

Ă

iê g ( em

Thị

hâ

ạ

V b

xú xí h

Nƣ

ố g i

T

)

h g

h e e

K b h h y Manchurian

L pm g ịb g
T

Y ƣợ

D

hâ v
hâ

Ch
Mỹ phẩm

h y

h ố

ạ

m

mạ h

M g hâ

ạ

Đ hm g

y v m g hơ

Miế g xốp m ạ h vế
M i ƣờ g
Dầ m
T

H p h

h

Q ầ

gi y ép

ộ
phâ hủy

Th hồi ầ

g phụ

Th h
Sả phẩm ừ g

Sả x

ợi hâ

Y phụ

â

Lề

ắp

p

Gỗ hâ

ạ

h

ạ

ội

Gi y gi y ặ biệ
Thù g h g

Lĩ h v

ầ

L mm g ọ

7

ộ bề

ƣ

hồ ơ


-M g e
hêm h
h

e ƣợ biế

phụ gi h y ơ h
m h y ổi h

ƣờ g

i

y

h

h

g h ộ

yề

iếp

g

ị hv

h ổ g hợp: hi

g

í h ủ BC. Nế

i m

í h h

h ổ g hợp.Th y ổi ộ
nă g h p hụ v

ổi

h ổ g hợp BC h
h

v

h ố

ủ

y ộ ẩm m g ũ g

h ộm v

e

e

m i
g

h ả h hƣở g

i hả

ải h ố .

Đặc điểm phân loại của Acetobacter xylinum
- Vị í phâ

ại

Acetobacter xylinum h ộ

h m vi h ẩ Acetic, chi Acetobacter, họ

Pseudomonadaceae.
- L

ại hiế

hí bắ b ộ

h m

- Đặ

i m vi h ẩ Acetobacter xylinum.
ạ gh h

Acetobacter xylinum
g g h ả g 0 6-0 8 µm
g m âm
ếb

h

iề

T
h

phâ

g m i ƣờ g

ƣợ

h ẩ

ạ

h

mép ơ

m

m

ồi h

fe
- Nhu ầ

i
ồi

ầ

em hơi

. Nhiệ

e g ại b .
g

í h hƣ

h g i hb

i hi xếp h h h ỗi
i

y h h ạ g

h hh ặ
y ắ

h g phâ

ử

hƣ g hi

h bị biế

ổi:

h h.

h ả g ừ3–7 g y

i

y ẽ

ƣờ g í h hạ ừ 2 – 5 mm

ò

h y

g. Nhƣ g

mộ

ầ

h ẩ

ạ

ụ

ầ .

i h ƣỡ g ủ vi h ẩ Acetobacter xylinum
i vi h ẩ hiế

Acetobacterxylinum
h ẩ ph

e

i h ả g 2-3 µm vi h ẩ

iệ m i ƣờ g

i hơ ph h

ả x

e hẳ g h y hơi

g i ộ g ắp xếp iê g ẽ

gi h y

ếb

v

i

ừ 25 – 300C. Ở hiệ

ừ 3- 8 pH ối ƣ

ả x

ộ 370C ế b

250C . Vi h ẩ

ộ hí h hợp h
e

e

8

hí. Nhiệ

5 5.

ẽ bị

ă g ƣở g

ộ ối ƣ

h vi

y h ih
g h ả g pH


Khi
g

i

i
T

y

h hiễm

ei v
e ạ

pm g

y

ạ

gƣời

hƣờ g bổ

m i ƣờ g.

g m i ƣờ g

h h e

i vi h ẩ

i

y

pm g
gv

ạ

g vi h ẩ

ử ụ g ƣờ g

y ê bề mặ

ế

ộ

y h

h y

ủ m i ƣờ g. S

ị h

h

36 – 48h

7 – 19 g y.

- Si h ổ g hợp BC
+Q

h ê me : Ph

i h ƣở g

Ph í h ụ ả phẩm
+Q

h ổ g hợp e

+ M i ƣờ g

i

M i ƣờ g
g ồ

yế
Nh

ò

i

y Acetobacter xylinum

ầ

hiế

yế

m i ƣờ g ổ g hợp ừ

b

i

g ồ

ghị ử ụ g

h ổ g hợp BC ê

ả phẩm hứ
ừ

gi

ƣ

p

g

mí ,...

f

v

ố vi ƣợ g.

