che pham bao ve thuc vat

Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (152.32 KB, 29 trang )

(1)<div class='page_container' data-page=1>

CHƯƠNG VI:

</div>
(2)<div class='page_container' data-page=2>

VI.2

</div>
(3)<div class='page_container' data-page=3>

CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT THUỐC TRỪ SÂU BT

Tuyển

chọn

chủng

Lên men

Lên men 
bán rắn

Lên men 
chìm

</div>
(4)<div class='page_container' data-page=4>

Chọn chủng tự nhiên

có độc lực cao

Tuyển chọn chủng

Tạo giống bằng

gây đột biến

Tạo giống bằng

công nghệ gen

1

Phân lập 
Bt từ đất

</div>
(5)<div class='page_container' data-page=5>

Bảo quản

giống

Cấy

truyền

Bảo quản

trong parrafin

Bảo quản

trong cát

Đông

khô

Bảo quản

trên giấy lọc

</div>
(6)<div class='page_container' data-page=6>

Quy trình lên men chìm Bacillus thuringiensis

Nước

P C khống

Hơi nước
T
h
ù
n
g
 c
h
ứ
a
Ly tâm
Chuẩn hóa
Tạo chế phẩm

Đóng gói

Thổi khí

</div>
(7)<div class='page_container' data-page=7>

Nhân giống cho ni cấy vi khuẩn



Mục đích: Tạo lượng giống đã hoạt hoá nhằm giúp giai đoạn pha

lag phát triển nhanh.

Nếu lag kéo dài: tốn thời gian, môi trường.



Thời gian pha lag phụ thuộc: lượng giống, trạng thái sinh lý của

giống:



Tỷ lệ giống được chọn: 3 – 10%.



Giống vi khuẩn được tiếp vào khi vi khuẩn đang ở giai đoạn

phát triển log, tế bào chuyển hoá mạnh.

</div>
(8)<div class='page_container' data-page=8>

Các thơng số của q trình lên men

• Thành phần mơi trường

• Nhiệt độ

• pH

• Thổi khí

</div>
(9)<div class='page_container' data-page=9>

Thành phần môi trường lên men Bt

Thành phần Hàm lượng (g/l)

Bột đậu tương 25 22,5 - 40 - 18 25 40

Bột khô lạc - - 30 - 14 - -

-Bột ngô - - - - - 5 - 20

Nước chiết ngô - 20 30 20 16,7 36 3

-Tinh bột 10 15 - - 7,5 - -

-Bột cá - - - - - 3 5 10

Pepton - - 2 - - - - 1

Glucoza 10 - 45 30 - - 20

-Rỉ đường - - - - 18,6 - -

-Cao nấm men - - 2 - - - - 2

KH2PO4 1 - - - - 2,16 1 1

K2HPO4 1 - - - - - -

-FeSO4.7H2O 0,02 - 0,02 - - - -

-MgSO4.7H2O - - 0,3 - - 0,75 - 0,7

MnSO4.H2O - - 0,02 - - - -

-ZnSO4.7H2O - - 0,02 - - - -

-CaCO4 1 1,5 - - 1 1,5 1 2

</div>
(10)<div class='page_container' data-page=10>

-10

Các phương pháp lên men



Phương pháp ni cấy chìm



Chuẩn bị mơi trường lên men: Hồ trộn các thành phần môi

trường trong nước; thanh trùng; làm nguội và bơm vào các thiết

bị lên men.



Quá trình lên men:



Nhiệt độ: 28 – 34

o

C.



pH: pH

BĐ

= 6,8 – 7,2; pH

QT

5,5 – 5,6

8,5. Hoặc giữ

không đổi bằng cách sử dụng NaOH; NH

4

OH hoặc H

2

SO

4

.



Bổ sung dầu phá bọt polypropylen, glycol, silicon hoặc dầu

thực vật tinh chế nếu môi trường giàu protein.



Điều khiển lượng oxy hồ tan thích hợp.



