Báo cáo môn học: Công Nghệ Di Truyền docx

Báo cáo môn h cọ
Công Ngh Di Truy nệ ề
Cán b h ng d n:ộ ướ ẫ
Ths. Nguy n Th Phaễ ị
Ph n dành cho đ n vầ ơ ị
Sinh viên th c hi n:ự ệ
Tr n Th Trúc Ph ngầ ị ươ
Nguy n Vi t Namễ ệ
Ph m Tr ng Tínạ ọ
Nguy n Huỳnh H ngễ ươ
NG D NGỨ Ụ
K THU T SINH H C PHÂN TỸ Ậ Ọ Ử
Đ XÁC Đ NH M T S LOÀI SÂM THU C CHI PANAXỂ Ị Ộ Ố Ộ
Tác gi : Nguy n Thanh Thu n, Vũ Thanh ả ễ ậ
Th o, Nguy n Văn Thanh, Tr n Cát Đôngả ễ ầ
Trích t trang:

Các ph n chínhầ
I M Đ UỞ Ầ
II V T LI U VÀ PH NG Ậ Ệ ƯƠ
PHÁP
III K T QU VÀ TH O LU NẾ Ả Ả Ậ
IV K T LU NẾ Ậ


I M Đ UỞ Ầ
•
Nhân Sâm
•
Tên khoa h c: ọ
Panax ginseng C. A.

Mey
•
H : Araliaceae ọ
(nhân sâm Hay Ngũ
gia bì)
•
Chi: Pana x


I M Đ UỞ Ầ
Nhân Sâm
Nhi u loàiề
D c li u quíượ ệ
D c tính các loài ượ
có s khác bi tự ệ
Phân bi t ệ
loài m c ở ứ
phân tử


I M Đ UỞ Ầ
M c tiêu: Xây d ng các ph ng ụ ự ươ
pháp thu n ti n và có đ l p l i ậ ệ ộ ặ ạ
cao đ xác đ nh các loài sâm thu c ể ị ố
chi Panax và ngu n g c c a ồ ố ủ
chúng.


II. V t li u và ph ng phápậ ệ ươ
N i ơ

mua
Lo i ạ
sâm
Vi t ệ
Nam
Hàn
Qu cố
Pg1
Pg2
Pg3
Pg4 Pq
Pn1
Pn2
Pv
X
X
X
X
X
X
X X


II V T LI U VÀ PH NG PHÁPẬ Ệ ƯƠ
Ph ng pháp:ươ
Tách chi t DNAtheo ph ng phápế ươ
c a Manian đ c bi n đ iủ ượ ế ổ
Th c hi n PCR-RFLPự ệ
Vùng ITS đ c khu ch đ i v i ượ ế ạ ớ
c p m i chung ITS_AF và ITS_BRặ ồ

Vùng 18S đ c khu ch đ i v i c pượ ế ạ ớ ặ
m i chung 18SCOM_F và 18SCOM_Rồ
S n ph m PCR đ c tinh chả ẩ ượ ế
qua c t Promega Wizard® SV Gelộ
and PCR Clean-Up System và c t b ngắ ằ
h n h p enzyme ỗ ợ HaeIII và HindIII
(BioLabs)trong 1 gi 37oC.ờ ở
S n ph m c t đ c đi n di trênả ẩ ắ ượ ệ
gel polyacrylamide 15%.
Các s n ph m PCR đ c gi i trình tả ẩ ượ ả ự
b i công ty Macrogen (Hàn Qu c).ở ố
K t qu đ c BLAST trên NCBI ế ả ượ
đ tìm các trình t t ng đ ngể ự ươ ồ
Th c hi n RAMS v i các m i ự ệ ớ ồ
RAMS1 (ACA)5, RAMS2 (CCA)5,
RAMS3 (CGA)5, RAMS4 (GT)5G.
Đi n di s n ph m PCR trên gel agarose 1%.ệ ả ẩ
Ch p hình gel b ng máy Dolphin(Wealtec Corp)ụ ằ
Phân tích k t qu b ng ph n m mế ả ằ ầ ề
BioNumerics 3.0 đ t o ể ạ
cây phát sinh loài làm căn c phân bi t.ứ ệ


III K T QU VÀ TH O LU NẾ Ả Ả Ậ
Hình 1. K t qu RFLP ế ả
vùng ITS. M: thang 100bp
Hình 2. K t qu phân tích s ế ả ự
đa hình s n ph m RFLP đo n ả ẩ ạ
ITS

III K T QU VÀ TH O LU NẾ Ả Ả Ậ
Hình 3. K t qu RFLP vùng ế ả
18S. M: thang 100bp
Hình 4. K t qu phân tích s đa ế ả ự
hình s n ph m RFLP đo n 18Sả ẩ ạ


III K T QU VÀ TH O LU NẾ Ả Ả Ậ
•
Th nghi m các m i RAMS thì ch có m i ử ệ ồ ỉ ồ
RAMS1 cho s n ph m khi phân tích trên gel ả ẩ
•
Kh o sát n ng đ MgCl2 cho th y n ng đ ả ồ ộ ấ ồ ộ
MgCl2 2mM cho k t qu PCR rõ nh t.ở ế ả ấ
•
Khi ti n hành RAMS trên các m u k t qu ế ẫ ế ả
phân tích trên BioNumerics cho th y các m u ấ ẫ
có m c đa d ng th p (d i 15%) ứ ạ ấ ướ


III K T QU VÀ TH O LU NẾ Ả Ả Ậ
Hình 5. K t qu PCR ế ả
m i RAMS1. M: thang ồ
1000bp
Hình 6. K t qu phân tích đa hình ế ả
s n ph m khu ch đ i RAMS1ả ẩ ế ạ


IV K T LU NẾ Ậ

•
Phân tích trình t vùng ITS có th giúp xác ự ể
đ nh loài c a các m u. Ngoài ra, s k t ị ủ ẫ ự ế
h p gi a phân tích RFLP và gi i trình t ợ ữ ả ự
có th phân bi t ngu n g c c a các m u ể ệ ồ ố ủ ẫ
này.
•
Nhìn chung, các m u sâm thu mua t Hàn ẫ ừ
Qu c có m c t ng đ ng cao h n các ố ứ ươ ồ ơ
m u thu mua t i Vi t Nam ẫ ạ ệ