Tải bản đầy đủ (.pdf) (8 trang)

Báo cáo nghiên cứu khoa học: "SỰ PHÂN BỐ VÀ KHẢ NĂNG SINH CHẤT KHÁNG SINH CỦA MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN HIẾM THUỘC CHI MICROMONOSPORA PHÂN LẬP TỪ ĐẤT BÙN THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG" ppsx

Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (209.38 KB, 8 trang )

S PHN B V KH NNG SINH CHT KHNG SINH
CA MT S CHNG X KHUN HIM
THUC CHI MICROMONOSPORA PHN LP
T T BN THNH PH NNG
THE DISTRIBUTION AND THE ABILITY OF PRODUCING ANTIBIOTIC
OF SOME RARE ACTYNOMYCETES STRAINS, BELONGING
TO MICROMONOSPORA GENUS EXTRACTED FROM THE MUDDY SOIL
IN DANANG CITY


THU H - Vế CHU TUN
Trng i hc S phm, i hc Nng


TểM TT
T 40 mu t bựn ca thnh ph Nng, ó phõn lp c 90 chng x khun him thuc
chi Micromonospora, trong ú cú 37 chng cú hot tớnh khỏng sinh, v.v Tuyn chn c 4
chng N
1
, N
4
, N
6
v N
7
cú hot tớnh khỏng sinh mnh, to vũng khỏng khun, khỏng vi
nm cao, cú th dựng sn xut dch khỏng sinh thụ, phũng v chng nm bnh do vi nm
gõy ra mt s cõy trng v vt nuụi.
ABSTRACT
From 40 samples of muddy soil in Danang city, 90 rare Actynomycetes strains of
Micromonospora genus have been extracted, of which 37 strains are antibiotic, etc


Four strains N, N4, N6 and N7 are selected. They have the features of a strong
antibiotic: creation of antibacterial cycles and high antimocrofungus. They can be used to
produce raw antimyces liquid, to prevent and control diseases created by microfungus on
some plants and animals.


1. ỷt vỏỳn õóử
Trong nhổợng nm gỏửn õỏy, cuỡng vồùi sổỷ phaùt trióứn
nọng nghióỷp, vióỷc sổớ duỷng caùc loaỷi thuọỳc hoaù hoỹc baớo
vóỷ thổỷc vỏỷt phuỷc vuỷ saớn xuỏỳt nọng nghióỷp ngaỡy caỡng
gia tng. Bón caỷnh caùc kóỳt quaớ õaợ õaỷt õổồỹc thỗ mỷt
traùi cuớa vióỷc sổớ duỷng hoaù chỏỳt baớo vóỷ thổỷc vỏỷt laỡ
khaù lồùn. où laỡ sổỷ aớnh hổồớng cuớa chuùng õóỳn caùc hóỷ
sinh thaùi vaỡ taùc õọỹng xỏỳu õóỳn sổùc khoeớ con ngổồỡi,
lồùn hồn nổợa laỡ taùc õọỹng õóỳn sổỷ phaùt trióứn bóửn vổợng
trong nọng nghióỷp. Mọỹt sọỳ kóỳt quaớ nghión cổùu õaợ chổùng
minh vai troỡ cuớa xaỷ khuỏứn trong vióỷc tọứng hồỹp caùc
chỏỳt khaùng sinh khaùng khuỏứn rỏỳt tọỳt vaỡ an toaỡn vóử mọi
trổồỡng sọỳng. Thaỡnh phọỳ aỡ Nụng coù hóỷ sinh thaùi õa
daỷng, thuỏỷn lồỹi cho sổỷ phaùt trióứn cuớa caùc loaỡi vi
sinh vỏỷt coù lồỹi. Baỡi baùo naỡy õóử cỏỷp õóỳn vióỷc nghión
cổùu sổỷ phỏn bọỳ cuợng nhổ khaớ nng sinh khaùng sinh cuớa
mọỹt sọỳ chuớng xaỷ khuỏứn hióỳm, õổồỹc phỏn lỏỷp tổỡ õỏỳt
buỡn ồớ Thaỡnh phọỳ aỡ Nụng.

