báo cáo tiểu luận nhóm 10 sáng thứ 7
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (1.3 MB, 14 trang )
<span class="text_page_counter">Trang 1</span><div class="page_container" data-page="1">
<b><small>TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHKHOA KHOA HỌC SINH HỌC </small></b>
<b>TẠO DỊNG GEN MÃ HÓA 18S rRNA CỦA </b>
<i><b>NẤM Branchiomyces sanguinis GÂY BỆNH </b></i>
<b>NẤM MANG Ở CÁ TRONG VI KHUẨN </b>
<i><b>Escherichia coli</b></i><b><sup>Nhóm 10</sup></b>
<b><small>Môn học: Thiết bị và kỹ thuật CNSH</small></b>
<b>BÁO CÁO TIỂU LUẬN</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 4</span><div class="page_container" data-page="4"><b>CHƯƠNG 1. ĐẶT VẤN ĐỀ</b>
Nấm mang là bệnh cấp tính ở mang gây ra bởi loài <i>nấm Branchiomyces sanguinis </i>
ảnh hưởng đến nhiều loài cá nước ngọt. Tỉ lệ nhiễm bệnh là 92% ở cá nuôi vào
mùa hè.
Cá nhiễm bệnh bị suy nhược, hôn mê và suy hô hấp (do tổn thương mô mang).
Màu sắc của mang bắt đầu chuyển thành
</div><span class="text_page_counter">Trang 5</span><div class="page_container" data-page="5"><b>CHƯƠNG 2. TỔNG QUAN</b>
<i><b>2.1. Tổng quan về nấm Branchiomyces sanguinis</b></i>
Là một loài nấm hại, gây bệnh nấm mang ở cá nước ngọt.
Nấm có dạng sợi ít phân nhánh khơng có vách ngăn, sinh bào tử.
Đường kính sợi nấm 8 – 30µm, đường kính bào tử tương đối lớn 5 – 9µm.
Nấm sinh trưởng ở nhiệt độ trong khoảng 14 – 35 °C, phát triển mạnh khi nhiệt độ trên 20 °C, độ pH trong khoảng 5,5 – 6,5 (Plumb, 1997).
<i><b>Hình 2.1. Nấm Branchiomyces sanguinis </b></i>
<i>dưới kính hiển vi. (A) Sợi nấm 40X; (B) </i>
<i>Bào tử nấm 100X (Mohammed et al., </i>
2019).
</div><span class="text_page_counter">Trang 6</span><div class="page_container" data-page="6"><b>2.2. Tổng quan về 18S rRNA</b>
• Là một thành phần của tiểu đơn vị nhỏ ribosome của sinh vật nhân chuẩn (40S).
• Tương đồng 16S rRNA ở sinh vật nhân sơ và lạp thể, cũng như 12S rRNA trong ty thể.
• Gen 18S rRNA có nhiều trình tự được bảo tồn cao được sử dụng thường xuyên trong nghiên cứu phát sinh gen.
• Gen 18S rRNA là dấu hiệu quan trọng cho phản ứng chuỗi polymerase mục tiêu ngẫu nhiên (PCR) trong sàng lọc đa dạng sinh học mơi trường.
<b><small>Hình 2.2. 18S rRNA.</small></b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 7</span><div class="page_container" data-page="7"><b>2.3. Tổng quan về kỹ thuật tạo dòng gen</b>
<b><small>Hình 2.3. Kỹ thuật tạo dịng </small></b>
Phân lập và thu nhận đoạn DNA quan tâm hay gene mã hóa cho protein.
DNA tồn tại và tự sao chép độc lập trong tế bào vật chủ được sử dụng để mang, tăng sinh hoặc biểu hiện số bản sao của đoạn DNA quan tâm gọi là vector.
Gắn đoạn DNA quan tâm vào vector tạo nên vector tái tổ hợp.
Các dòng tế bào này khi mang DNA tái tổ hợp được gọi là dòng tái tổ hợp.