Dừng lên men khi đạt tỷ lệ tách bào tử tự do lớn nhất: 36– 96

giờ.

</div>
(11)<div class='page_container' data-page=11>

11


Phương pháp nuôi cấy bán rắn



Chuẩn bị môi trường lên men: Cám, nước và các dung dịch

dinh dưỡng, muối khoáng được trộn lẫn và được thanh trùng

bằng hơi.



Giống được ni cấy theo phương pháp lên men chìm trong

máy lắc.



Quá trình lên men:



Nhiệt độ: 30

o

C.



Độ ẩm mơi trường: 50 – 70%.



Độ ẩm khơng khí ni cấy: 80 – 100%.



Kết thúc lên men thường sau 48 giờ; khơng khí ẩm sẽ được

</div>
(12)<div class='page_container' data-page=12>

</div>
(13)<div class='page_container' data-page=13>

Các yếu tố ảnh hưởng đến sự hình thành tinh thể Cry



Nhiệt độ thích hợp: 25 – 35

o

C; T

opt

= 30

o

C



pH thích hợp: 7,0; pH quá cao hoặc quá thấp làm biến tính tinh thể.



Lượng oxy đưa vào môi trường phải tuỳ theo từng giai đoạn:



Giai đoạn sinh trưởng thiếu oxy: tích luỹ sinh khối giảm mạnh.



Giai đoạn tạo bào tử và hình thành tinh thể độc: thừa oxy lượng

bào tử không thay đổi nhưng lượng tinh thể tạo thành giảm

mạnh.



Tác động của axit amin:



Lơxin và izolơxin ức chế sinh trưởng và sự hình thành bào tử

của Bt. Nếu có mặt thêm valin thì tác dụng ức chế bị mất đi.



Có mặt treonin hoặc serin ức chế sinh trưởng và sự hình

thành bào tử của Bt. Nếu có mặt của cả hai axit amin cùng

một lúc thì tác dụng ức chế bị mất đi. Tác dụng ức chế của

serin mất đi khi có mặt của metionin.



Chất kháng sinh erythromycin ở nồng độ thấp chưa đủ ức chế sinh

</div>
(14)<div class='page_container' data-page=14>

Thu hồi sản phẩm

Dịch lên men

Li tâm

Lọc ép

Kết tủa

Cô đặc

Sấy khô

</div>
(15)<div class='page_container' data-page=15>

Những điều cần chú ý khi tạo dạng chế phẩm



Độc tính diệt cơn trùng phải được duy trì trong suốt các cơng

đoạn: T<50 – 55

o

C để nội độc tố  và bảo tử khơng bị phá huỷ.



Hoạt tính sinh học của chế phẩm ổn định trong 18 – 36 tháng.



Dạng chế phẩm phải thích hợp và thuận tiện cho việc sử dụng.



Hoạt lực chế phẩm phải được duy trì lại trong điều kiện môi

trường áp dụng (độ bền chế phẩm).



Chế phẩm Bacillus diệt côn trùng theo đường tiêu hoá nên cần

</div>
(16)<div class='page_container' data-page=16>

TẠO CHẾ PHẨM KỸ THUẬT

Thành phần

%

(w/w)

Vai trò

Giá tiền

($/kg)

Dịch lên men ly tâm 97 Tác nhân SH 28
Dung dịch Bevaloid 211

40% 2 Chất phân tán 0,03
Gum arabic 1 Chất bảo vệ khi

sấy 0,03

</div>
(17)<div class='page_container' data-page=17>

TẠO CHẾ PHẨM KỸ THUẬT

Các bước tiến hành

1. Điều chỉnh pH dịch lên men về 4,1 bằng H2SO4 5M

2. Ly tâm liên tục dịch lên men ở ≥ 8000g và < 35ºC, vẫn khuấy trộn liên 
tục trong thùng lên men

3. Lấy mẫu

4. Bổ sung từ từ chất phân tán với tỷ lệ 2% và 1% gum arabic hoặc 5% 
lactoza trong khi vẫn đảo trộn trong 5 phút để đảm bảo không vón cục
5. Sấy phun đến hàm lượng nước 6-7%