2. ọỳi tổồỹng vaỡ phổồng phaùp nghión cổùu
2.1. ọỳi tổồỹng
* Caùc chuớng xaỷ khuỏứn õổồỹc phỏn lỏỷp tổỡ 40 mỏựu õỏỳt
buỡn cuớa thaỡnh phọỳ aỡ Nụng
* Caùc chuớng vi sinh vỏỷt kióứm õởnh

+ Caùc chuớng vi khuỏứn kióứm õởnh
- Bacillus subtilis ATCC 6633
- Staphylococcus aureus ATCC 1228
- Escherichia coli ATCC 1283
- Klebsiella pneumoniae
- Sarcina lutea ATCC 9341
+ Caùc chuớng nỏỳm kióứm õởnh
- Aspergillus niger
- Fusarium oxysporum
- Candida albicans
- Pirycularia oryzae
2.2. Phổồng phaùp nghión cổùu
* Lỏỳy mỏựu õỏỳt vaỡ phỏn lỏỷp xaỷ khuỏứn theo phổồng
phaùp cuớa Nguyóựn Thaỡnh aỷt
[1], [2].
* Tuyóứn choỹn caùc chuớng xaỷ khuỏứn coù hoaỷt tờnh sinh
chỏỳt khaùng sinh bũng phổồng phaùp thoới thaỷch cuớa Egorov
[3].

3. Kóỳt quaớ vaỡ thaớo luỏỷn
3.1. Sổỷ phỏn bọỳ cuớa xaỷ khuỏứn chi Micromonospora
trong õỏỳt buỡn cuớa thaỡnh phọỳ aỡ Nụng
* Tổỡ 40 mỏựu õỏỳt buỡn, chuùng tọi õaợ phỏn lỏỷp vaỡ
thuỏửn khióỳt õổồỹc 90 chuớng xaỷ khuỏứn thuọỹc chi
Micromonospora trón mọi trổồỡng Gause I. Tỏỳt caớ caùc chuớng
xaỷ khuỏứn thuọỹc chi naỡy õóửu coù caùc õỷc õióứm chung nhổ
sau:
+ ất hỗnh thaỡnh khuỏứn ty khờ sinh, chố coù khuỏứn ty cồ
chỏỳt.
+ Maỡu sừc khuỏứn laỷc tổỡ vaỡng nhaỷt õóỳn da cam vaỡ

chuyóứn thaỡnh nỏu, nỏu õoớ sau thồỡi gian 7 - 14 ngaỡy nuọi
cỏỳy do hỗnh thaỡnh baỡo tổớ.
+ Caùc baỡo tổớ õồn moỹc rióng reợ phỏn bọỳ doỹc theo
sồỹi cồ chỏỳt, khọng coù cuọỳng sinh baỡo tổớ hoỷc cuọỳng
sinh baỡo tổớ ngừn.
+ Khuỏứn laỷc thổồỡng nhoớ, bóử mỷt nhụn hoỷc xuỡ xỗ.
+ Tỏỳt caớ caùc chuớng xaỷ khuỏứn phỏn lỏỷp õổồỹc phỏn
bọỳ trong caùc loaỷi õỏỳt buỡn: buỡn ao, buỡn ruọỹng luùa,
buỡn sọng, buỡn caùt.
* Chụng täi â tiãún hnh kho sạt nhiãưu âåüt nhàòm
xạc âënh sỉû phán bäú ca cạc chng xả khøn chi
Micromonospora tải cạc máùu âáút bn thüc khu vỉûc thnh
phäú Â Nàơng. Mäùi láưn sỉí dủng 30 - 40 âéa petri chỉïa
cạc mäi trỉåìng Gause I hồûc ISP - 4 våïi cạc âäü pha
long dëch âáút khạc nhau.
Kãút qu nghiãn cỉïu sỉû phán bäú ca cạc chng xả
khøn hiãúm chi Micromonospora âỉåüc trçnh by åí bng 1.

