Công nghệ gen Thực vật

TRƯỜNG CĐ SP SÓC TRĂNG
KHOA TỰ NHÊN
TÔ SINH KTNN

1. Tạo mô sẹo & dòch treo tế bào
2. Quá trình sinh phôi thể hệ
3. Chuyển gen
4. Nuôi cấy và dung hợp tế bào
trần
1.Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
1.Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen


Mô sẹo
Mô sẹo
: đám tế bào không phân hóa,
: đám tế bào không phân hóa,
phân chia mạnh dưới tác động của một
phân chia mạnh dưới tác động của một
auxin mạnh (như 2,4-D) riêng rẽ hay
auxin mạnh (như 2,4-D) riêng rẽ hay
phối hợp citokinin.
phối hợp citokinin.

Sự tạo mô sẹo
Sự tạo mô sẹo
in vitro
in vitro
, nhờ auxin,
, nhờ auxin,

thuộc một trong ba quá trình:
thuộc một trong ba quá trình:
*
*


Phản phân hóa tế bào nhu mô
Phản phân hóa tế bào nhu mô
* Phân chia tầng phát sinh (dicot)
* Phân chia tầng phát sinh (dicot)
* Xáo trộn MPS cấp 1 (monocot)
* Xáo trộn MPS cấp 1 (monocot)
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
1.
Tạo
mô
sẹo
&
dòch
treo
tế
bào

Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
1.
Tạo
mô
sẹo

&
dòch
treo
tế
bào
Sự tạo dòch treo tế bào
dòch tế bào phân tán và tăng
trưởng trong môi trường lỏng.
* Khởi phát bằng cách đặt mô sẹo
(hay cây con, phôi, MPS ngọn…)
vào trường lỏng được lắc
* Môi trường lỏng cũng chứa
auxin, với citokinin hay không.

Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
1.
Tạo
mô
sẹo
&
dòch
treo
tế
bào
Tế bào sinh phôi
(có khả năng sinh phôi) có
kích thước nhỏ, đẳng kính,
vách mỏng, tế bào chất
đậm đặc và nhân to.

Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
1.
Tạo
mô
sẹo
&
dòch
treo
tế
bào
Dòch treo tế bào lý tưởng
chứa nhiều tế bào phân chi
tích cực, đồng nhất, hầu
như chỉ gồm các tế bào
sinh phôi cô lập hay họp
thành nhóm nhỏ.

Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
1.
Tạo
mô
sẹo
&
dòch
treo
tế
bào

Ích lợi của dòch treo tế bào:
* Tăng cường trao đổi khí & các
chất, loại trừ tính hữu cực của
mô
* Vi nhân giống, thu nhận các
hợp chất thứ cấp, trắc nghiệm
độc tố (chọn dòng tế bào),
chuyển gen, cô lập và nuôi cấy
tế bào trần

Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
2.
Thu
nhận
phôi
thể
hệ (từ
mô
sẹo
hay
dòch
treo
tế
bào)
* Phôi thể hệ (phôi soma)
được tạo từ tế bào thể hệ
(tế bào cơ thể, tế bào soma,
2n), theo con đường sinh
phôi thể hệ.

Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
2.
Thu
nhận
phôi
thể
hệ (từ
mô
sẹo
hay
dòch
treo
tế
bào)
* Sinh phôi thể hệ (tạo phôi
thể hệ) qua các giai đoạn
tương tự như sinh phôi hợp
tử .
* Phôi thể hệ → Cây con giữ
đặc tính di truyền của tế
bào thể hệ.

Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
2.
Thu
nhận
phôi

thể
hệ (từ
mô
sẹo
hay
dòch
treo
tế
bào)
2 giai đoạn thu nhận phôi thể hệ
- tạo tế bào sinh phôi (mô sẹo, dòch
treo tế bào): cần auxin
- tiến hóa phôi: giảm hay loại auxin

Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
3. Sự
chuyển
gen
ở
thực
vật
+ Agrobacterium (với
plasmid biến đổi)
Nuôi cấy và tuyển chọn với chất kháng sinh

Suùng DNA
SÚNG BẮN GEN
4. Cô lập, nuôi cấy và dung hợp tế bào trần
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
Saûn phaåm dung hôïp

Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
Nuôi cấy tế bào và thu nhận cây chuyển gen
4. Cô
lập,
nuôi
cấy và
dung
hợp
tế bào
trần
Kiểu isoenzym malat dehydrogenaz của cây lai
BF 15 x Aminca