SEMINAR xác định độ nhạy của các catechin trong trà bằng phương pháp HPLC (dược PHÂN TÍCH SLIDE)

Chuyên Đề
 Xác định độ nhạy của các
catechin trong trà bằng
phương pháp sắc ký lỏng
cao áp HPLC.


Nội dung

I.Giới
thiệu

II.Thực
hiện

III.Kết
luận

IV.Tài
liệu


1.Sơ lược về nguyên liệu trà.
 Cây trà có tên khoa học là Camellia sinensis (L.) O.Kuntze và
được xếp trong hệ thống phân loại thực vật như sau:
 Ngành hạt kín Angiospermae
 Lớp song tử điệp Dicotyledonae
 Bộ trà Theales
 Họ trà Theaceae
 Chi trà Cameellia (Thea)
 Loài Camellia (Thea) sinensis

I. Giới thiệu
Trà cung cấp một số lợi ích cho sức khỏe, như là giảm
cholesterol và béo phì, và bảo vệ chống lại bệnh tim mạch
và ung thư.
Catechin là chất chống oxy hóa mạnh được tìm thấy trong
trà được cho là để cung cấp một số các lợi ích sức khỏe.


Hình cho thấy cấu trúc của các
catechin có nhiều nhất trong
trà.


Trắng

Đen

Trà

Xanh

Ơ long

Những loại trà chính


Cơng trình này mơ tả một chất lỏng nhạy cảm,
nhanh, chính xác và hiệu suất cao sắc ký

(HPLC) phương pháp để xác định catechins
trong trà.
Phương pháp sử dụng một độ phân giải cao
silica cột 2.2 μm Acclaim® C18 RSLC và bước
sóng 280 nm để tách, phát hiện và định lượng
catechins trong trà trắng, xanh, đen, và pha
trộn trà trắng và trà xanh.


II. Thực hiện
Thực nghiệm
Sử dụng thiết bị sắc khí lỏng cao áp HPLC
Hệ thống SRD – 3600
Bơm DGP 3600RS
Tấm ngăn mẫu WPS-3000TRS
Mẫu lặp, 25
Cột ngăn điều nhiệt TCC-3000RS
Đầu dò huỳnh quang DAD-3000RS
Dòng di động semi-Micro


Điều kiện
Cột: Acclaim 120 C18, 2.2 μm (2.1 × 150 mm)
Tốc độ dịng: 0.450 mL/min
Thể tích tiêm: 1.0 μl
Nhiệt độ khay: 4
Phát hiện: Hấp thụ, tia cực tím, 280 nm
Nhiệt độ cột: 25
Dung môi: A: 0,1% TFA, 5% acetonitrile
B: 0,1% TFA trong acetonitrile

 


Điều kiện
Hệ thống
Áp lực ngược: ~6025–6200 psi trong khoảng
gradient
Điều kiện Gradient:
Thời gian (phút)
A%
B%
0.0
100.0
0.0
1.2
100.0
0.0
15.5
71.5
28.5
17.0
71.5
28.5
17.0
100.0
0.0
25.0
100.0
0.0

Nồng độ chuẩn (1 mg / mL)
Nồng độ chuẩn Catechin của EGC, ECG, catechin, EC, EGCG,
GC, và GCG được chuẩn bị:
Cân 1-2 mg rắn và thêm 1-2 ml 0,05% axit formic 70%
acetonitrile để làm thành dung dịch chuẩn có chứa 1,0 mg / ml
cho mỗi một catechin.
Các dung dịch đã được chuẩn bị trong lọ thủy tinh 1,5 ml,
trộn và bảo quản ở -40°C cho đến khi cần. Tất cả các nồng độ
chuẩn có thể được lưu trữ cho đến sáu tháng ở -40°C


Tiêu chuẩn làm việc và Tiêu chuẩn đối với phương
pháp tuyến tính
Sử dụng pipet hiệu chuẩn để cung cấp khối lượng thích
hợp của 1 mg / ml dung dịch tiêu chuẩn vào một lọ thủy
tinh thích hợp chứa khối lượng là 0,05% axit formic
70% acetonitrile.
Đến chuẩn bị các tiêu chuẩn catechin hỗn hợp, kết hợp
thích hợp khối lượng của các dung dịch tiêu chuẩn
catechin riêng biệt trong một lọ thủy tinh có chứa khối
lượng thích hợp là 0,05% axit formic 70% methanol.
Dung dịch loãng trung gian tiêu chuẩn là ổn định trong 3
tháng ở -40 ° C và khi thực hiện thí nghiệm thì tiêu
chuẩn hỗn hợp là ổn định trong 4 tuần ở mức 2-4


