Luận văn: "Phân lập, tuyển chọn chủng Bacillus subtilis có khả năng sinh tổng hợp chất ức chế α- glucosidase và tối ưu điều kiện nuôi cấy để thu chất ức chế α-glucosidase cao"

Viện Đại học Mở Hà Nội
Khoa công nghệ sinh học

GVHD: PGS.TS Trần Liên Hà
SVTH: Nguyễn Quỳnh Trang
LOGO Lớp: KS.CNSH 07-01


NỘI DUNG


I.TỔNG QUAN
1.1. Bệnh tiểu đường

Dự kiến đến
2030 có thể tăng
lên đến 472
triệu người


1.2. Tác hại của bệnh tiểu đường


1.3. Thuốc chữa bệnh tiểu đường

Thuốc ức chế
α-glucosidase

1

ere

2
3
Meglitimide
…

Sulphonylurea

Metformin


1.4. Cơ chế tác dụng của AGIs trong điều trị
tiểu đường
Maltose

AGIs

Starch

α-glucosidase

Glucose

Glucose

Blood Glucose

AGIs

II. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2. 1. Vật liệu


2.2. Phương pháp nghiên cứu


III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN


3.1. Phân lập Bacillus từ tương Nam Đàn
Chủng

Đặc điểm hình thái khuẩn lạc

T1

Màu trắng ngà, bề mặt trơn, có gợn nhăn thành vòng tròn, mép
bờ răng cưa.
Màu trắng ngà, bề mặt trơn, mép bờ khơng trịn đều.
Màu trắng đục, viền ngoài màu trắng ngà, bề mặt trơn, mép bờ
răng cưa.
Màu trắng ngà, bề mặt trơn, có gợn nhăn thành vịng trịn, mép
bờ trịn đều.
Màu trắng ngà, bề mặt trơn, có gợn thành vòng tròn giống như
nhân, mép bờ răng cưa.
Màu trắng ngà, bề mặt váng, nhân hơi lồi, mép bờ khơng trịn
đều, hơi răng cưa.
Màu trắng đục, bề mặt váng, mép bờ khơng trịn đều,hơi răng
cưa.

Màu trắng ngà, hình hoa tuyết, mép bờ tia hình cây, bề mặt
nhăn, gợn.
Màu trắng trong, phát triển lan theo bề mặt, hình cây, mép bờ
tia hình cây.
Màu trắng đục, khuẩn lạc hơi trịn, bề mặt gợn, mép bờ răng
cưa.
Màu trắng đục hơi ngả vàng, viền ngoài màu trắng ngà, bề mặt
hơi lồi, mép bờ hơi nhăn.

T2
T3
T4
T5
T6
T7
T8
T9
T10
T11

Kích thước
(mm)
7–8
4
13 – 14
3
2
3–4
13 – 14
4

–
6
3

T12

Màu trắng đục, bề mặt nhăn, mép bờ khơng trịn đều.

5–6

T13

Màu trắng ngà, bề mặt có váng, mép bờ răng cưa.

3–4


3.2. Nhuộm Gram & bào tử
Nhuộm bào tử

Nhuộm Gram

T1

Trực khuẩn, có bào tử, tạo chuỗi.

T2

Trực khuẩn, kích thước nhỏ, khơng có bào tử.

T3

G(+)

T9
T10

Trực khuẩn, kích thước khơng đồng nhất, tạo ít bào
tử.
Trực khuẩn, hai đầu hơi thon,tạo thành chuỗi, có bào
tử.
Trực khuẩn, hai đầu thon dài, có bào tử
Trực khuẩn, có bào tử.
Trực khuẩn, khơng có bào tử.
Trực khuẩn, kích thước nhỏ hơn so với các mẫu khác,
khơng có bào tử.
Trực khuẩn, có bào tử.
Trực khuẩn, có bào tử.

T11

Trực khuẩn , tạoBào
thành
nhiềuT
bào tử.
tửchuỗi,
của có
chủng

G(+)

Trực khuẩn, khơng có bào tử.
Trực khuẩn, hai đầu thon, có nhiều bào tử.

–
G(+)

T4
T5
T6
T7
T8

T12
T13

G(+)

13

–

G(+)
G(+)
G(+)
–
–
G(+)
G(+)

3.3. Khảo sát định tính khả năng sinh tổng hợp
chất ức chế α-glucosidase
Chủng

T1

T2

T4

T5

T6

T9

T10

T11

T13

D (mm)

15

25

22

20

16

21

14

18

12

D/d
(mm)

0.83 1.39 1.22 1.11 0.89 1.17 0.78 1.00

0.67

Đường kính vịng thủy phân mẫu đối chứng d=18 mm
Hình thái khuẩn lạc chủng T13
Đường kính vịng thủy phân chủng T13


3.4. Khảo sát định lượng khả năng sinh tổng
hợp chất ức chế α-glucosidase


3.5. Tối ưu điều kiện nhiệt độ

30oC


3.5. Tối ưu điều kiện nhiệt độ
35oC


3.5. Tối ưu điều kiện nhiệt độ
40oC


3.5. Tối ưu điều kiện nhiệt độ
45oC


3.6. Tối ưu điều kiện pH


3.7.Tối ưu nồng độ cơ chất
 Lựa chọn cơ chất
Thành phần môi trường
Thành phần

Khối lượng

Cao nấm men

5g

Peptone

10g

NaCl

5g

Agar
Nước cất

Hàm lượng Nitơ tổng
Cơ chất

Hàm luợng Nitơ
tổng

Đậu xanh

32%

Đậu đen

28%

Đậu tương

34%

15 – 20g

Peptone

14%

1000ml

Cao nấm men

74%


 Lựa chọn cơ chất


 Khả năng sinh tổng hợp chất ức chế α-glucosidase
sử dụng cơ chất đậu tương


IV. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
4.1. Kết luận

- Phân lập được 13 chủng từ tương Nam Đàn.
- Chủng T13 có đường kính vịng thủy phân nhỏ
nhất 12mm
- Chủng Natto có khả năng sinh tổng hợp chất
ức chế α-glucosidase cao nhất 70,61%.
- Chủng Natto có khả năng sinh tổng hợp chất
ức chế α-glucosidase cao nhất ở 40oC (82,23%), pH 5
(83, 73%), sử dụng cơ chất đậu tương với hàm lượng
Nitơ 5% (85,75%).

4.2. Kiến nghị
- Khảo sát ảnh hưởng của tốc độ lắc đến sự sinh
trưởng phát triển và khả năng sinh tổng hợp chất ức
chế
α-glucosidase từ canh trường nuôi cấy
của chủng Natto.
- Thu, tách và tinh sạch chất kìm hãm để ứng dụng
trong điều trị bệnh tiểu đường.



Khảo sát định tính khả năng sinh
tổng hợp chất ức chế α-glucosidase
Dựa trên phương pháp đo đường kính vịng thủy phân
tạo thành sau khi cho α-glucosidase thủy phân tinh bột tan
đồng thời bổ sung canh trường nuôi cấy vi khuẩn có chứa
chất ức chế enzyme α-glucosidase.