ử ụ g ƣờ g ủ Acetobacter xylinum
g

ƣ

hƣ g ồ

ố ă g ƣở g v

ọ g

ƣờ g

y Acetobacter xylinum

i h ƣỡ g ầ

ph ph

e ủ Acetobacter xylinum

hiề
g h

m

v gi v i

g yê

ghiê

ứ v

g ghiệp h
iệ

ề

hƣ:

g

i

y

Acetobacter xylinum.
1.1.3. Tình hình nghiên cứu về màng BC ở Việt Nam và trên thế giới
1.1.3.1. Trên thế giới
Tí h ến cuối ăm 2014

ê

hế gi i m i ch

18 ghiê

dụng BC trong hệ thống v n tải v phâ phối thuố

g
biế

9 ghiê

Nghiê
hi
Me

ứu củ Wei B. v

gâm

ƣợ b

ứu v i m g BC tinh khiế 2 ghiê

ổi m g BC v 7 ghiê
g be z

KG A D m

Đứ )

ứu v i

ứu v i th ch t

h y m g h BC h

i e (mộ

hâ

hả ă g giải ph ng thuố

9

[14]

v t liệu nanocomposite.

(2011) h
i m h

ứu ứng

h g

ƣợc
h ẩn;

ê mỗi ơ vị


í h bề mặ

diệ
ií

ƣợ

0 116 g/ m2 v

m h y

h t 24h chống lại hoạ

ụng của thuố

ộng của S. Aureus v B. Subtilis [24]. Tiềm

ă g v n tải v phâ phối thuốc củ m g BC
bằ g

h tải e

y i e

g hùm e e

ƣợ

hƣởng của BC chiếu xạ. Kết quả ghiê
ò

ghiê

m u chiếu xạ v

chiếu xạ. BC h g hiếu xạ h phép giải ph g h ố
hả ă g v n tải m

é

ứ

y h

ứu

h g ƣợc

h h hơ

v i ảnh

h y m g BC h g h

ề xu t mộ m h h h giải ph g h ốc qua

m g [14].
1.1.3.2. Ở Việt Nam
Ở Việt Nam, việ
hiêm ố
C

ghiê

ghiê

ứ v ứng dụ g m g BC ò ở mứ

ứu ứng dụng m i ch dừng lại bƣ

ết quả ứng dụng củ m g BC hầ

nghiệm. M i ây h m ghiê
g bƣ

ghiê

ứu.

hƣ m i ch dừng lại ở iều kiệ

ứu củ

ầu ứng dụ g m g BC

ầ

ộ
hí

giả Đi h Thị Kim Nhung [7] ũ g
g iều trị b g ê

h .C g

iều

trị b ng bao gồm việc c y ghép ph u thu t, tạo ra một số m g ị b g hƣ
m g ối
gốc từ t
củ

gb

n, da ế h m g hi

hiê

ử dụ g

h

g ồn

ụ g iều trị b g …Từ ăm 2000 h m ghiê

giả Nguyễ Vă Th h v

ộng s [4]

cứu về m g BC từ A. xylinum v bƣ
m g BC h

ƣợ

ơ ở

ầ

một số
ghiê

chế tạ m g i h họ

g

h ghiê

ứu về

ặ

ù g

ứu

í h ủa

g ị b ng ở

Việt Nam.
Điều trị b ng bằ g
từ r

h ố

g ồn gốc từ t

â v phổ biến ở t t cả c

hiê v
hƣơ g vế

hiề

ặ

í h ố

ƣ .C
h

h ố

hiê
y

ƣợ
ẵ

p ụng
g hiê

iều trị b g ũ g hƣ h

é …

M g BC
nguồn gốc từ hiê

hiề ƣ
hiê

i m

ử dụ g

trở h h h
g iều trị b ng.