</div>
(18)<div class='page_container' data-page=18>

TẠO CHẾ PHẨM BỘT MỊN 500 IU/mg

Thành phần chế phẩm

Thành phần %

(w/w) Vai trò Giá tiền ($/kg)

Chế phẩm kỹ thuật 0,6 Tác nhân SH 0,18

Bột Talc 98,9 Chất mang 0,18

Wessalon S 0,5 Chất chống hút

dính 0,03

Các bước tiến hành

1. Trộn chế phẩm kỹ thuật (80 000 IU/mg) với bột oxit silic, ví dụ 
Wessalon S theo tỷ lệ 5:4

</div>
(19)<div class='page_container' data-page=19>

TẠO CHẾ PHẨM BỘT THẤM ƯỚT

Thành phần

%

(w/w)

Vai trò

Giá tiền

($/kg)

Chế phẩm kỹ thuật 20 Tác nhân SH 5,6
Bột Kaolin 75,25 Chất mang 0,44
Wessalon S 0,75 Chất chống hút

dính 0,03
Bevaloid 116 2 Chất phân tán 0,09
Surfynol 104S 2 Chất thấm ướt 0,26

</div>
(20)<div class='page_container' data-page=20>

TẠO CHẾ PHẨM BỘT THẤM ƯỚT

Các bước tiến hành

1. Từ hoạt tính của chế phẩm kỹ thuật ban đầu và hoạt tính chế phẩm bột 
thấm ướt cần có tính ra tỷ lệ %, P của chế phẩm kỹ thuật cần sử dụng
2. Bổ sung vào chế phẩm kỹ thuật bột oxit silic theo tỷ lệ 0,75% (khối

lượng so với sản phẩm cuối cùng), chất phân tán 2% và chất thấm ướt 
2% trong thiết bị đảo trộn. Tiến hành ở < 35ºC cho đến khi toàn bộ hạt 
bột oxít silic đóng tụ đều tan hết

</div>
(21)<div class='page_container' data-page=21>

TẠO CHẾ PHẨM NƯỚC

Thành phần %

(w/w) Vai trò Giá tiền ($/kg)

Sinh khối 10 Tác nhân SH 2.8

Bevaloid 211 3 Chất phân tán 0,03

Veegum 0,45 Chất chống lắng 0,05

Xanthan gum 0,06 Chất chống lắng 0,03
Surfynol TG-E 0,5 Chất phân tán 0,06
K sorbate 0,2 Chất chống nấm 0,03
H2SO4 5M để chỉnh pH về 4 Ngăn vi khuẩn phát

triển 0,03

Nước đến 100%

</div>
(22)<div class='page_container' data-page=22>

TẠO CHẾ PHẨM NƯỚC

Các bước tiến hành

1. Ly tâm dịch lên men như đối với sản xuất chế phẩm kỹ thuật

2. Ổn định sinh khối bằng cách bổ sung K sorbate tỷ lệ 2%, điều chỉnh pH về 4 
bằng H2SO4 5M và bổ sung dung dịch Bevaloid 211 với tỷ lệ 3%. Hịa trộn ít 
nhất trong 10 phút cho đến khi K sorbate hòa tan hoàn toàn.

3. Kiểm tra xác định hoạt lực của dịch sinh khối thu được rồi hòa với nước 
theo tỷ lệ nhất định để thu được chế phẩm có hoạt tính mong muốn.

4. Trộn khơ các chất Veegum và Xanthan theo tỷ lệ 7,5:1, sau đó cho hỗn hợp 
từ từ vào nước. Đảo trộn với lực cắt lớn ở < 60ºC trong 30 phút cho đến khi 
hòa đều hoàn toàn.