Bng 1: Säú lỉåüng xả khøn hiãúm thüc chi Micromonospora
trong cạc máùu âáút bn tải thnh phäú Â Nàơng

Nåi v thåìi
gian láúy máùu
Loải máùu
Thm thỉûc
váût
pH
X
Säú
lỉåüng.

10
3
CFU/g
Sån Tr
(26/12/2000)
(17/01/2000)
Bn ao
Bn rüng
lụa
Rong, bo
Lụa, c
6,
5
6,
5
60
71
60.10
3

71.10
3

M Khã
(24/01/2000)
Bn cạt Rong
6,
0
30 30.10
3


Säng Hn
(10/02/2000)
Bn säng Rong, c
6,
0
65 65.10
3

Ho Khạnh
(23/02/2000)
Bn ao
C, bo
Nháût Bn
6,
5
60 50.10
3

Ho Cỉåìng
(28/02/2000)
Bn
rüng
lụa
Lụa, c
5,
0
30 30.10
3


Ho Cáưm
(28/02/2000)
Bn rüng
lụa
Lụa, c
6,
5
60 60.10
3

Ho Th
(18/03/2000)
Bn ao
Rong âi
chäưn sen
6,
0
57 57.10
3

Ho Phạt
(28/03/2000)
Bn rüng
lụa
Lụa, c
6,
5
70 70.10
3


Kh Trung
(28/03/2000)
Bn cạt Rong
5,
5
32 32.10
3

Cáưu Â
(05/04/2001
6,
5
70 70.10
3


Bn säng,
Bn rüng
lụa
C, rong,
Lụa, c
6,
5
70 70.10
3

Chụ : CFU: Colony Forming Unit (Âån vë hçnh thnh
khøn lảc)

Kãút qu bng 1 cho tháúy:

Säú lỉåüng xả khøn hiãúm chi Micromonospora âỉåüc phán
láûp trong cạc máùu âáút bn khạc nhau thç khạc nhau.
- Âáút bn rüng lụa åí Ho Phạt, Cáưu Â, Sån Tr
l nhỉỵng nåi âáút cọ canh tạc, giu cháút dinh dỉåỵng, pH
gáưn trung tênh (pH = 6,5), säú lỉåüng xả khøn trong 1 gam
âáút bn cao nháút so våïi cạc máùu âáút khạc, trung bçnh
âảt (70 - 71).10
3
CFU/gam âáút. Tuy nhiãn åí Ho Cỉåìng cng
l máùu âáút bn rüng lụa, nhỉng pH ráút tháúp (pH = 5,0 -
5,5) nãn säú lỉåüng xả khøn hiãúm trong 1 gam âáút bn êt
hån nhiãưu, âảt 30.10
3
CFU/ gam âáút.
- Âáút bn ven säng Hn, Cáưu  l nåi giu cháút
dinh dỉåỵng, ngưn nỉåïc lỉu thäng, pH tỉång âäúi thêch håüp
(pH = 6,0 - 6,5), do âọ säú lỉåüng xả khøn hiãúm trong 1
gam âáút bn cng khạ cao: (65 - 70).10
3
CFU/gam âáút.
- Âáút bn ao Ho Khạnh, Sån Tr v Ho Th cọ
säú lỉåüng xả khøn trong 1 gam âáút bn êt hån, khong
(57 - 60).10
3
CFU/gam âáút, do ngưn nỉåïc khäng lỉu thäng pH
tháúp (pH = 5,5 - 6,0).
- Âáút bn cạt åí M Khã, Kh Trung ngho dinh
dỉåỵng, pH = 5,5-6,0. Säú lỉåüng xả khøn trong 1 gam âáút
bn tháúp nháút trung bçnh tỉì (30 - 32).10
3