10

m g

hợp ch

vết


CHƢƠNG II: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Nguyên vật liệu nghiên cứu
2.1.1. Chủng vi sinh
Vi khuẩn tạo cellulose từ dị h

x h ê me

sạch Vi sinh – Động v t, Việ Nghiê

ƣợ

i

y tại Phò g

ứu Khoa họ v Ứng dụ g T ƣờng

ĐHSP H Nội 2.
2.1.2. Vật liệu nghiên cứu
Tê
ƣợ

v iệ ử ụ g
g ghiê ứ v g ồ g
ê ở bả g 2.1:
Bảng 2.1. V iệ ử ụ g
g ghiê ứ

ủ ừ gv

STT

Tên nguyên liệu

Nguồn gốc

1

Diclofenac 99,5%

Trung Quốc

2

D- Glucose

Trung Quốc

3

Axit acetic

Việt Nam

4

Amoni sulfat

Trung Quốc

5

Disodium phosphate

Trung Quốc

6

Axit citric

Trung Quốc

7

Cao n m men

Mỹ

8

Peptone

European Union

9

Natri hidroxit

Việt Nam

10

Nƣ c c t 2 lần

Việ NCKH&ƢD

iệ

T ƣờ g ĐHSP H Nội 2
11

Methanol

Trung Quốc

12

Kali dihidrophotphat

Trung Quốc

11


2.1.3. Thiết bị và dụng cụ
hiết bị sử dụ g

* Thiết bị:

g ghiê

ứ

ƣợ

ê ở bảng 2.2

Bảng 2.2. Các thiết b sử dụng trong nghiên cứu
Thiết b

Nƣớc sản xuất
ù g HV- Nh t Bản

Nồi h p khử

Đ a điểm nghiên cứu
Việ NCKH&ƢD T ƣờng

110/HIRAIAMA

ĐHSP H Nội 2

M y

Việ NCKH&ƢD T ƣờng

g phổ UV- Shimadru - Nh t Bản

ĐHSP H Nội 2

Vis 2450
Câ phâ

í h

Sartorius - Thụy Sỹ

Việ NCKH&ƢD T ƣờng
ĐHSP H Nội 2

Buồng c y v

ù g

Viện NCKH&ƢD T ƣờng

Haraeus

ĐHSP H Nội 2
Binder - Đức

Tủ s y, tủ m

Việ NCKH&ƢD T ƣờng
ĐHSP H Nội 2

IKA - Đức

Khu y từ gia nhiệt

Việ NCKH&ƢD T ƣờng
ĐHSP H Nội 2

*Dụng cụ:

- B h ị h mứ 10m 50m 100m 250m 500m 1000m

- Pipet 1ml, 2ml, 5ml, 10ml, 25ml
- Micropipet 20-200µ
- Erlen 100ml
- Becher 50ml, 100ml, 500ml

Thiết bị ê me
b

ạ m g BC í h hƣ c 1,5cmx1cm (buồ g

24 giế g 1 5 m) b h m gi

ống nghiệm v

12

i

ụng cụ h .

y tế


2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.2.1. Cách bố trí thí nghiệm
- Thí ghiệm 1: Tạ m g BC từ m i ƣờng chuẩn.
- Thí ghiệm 2: Xử

v

- Thí ghiệm 3: D

i m

ộ tinh khiết củ m g BC.

g ƣờng chuẩn diclofenac.

- Thí ghiệm 4: Ch m g ạp thuốc Diclofenac trong khoảng 2h.
- Thí ghiệm 3: Nghiê

ứu so khả ă g h p thụ v

m g bằng một số

phƣơ g ph p ở m i ƣờng chuẩn.
2.2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.2.1. Tạo chủng vi khuẩn Acetobacter từ dịch trà xanh lên men và chế tạo
hệ mạng lưới BC.
2.2.2.1.1. Tạo chủng vi khuẩn Acetobacter từ dịch trà xanh lên men
Đ
phú . S

i 1000m
ọ

h y ề
ƣờ g ê

ƣ

bổ

y ị h
g ội. S
me

ổv

g 20g
v

x h

vi

10 - 15

b h hủy i h ạ h hêm 100g ƣờ g

h ả g 7 – 10 g y ở hiệ

( hứ

g hời gi

h ẩ

ộ 30oC h

ƣợ

ị h

Acetobacter: Acetobacter xylimun,

Acetobacter ketogenum,... ) [17,21] v miế g hạ h ổi ê

ê bề mặ .