5. Cho hỗn hợp gel vào dịch sinh khối. Đảo trộn từ từ.

6. Kiểm tra giữ pH ở 4. Điều chỉnh bằng H2SO4 hoặc NaOH 5M

7. Cuối cùng bổ sung Surfynol TG-E. Đảo trộn kỹ, tránh khuấy trộn nhiều 
khơng khí.

</div>
(23)<div class='page_container' data-page=23>

TẠO CHẾ PHẨM DẦU

Thành phần

%

(w/w)

Vai trò

Giá tiền

($/kg)

Chế phẩm kỹ thuật 24 Tác nhân SH 6,72

Edelex 13 oil 74,4 Chất mang 1,14

Bentone 38 1,2 Chất chống lắng 0,09
Propylene carbonate 0,4 Chất hoạt hóa 0,05

</div>
(24)<div class='page_container' data-page=24>

TẠO CHẾ PHẨM DẦU

Các bước tiến hành

1. Trộn chất chống lắng với 10% lượng dầu trong 45 phút. Đảo trộn với 
lực cắt tối đa. Bổ sung chất hoạt hóa nhanh vào trong khi vẫn đảo trộn 
với lực cắt lớn. Để đầu thiết bị đảo trộn đi đều trong khắp thùng đảo 
trộn.

2. Chuyển hỗn hợp gel trên vào thùng đảo trộn chính

3. Dùng lượng dầu cịn lại rửa nốt phần gel vào thùng. Đảo trộn dầu và 
hỗn hợp gel trong 10 phút

4. Nghiền chế phẩm kỹ thuật nếu cần để có kích thước hạt < 50µm. Hịa 
trộn với hồn hợp dầu trong thùng trộn

</div>
(25)<div class='page_container' data-page=25>

Các nguyên nhân gây hư hỏng chế phẩm BT

Nhiệt độ cao

Thời gian chịu tác động bất lợi

Sự có mặt của nước tự do

pH bất lợi

Sự có mặt của enzim

</div>
(26)<div class='page_container' data-page=26>

Các phụ gia sử dụng trong tạo chế phẩm BT

• Chất giúp thấm ướt (wetters)

• Chất kết dính (stickers)

• Chất hấp dẫn (phagostimulants)

• Chất chống nắng (sunscreens)

</div>
(27)<div class='page_container' data-page=27>

Synergist combinations

Nồng độ (%)

LC50 khơng có

synergist/LC50

cã synergist

ZnSO4 + CaCO3 0,1 + 0,5 16
ZnSO4 + (NH4)2HPO4 0,1 + 0,5 20
ZnSO4 + K2CO3 0,1 + 0,5 45
CaCO3 + (NH4)2HPO4 0,5 + 0,5 11

</div>
(28)<div class='page_container' data-page=28>

5

Kiểm tra chất lượng sản phẩm

Các thơng số cơ bản

Hiệu lực diệt sâu, kích thước hạt,
độ ẩm, pH, độ thấm ướt, độ phân tán,

độ tạo huyền phù, độ nhớt…

Hiệu lực sinh học

Số lượng tế bào và

bào tử tự do Hiệu lực diệt sâu

Trọng lượng phân tử
protein tinh thể

• Số lượng TB và BT: 
đếm trên kính hiển vi 
quang học

• Số lượng bào tử tự do:

đếm số khuẩn lạc trên 
mơi trường thạch

• Liều lượng gây chết ấu 
trùng côn trùng: LC50 và 
LC95

• Liều thử 25-50 ấu trùng,

Thời gian 24 giờ, số lần lặp 
lại 4-6 lần

</div>
(29)<div class='page_container' data-page=29>

Xác định hoạt lực diệt sâu

In vivo test

LC

50

Hoạt độ diệt sâu, IU/mg =

của chế phẩm chuẩn x hoạt độ của chế phẩm chuẩn
LC50

LC50 của mẫu

Đánh giá chất lượng

</div>

che pham bao ve thuc vat

<b>CHƯƠNG VI:</b>

<b>VI.2</b>

<b>CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT THUỐC TRỪ SÂU BT</b>

<b>Tuyển </b>

<b>chọn </b>

<b>chủng</b>

<b>Lên men</b>

<b>Chọn chủng tự nhiên </b>

<b>có độc lực cao</b>

<b>Tuyển chọn chủng</b>

<b>Tạo giống bằng </b>

<b>gây đột biến</b>

<b>Tạo giống bằng </b>

<b><sub>công nghệ gen</sub></b>

<b>1</b>

<b>Bảo quản </b>

<b>giống</b>

<b>Cấy </b>

<b>truyền</b>

<b>Bảo quản </b>

<b>trong parrafin</b>

<b>Bảo quản </b>

<b>trong cát</b>

<b>Đông </b>

<b>khô</b>

<b>Bảo quản </b>

<b>trên giấy lọc</b>

<i><b>Quy trình lên men chìm Bacillus thuringiensis</b></i>

<b>Nhân giống cho ni cấy vi khuẩn</b>

<b>Mục đích: Tạo lượng giống đã hoạt hoá nhằm giúp giai đoạn pha </b>

<b>lag phát triển nhanh.</b>

<b>Nếu lag kéo dài: tốn thời gian, môi trường.</b>

<b>Thời gian pha lag phụ thuộc: lượng giống, trạng thái sinh lý của </b>

<b>giống:</b>

<b> Tỷ lệ giống được chọn: 3 – 10%.</b>

<b> Giống vi khuẩn được tiếp vào khi vi khuẩn đang ở giai đoạn </b>

<b>phát triển log, tế bào chuyển hoá mạnh.</b>

<b>Các thơng số của q trình lên men</b>

<b>• Thành phần mơi trường</b>

<b>• Nhiệt độ</b>

<b>• pH</b>

<b>• Thổi khí</b>

<b>Thành phần môi trường lên men Bt</b>

<b>Các phương pháp lên men</b>

<b>Phương pháp ni cấy chìm</b>

<b><sub>Chuẩn bị mơi trường lên men: Hồ trộn các thành phần môi </sub></b>

<b>trường trong nước; thanh trùng; làm nguội và bơm vào các thiết </b>

<b>bị lên men.</b>

<b>Quá trình lên men:</b>

<b>Nhiệt độ: 28 – 34</b>

<b>C.</b>

<b>pH: pH</b>

<b> = 6,8 – 7,2; pH</b>

<b>5,5 – 5,6 </b>

<b>8,5. Hoặc giữ </b>

<b>không đổi bằng cách sử dụng NaOH; NH</b>

<b>OH hoặc H</b>

<b>SO</b>

<b>.</b>

<b>Bổ sung dầu phá bọt polypropylen, glycol, silicon hoặc dầu </b>

<b>thực vật tinh chế nếu môi trường giàu protein.</b>

<b>Điều khiển lượng oxy hồ tan thích hợp.</b>

<b>Dừng lên men khi đạt tỷ lệ tách bào tử tự do lớn nhất: 36– 96 </b>

<b>giờ.</b>

<b>Phương pháp nuôi cấy bán rắn</b>

<b><sub>Chuẩn bị môi trường lên men: Cám, nước và các dung dịch </sub></b>

<b>dinh dưỡng, muối khoáng được trộn lẫn và được thanh trùng </b>

<b>bằng hơi.</b>

<b>Giống được ni cấy theo phương pháp lên men chìm trong </b>

<b>máy lắc.</b>

<b>Quá trình lên men:</b>

<b>Nhiệt độ: 30</b>

<b>C.</b>

<b>Độ ẩm mơi trường: 50 – 70%.</b>

<b>Độ ẩm khơng khí ni cấy: 80 – 100%.</b>

<b>Kết thúc lên men thường sau 48 giờ; khơng khí ẩm sẽ được </b>

<b>Các yếu tố ảnh hưởng đến sự hình thành tinh thể Cry</b>

<b>Nhiệt độ thích hợp: 25 – 35</b>

<b>C; T</b>