Giới thiệu một số kỹ thuật bảo quản vi sinh vật (tt) ppt

Giới thiệu một số kỹ thuật
bảo quản vi sinh vật (tt)




5. Một số phương pháp phổ biến
sử dụng trong bảo quản các nhóm
vi sinh vật cụ thể:

5.3. Các phương pháp dùng cho
bảo quản nấm sợi:
Chuẩn bị:
1, Chuẩn bị dung dịch glycerol
10% (3 ml trong ống nghiệm)
khử trùng ở 121
o
C trong 15
phút. Ống nhựa nút xoáy (2 ml),
rửa sạch trong sonic cleaner,
khử trùng ở 170
o
C trong 3 giờ.
2, Chuẩn bị mẫu nấm sợi trên
môi trường thạch đĩa có lượng bào
tử lớn.
Cách tiến hành:
1, Dùng pipet pasteur hút

khoảng 0,3 ml glycerol đã thanh
trùng vào ống nhựa đựng mẫu. Sau
đó dùng dao vô trùng cắt lấy 1
miếng nhỏ môi trường chứa cả sợi
và bào tử nấm sợi cho vào ống
nhựa. Lượng glycerol đủ để phủ lên
miếng thạch mẫu, đậy nút và bao
băng parafil sau đó dán nhãn.
2, Mẫu trước tiên phải để ở
5
o
C (tạo điều kiện cho glycerol đi
vào tế bào), sau đó được làm lạnh
sâu tử 25
o
C xuống -55
o
C với tốc độ
-1
o
C/phút. Trong trường hợp không
có thiết bị làm lạnh thì có thể để -
20
o
C trong 3 giờ, sau đó chuyển
sang -80
o
C hay nitơ lỏng (-196
o
C).

Chú ý: Việc bảo quản theo
phương pháp lạnh sâu thích hợp
với hầu hết các nấm sợi sinh bào tử
và tế bào có vách ngăn. Nhưng
phương pháp này tỏ ra không thích
hợp với các nấm sợi không sinh
bào tử và không có vách ngăn.
Trong trường hợp này cần nuôi cấy
nấm sợi trên môi trường thích hợp
để tạo bào tử. Nếu không khắc
phục được thì phải tiến hành nuôi
trên môi trường dịch thể để thu lấy
sinh khối và giữ trong glycerol
10% như trên.
Đánh giá khả năng sống của
mẫu bảo quản:
1, Làm tan mẫu (mẫu lấy từ tủ
lạnh sâu -80
o
C hoặc nitơ lỏng -
196
o
C) trong bể ổn nhiệt 37
o
C
trong 2 phút.
2, Dùng que cấy lấy các
miếng môi trường thạch đặt vào 3
vị trí khác nhau trên môi trường
thạch đĩa thích hợp. Để ở nhiệt độ

thích hợp và xem khả năng mọc sau
thời gian thích hợp (2-4 ngày). Chú
ý khi lấy mẫu cần lấy cả sợi nấm để
đưa vào môi trường thạch đĩa.
Một số điều chú ý đối với bảo
quản nấm sợi:
- Ảnh hưởng của ánh sáng
với quá trình hình thành bào
tử: Phần lớn trường hợp thì sự
thành công của phương pháp
bảo quản phụ thuộc vào số
lượng bào tử. Ánh sáng là một
tác nhân quan trọng đối với
quá trình hình thành bào tử của
nấm sợi, ánh sáng có bước
sóng ngắn có tác dụng kích
thích quá trình hình thành bào
tử, ánh sáng gần vùng cực tím
(3100 – 4000 nm) có tác dụng
thay đổi màu sắc và kích thước
khuẩn lạc.
- Thành phần môi trường:
Nói chung các môi trường có
thành phần dinh dưỡng nghèo
thì thường cho lượng bào tử
lớn.
- Tránh nhiễm tạp các con
mạt (mite), các chủng nấm sợi
lưu giữ thường bị mạt phá
hoại. Đầu tiên chúng ăn chủng

giống và làm hỏng, sau đó gây
tạp nhiễm do mang bào tử và
vi khuẩn trên cơ thể từ ống này
sang ống khác. Vì lý do trên
mà cần có biện pháp hạn chế
mạt, thông thường các chủng
giống phải được bảo quản ở
nơi sạch, nhiệt độ 4-8
o
C.


Vietsciences- Dương Văn Hợp,
Nguyễn Lân Dũng