2.2.2.1.2. Chế tạo hệ mạng lưới BC.
- Lên men thu màng BC từ một số môi trường:
Tạ m g e

e vi h ẩn (BC)

Hestrin - S h mm ƣợ

hb y

ải tiến từ m i

g bảng 2.3

MT: m i ƣờng chuẩn
Bước 1: Chuẩn bị m i ƣờng [18, 2, 5, 10, 3].

13

ƣờng chuẩn

Bảng 2.3. Thành phần của các môi trƣờng lên men thu màng BC
Th h phần

M i ƣờng chuẩn

Glucose

20g

Pepton

5g

Dinatri phosphat (khan) (Na2HPO4)

2,7g

Acid citric

1,15g

Cao n m men

5g

Nƣ c c t 2 lần

1000ml

Bước 2: H p khử ù g
Bước 3: L y

m i ƣờng ở 1130C

g 15 phú .

m i ƣờng ra khử ù g bằng tia UV

g 15 phú ồi

nguội m i ƣờng.
Bước 4: Bổ sung 10% dịch giố g v 2%

i

ei

ắ

ều tay cho

giố g phâ bố ều trong dung dịch.
Bước 5: Chuy n dịch sang dụng cụ
ù g gạ v

ù g bịt miệng dụng cụ

i

y he

í h hƣ

ghiê

ứu,

ặ ĩ h trong khoảng 4 – 14 g y ở

280C.
Bước 6: Th m g BC h

ửa sạ h hú g ƣ i vòi ƣ c.

2.2.2.2. Xử lý màng BC trước khi hấp thụ thuốc, đánh giá độ tinh khiết của
màng BC
2.2.2.2.1. Xử lý màng BC trước khi hấp thụ thuốc
Mụ

í h: L ại b

thời ph hủy v

g hò

ƣợ

ạp ch t

ộc tố của vi khuẩn.

14

g m i ƣờ g

i

y

ồng


Phƣơ g ph p: T
ƣờ g

i

y ép m g

+ T
NaOH n

g

i

y ĩ h BC tạ

y ở mặ m i

ại b m i ƣờng.

g m g hứa mộ
g 3%, nhiệ

h hm g

ƣợng l n vi khuẩ v v y h p m g

ộ 1130C trong thời gi

ù g HV-110/HIRAIAMA

g

15 phú bằng nồi h p khử

ph vỡ h h ế b

vi h ẩ v giải ph g ội

ộc tố của vi khuẩn trong thời gian 1giờ.
+ Sau khi ngâm N OH v

m g ặ

ƣ i vòi ƣ c chảy ế

m i

ƣờng bề mặ m g BC cầ

trắng trong. Thử quỳ ím i m
g í h

h

hi m g
ạ

ƣợc BC tinh khiết [10, 3].

2.2.2.2.2. Đánh giá độ tinh khiết của màng BC.
Mụ

í h: Nhằm ảm bả m g BC sau khi xử

h gây ộc hại. Ch

ch

ƣợc khả

p

ei

ại ƣợ

ạp

ủa vi khuẩn.

*Tìm sự hiện diện của protein trong màng BC tinh chế
Ng yê
ủ

ủ p

ắ : Đị h í h p
ei v i

i

ei

ò

ại

g m g bằ g phả ứ g ạ

iclor acetic.

Tiế h h: M g BC tinh chế ƣợc cắt nh
kỹ v i m y

ế

g iê âm

g 10 phú . Dù g

h v

50m

ƣ c c t, lắc

g ịch acid triclor acetic 1%

ph hiện s hiện diện của protein trong dịch chiế m g. M u chứ g âm
ƣ c c v m u chứ g ƣơ g
i

g ịch pepton 1% (pep

y vi khuẩn). Phản ứ g ƣơ g í h hi h

m u chứ g âm h

ụ .S

hv i

g hứa protein [23, 7].