Chuẩn bị mẫu

SRM 3255 Camellia sinensis (Green Tea) Extract,
5x1g/pack _ Mẫu đối chứng (NIST)
SRM 3256 _ Mẫu trà thương mại cần kiểm tra


Kết quả và thảo luận
Tiêu
  chuẩn tách Catechins

Tách các catechin
Dụng cụ: cột sắc ký 2.2 RSLC Acclaim 120 C18 (2.1*150
mm)


Hình . Biểu đồ sắc ký của một hỗn hợp chứa catechin
chiếm ưu thế trong trà


Tiêu chuẩn phù hợp

*EGC, Catechin, EGCG, EC, GCG, and ECG at concentrations
of 15, 1, 30, 1, 2, and 3 μg/mL, respectively, were used for
precision studies


Phân tích mẫu


Các LOD cho catechins được xác định dựa vào nồng độ của chất
phân tích cung cấp một chiều cao đỉnh của 3× (S / N = 3). các

LOQ đã xác định được nồng độ chất phân tích cung cấp một
chiều cao đỉnh của 10× (S / N = 10). Các LOD dao động từ 0,20
mg/ml đối với EC đến 1,17 mg/ml đ/v GC, và LOQ dao động từ
0,59 mg / ml đ/v EC, 3,56 mg / ml đ/v GC. Thời gian lưu độ
chính xác của các tiêu chuẩn xuất sắc, với RSD dao động từ
0,02% đ/v ECG, đến 0.18% đ/v EGC. Điều này chứng minh độ
chính xác của nồng độ phân phối bởi các bơm DPG 3600RS.
Diện tích peak có độ chính xác dao động từ 1,00% đ/v EGCG,
đến 1,51% đối với EC. Đỉnh cao độ chính xác dao động từ 0,25%
đ/v EGC, đến 1,70% đ/v GC trên 30 chu trình.


Bạch trà
Bạch trà ít được chế biến,
vì vậy nó được dự đốn có
lượng catechin rất cao.
Hình 3 cho thấy sự tách
biệt của catechins trong
bạch trà. Nồng độ dao
động từ 2,73 mg/g đ/v EC,
lên 42,6 mg/g đ/v
EGCG.Tổng hàm lượng
trong mẫu này là 98,5
mg/g.
Figure 3. Separation of
catechins in a 1:20 diluted
sample of white tea.


Phân tích mẫu

Nồng độ catechin dao động từ
3,45 - 64,0 mg/g đ/v EGCG
trong thương hiệu trà xanh A.
Trong thương hiệu B, nồng độ
catechin dao động từ 3,57 - 60,6
mg/g đ/v EGCG.

Figure 4. Comparison of
catechins in a two different
brands of green tea (diluted
1:20).


Phân tích mẫu
Các thành phần trong trà
đen dao động từ 2,25 mg / g
đ/v EC - 27,8 mg / g đ/v
EGC
Không giống như các loại
trà khác được nghiên cứu,
trong trà đen nồng độ EGC
cao hơn EGCG
Figure 5. Separation of
catechins in a 1:20 diluted
sample of black tea.


Độ đúng và độ chính xác của mẫu

Đối với tất cả các mẫu phân tích trong nghiên cứu này,
các RSD thời gian lưu trong ngày dao động từ 0,01%
đ/v nhiều catechin, đến 0,36% đ/v GCG. Trong ngày
RDs vùng đỉnh dao động từ 0,25% đ/v EC 1,76% cho
GCG. Các RSDs vùng đỉnh giữa ngày dao động từ
1,04% đ/v ECG, lên 2,15% đối với EC.


III.KẾT LUẬN
Cơng trình nghiên cứu này mơ tả 1 phương pháp đơn
giản, thích hợp để tách và định lượng catechins khác
nhau trong trà thương mại có sẵn với một dung môi
chiết xuất đơn giản
Sử dụng HPLC và độ hấp thụ Acclaim C18 có độ
phân giải silica cao để tách và phát hiện catechins
trong thời gian ít hơn 20 phút
lý tưởng cho việc kiểm tra và định lượng catechins
thường xuyên trong sản phẩm trà khác nhau.