CFU/ gam âáút.
So sạnh cạc kãút qu trãn våïi kãút qu nghiãn cỉïu
ca Cao Vàn Thu v cäüng sỉû [6] phán láûp tỉì cạc máùu
âáút bn Häư Táy, häư Trục Bảch, häư By Máùu, säng Ngỉu
(H Näüi), säng Tråïi, säng Láưy (Qung Bçnh) trong 1 g âáút
bn khong (47  2,2).10
3
CFU/gam âáút thç kãút qu phán láûp
ca chụng täi tải cạc âiãøm thu máùu âáút bn rüng lụa
åí Ho Phạt, Sån Tr, Cáưu  cọ säú lỉåüng xả khøn
hiãúm chi Micromonospora/gam âáút bn cao hån mäüt êt. Nhỉng
cạc máùu âáút bn åí M Khã, Kh Trung lải cọ säú lỉåüng
tháúp hån.
Qua trãn chụng täi nháûn tháúy sỉû phán bäú ca cạc
chng xả khøn hiãúm chi Micromonospora phủ thüc vo
nhiãưu ngun nhán, trong âọ tênh cháút ca âáút cọ nh
hỉåíng quút âënh âãún sỉû phán bäú ca chụng. Âáút mu
måỵ cọ canh tạc, giu dinh dỉåỵng, pH trung tênh, ngưn
nỉåïc lỉu thäng thç nåi âọ cọ khu hãû xả khøn ca chi
Micromonospora phạt triãøn nhiãưu.
Nháûn xẹt ny cng ph håüp våïi mäüt säú tạc gi
khi nghiãn cỉïu åí cạc vng khạc tải Viãût Nam nhỉ Lã Mai
Hỉång, (H Näüi) [4]; Biãưn Vàn Minh, (Hú) [5]; Cao Vàn Thu
v cäüng sỉû (H Näüi) [6].
3.2. Xạc âënh t lãû cạc chng xả khøn hiãúm chi
Micromonospora sinh cháút khạng sinh
* Tỉì 90 chng xả khøn hiãúm chi Micromonospora phán
láûp âỉåüc, chụng täi tiãún hnh ni cáúy trãn mäi trỉåìng
Gause II, åí nhiãût âäü 28 - 30
o

C, thåìi gian 7 - 14 ngy. Sau
âọ hoảt tênh khạng sinh âỉåüc xạc âënh bàòng phỉång phạp
khäúi thảch våïi 4 loải vi sinh váût kiãøm âënh. Kãút qu
âỉåüc trçnh by åí bng 2.

Baớng 2: Tố lóỷ caùc chuớng xaỷ khuỏứn hióỳm chi
Micromonospora
coù hoaỷt tờnh khaùng sinh

Sọỳ chuớng ổùc chóỳ vi
khuỏứn
Tọứng sọỳ
chuớng phỏn
lỏỷp
Sọỳ chuớng
coù hoaỷt
tờnh khaùng
sinh
Gram dổồng Gram ỏm
Sọỳ chuớng
ổùc chóỳ vi
nỏỳm
90 37 28 20 14
100% 41,11 31,11 22,22 15,55

Kóỳt quaớ baớng 2 cho thỏỳy coù 37/90 chuớng coù hoaỷt
tờnh khaùng sinh chióỳm tố lóỷ 41,11%, trong õoù 28/90 chuớng
khaùng õổồỹc vi khuỏứn Gram dổồng chióỳm tố lóỷ cao nhỏỳt -
31,11%, sọỳ chuớng khaùng vi khuỏứn Gram ỏm laỡ 20/90 chuớng
chióỳm tố lóỷ thỏỳp hồn - 22,22%, thỏỳp nhỏỳt laỡ sọỳ chuớng