M g BC i h hế ù g

h

ết tủ

ử dụ g

ạ m g ạp h ố phải ạ

ƣợ

h

:
+ Cảm

: mềm mại

ẻ

i m g

hả ă g p

í h he phủ ố .
+ Độ ẩm hí h hợp

hả ă g hú

15

ƣ

v

ị h m [15].

v

g í h


2.2.2.3. Xây dựng đường chuẩn diclofenac.
Ng yê

í: Sử dụ g m y UV- 2450 (Shimadru - Nh t Bả )

h p thụ của diclofenac ở

ồ g ộ h

h

: 10% 20% 40% 60% 80% 100%
phƣơ g

i

g 278 m

m u chuẩn diclofenac v i

Th c hiện: Chuẩn bị
g m i hò

v i bƣ

fe

g

(Me h

g phổ

ồ g ộ lầ

ƣợt

g m i Methanol. M u trắ g

). D

g ồ thị ƣờng chuẩ v

p

h h ẩn diclofenac bằng phần mềm Ex e 2010 [8]. Đ kết quả

ộ hí h x
lần l y gi

iế h h ph

ị

gb h

d

g ịch chuẩn 3 lầ v

g phổ 3

g ƣờng chuẩn.

2.2.2.4. Xác định lượng thuốc được hấp thụ vào màng BC. Tính hiệu suất
Lƣợng thuốc diclofenac h p thụ v
h h hử nghiệm ê 4 m

m g e

e vi h ẩ

ƣợc tiến

m i ƣờng chuẩn.

-M

1: Dù g m g e

-M

2: Dù g m g e

e vi h ẩ

ộ

e vi h ẩ

y 0 5 m.
ộ

y 0 5 m ép

ại ƣ c

50%.
-M

3: Dù g m g e

-M

4: Dù g m g e

e vi h ẩ

ộ

e vi h ẩ

y 1 m.
ộ

y 1 m ép

ại ƣ c

50%.
Ch 12 m g v

12 b h

m gi

hứa 25mg thuố

i

. Ch

m y ắc v i

100ml dung dị h Me h

ƣợc khu y

chế ộ lắ 150 vò g/phú . S

h ng khoảng thời gi

2 giờ tiế h h ú m
ƣợng thuố

ò

v

30 phú 1 giờ, 1,5 giờ,

g phổ bằ g m y UV - 2450

x

ịnh

ại trong dung dịch tại thời i m l y m u, từ

x

ịnh

ƣợng thuốc h p thụ v
g

b hv

fe

m g ế gi

, lặp lại hí ghiệm 3 lầ

ị OD h g ổi hoặ h y ổi h g

l y gi

16

ị

gb h

í h

.


L y gi
nồ g
i

ị OD thụ ƣợ

h yv

phƣơ g

h ƣờng chuẩ

ộ diclofenac (C%) trong dung dịch, từ
fe

g

g ị h he

í h

ƣợc

ƣợc khối ƣợng

g hức:
(1)

T

g

C%

:
ồ g ộ phầ

ăm hối ƣợng-th

í h h số mg ch

trong 100ml dung dịch.
hối ƣợng ch t tan trong dung dịch (mg).

mct

mdd hay Vdd

h í h ủa dung dịch (ml).

Khối ƣợng diclofenac h p thụ ƣợ v

m g ƣợ x

ịnh he

g

thức
mht = mtr - ms
T

g

(2)

:

mht: L

hối ƣợ g i

fe

mtr: L

hối ƣợng diclofenac trong dung dị h b

ms: L

hối ƣợ g i

fe

ƣợc h p thụ v
ò

m g BC (mg).
ầu (mg).

ại trong 100 ml dung dịch diclofenac

25% (mg).
T lệ % i
he

fe

ƣợc h p thụ v

m g e

e vi h ẩ

g hức:
EE (%) =
T

g

(3)

:

EE: L phầ

ăm hụố

Qt: L ƣợng thuố
Qd: L ƣợng thuố

ƣợc h p thụ v
hụyết (mg).

ò

ại (mg).

17

m g (%).

ƣợ

í h