(recombinant clone)
</div><span class="text_page_counter">Trang 8</span><div class="page_container" data-page="8"><b>CHƯƠNG 3. PHƯƠNG PHÁP</b>
<b>3.1. Ly trích DNA tổng số</b>
Tại vùng mang cá bị nấm, ta lấy mẫu rồi tiến hành mang đi ly trích DNA tổng số. Bằng cách đồng nhất mẫu trong hỗn hợp Tris – EDTA – NaCl - SDS, ly tâm, gây kết
tủa các thành phần không cần thiết bằng PCI, kết tủa DNA bằng ethanol 99° và tinh sạch bằng ethanol 70° ta thu được DNA tổng số. Sau đó hịa tan trong dung dịch TE.
</div><span class="text_page_counter">Trang 9</span><div class="page_container" data-page="9"><b>3.2. Khuếch đại đoạn gen mã hóa 18S rRNA bằng PCR</b> <small>máy luân nhiệt trong </small>
<small>2 giờ thu được dung kết tủa với ethanol tuyệt đối trong điều </small>
<small>kiện lạnh.</small>
</div><span class="text_page_counter">Trang 10</span><div class="page_container" data-page="10"><b>3.3. Xử lý DNA mục tiêu và nối vào vector</b> • Trộn vector pGEM-T Easy và dung dịch
chứa DNA mục tiêu, bổ sung enzyme ligase hỗn hợp có chứa DNA tái tổ
</div><span class="text_page_counter">Trang 11</span><div class="page_container" data-page="11"><i><b>3.4. Xử lý tế bào vi khuẩn Escherichia coli ( E. coli ) và sàng lọc bằng hệ thống xanh – trắng </b></i>
<i>Trong operon lac của vi khuẩn E. coli</i>
Tiến hành gây đột biến bằng cách loại bỏ một trình tự khoảng 33 nucleotide mã hóa cho tiểu phần α của β - galactosidase
Biến nạp hỗn hợp chứa DNA tái tổ hợp mang đoạn gen mã hóa
<i>18S rRNA vào các tế bào vi khuẩn E. coli đã được xứ lý bằng </i>
phương pháp sốc nhiệt
<i>Các tế bào vi khuẩn E. coli sau khi được biến nạp bằng sốc nhiệt </i>
sẽ được ni cấy trên mơi trường có bổ sung IPTG, X-gal và
</div><span class="text_page_counter">Trang 12</span><div class="page_container" data-page="12"><b>CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ</b>
β – galactosidase sẽ thủy phân đường đôi tạo màu xanh.
DNA tái tổ hợp mang đoạn gen mã hóa 18S rRNA sẽ bị mất trình tự gen lacZ mã hóa
tiểu phần α dẫn đến bất hoạt β –
galactosidase không thủy phân được X-gal (khuẩn lạc trắng).
Chọn những khuẩn lạc có màu trắng, đó là
<i>khuẩn lạc phát triển từ tế bào vi khuẩn E. </i>
<i>coli chứa DNA tái tổ hợp mang đoạn gen mã </i>
<small>xanh - trắng.</small>
</div><span class="text_page_counter">Trang 13</span><div class="page_container" data-page="13"><b>TÀI LIỆU THAM KHẢO</b>
• Cohen S.N., Chang A.C.Y., Boyer H.W., Helling R.B. (1973) Construction of Biologically Functional Bacterial Plasmids In Vitro. Proceedings of the National Academy of Sciences 70:3240-3244. DOI: 10.1073/pnas.70.11.3240.
• Field K.G., Olsen G.J., Lane D.J., Giovannoni S.J., Ghiselin M.T., Raff E.C., Pace N.R., Raff R.A. (1988) Molecular Phylogeny of the Animal Kingdom. Science 239:748-753. DOI:
• Meyer A., Todt C., Mikkelsen N.T., Lieb B. (2010) Fast evolving 18S rRNA sequences from Solenogastres (Mollusca) resist standard PCR amplification and give new insights into mollusk substitution rate heterogeneity. BMC Evolutionary Biology 10:70. DOI:
• Mohammed I., Abed A., Al - Nuaimi A. (2019) A COMPARATIVE STUDY BETWEEN THE POLLUTION OF EUPHRATES RIVER WATER AND THE DRAINAGE WATER AND
THEIR EFFECTS ON BRANCHIOMYCES SANGUINIS GROWTH. Pollution Research 38:86-92.
</div><span class="text_page_counter">Trang 14</span><div class="page_container" data-page="14">