ổùc chóỳ vi khuỏứn 14/90 chuớng chióỳm tố lóỷ - 15,55%, khi so
saùnh caùc kóỳt quaớ trón vồùi kóỳt quaớ cuớa Bióửn Vn Minh
(Huóỳ) [5], Cao Vn Thu (Haỡ Nọỹi) [6] thỗ caùc tố lóỷ trón
coù thỏỳp hồn mọỹt ờt.
3.3. Tuyóứn choỹn caùc chuớng xaỷ khuỏứn hióỳm chi
Micromonospora coù hoaỷt tờnh khaùng sinh maỷnh
* 37 chuớng xaỷ khuỏứn hióỳm chi Micromonospora õổồỹc
nuọi cỏỳy trón mọi trổồỡng Gause II ồớ nhióỷt õọỹ 28 - 30
o
C,
sau 7 - 14 ngaỡy hoaỷt tờnh khaùng sinh õổồỹc thổớ bũng
phổồng phaùp khuóỳch taùn trón mọi trổồỡng thaỷch vồùi 9 vi
sinh vỏỷt kióứm õởnh. Kóỳt quaớ õổồỹc trỗnh baỡy trong baớng
3.
Baớng 3: Hoaỷt tờnh khaùng sinh cuớa 37 chuớng Micromonospora

Kờch thổồùc voỡng vọ khuỏứn (D - d, mm)
Hoaỷt
tờnh
khaùng
sinh
E.coli ATCC
1283
K.pneumoniac
S.lutea ATCC
9341
B.subtitus ATCC
6633
S. aureus ATCC
1228

F.oxysporeem
A.niger
P.oryzae
C.albicans
Sọỳ
chuớng
9 6 7 14 12 7 7 6 4
Tố lóỷ
%
24,3
2
16,2
1
18,9
1
37,83

32,43

18,91

18,91

16,21

10,80

Kóỳt quaớ ồớ baớng 3 cho thỏỳy khaớ nng sinh chỏỳt
khaùng sinh, khaùng caùc vi khuỏứn Gram dổồng laỡ maỷnh nhỏỳt
(khaùng B.subtitis chióỳm 37,83%, khaùng S.aureus chióỳm

32,43%). Khaớ nng khaùng caùc vi khuỏứn Gram vaỡ vi nỏỳm
thỏỳp hồn (Khaùng E.coli chióỳm 24, 32%, khaùng S.lutea chióỳm
- 18,91%, khaùng K.pneumoniae chióỳm - 16,21%, khaùng
F.oxysporum vaỡ A.niger chióỳm 18,91%, khaùng P.oryzae chióỳm
16,21%), khaùng C.albicans chióỳm 10,80%.
Nóỳu so saùnh caùc kóỳt quaớ trón vồùi kóỳt quaớ nghión
cổùu cuớa Bióửn Vn Minh (Huóỳ)
[5], Cao Vn Thu vaỡ cọỹng sổỷ (Haỡ Nọỹi) [6], õaợ cho thỏỳy
sọỳ chuớng coù khaớ nng khaùng vi khuỏứn Gram dổồng cao hồn,
khaùng vi khuỏứn Gram ỏm thỏỳp hồn, coỡn khaớ nng khaùng vi
nỏỳm gỏửn tổồng õổồng.
* Trong sọỳ 37 chuớng Micromonospora coù hoaỷt tờnh
khaùng sinh õổồỹc phỏn lỏỷp tổỡ caùc mỏựu õỏỳt buỡn ồớ thaỡnh
phọỳ aỡ Nụng, qua sồ tuyóứn chuùng tọi choỹn ra õổồỹc 7
chuớng coù khaớ nng khaùng vồùi ờt nhỏỳt 4 loaỷi vi sinh vỏỷt
kióứm õởnh, taỷm õổồỹc kờ hióỷu laỡ: N
1
, N
2
, N
3
, N
4
, N
5
,
N
6
vaỡ N
7

. Kóỳt quaớ õổồỹc trỗnh baỡy trong baớng 4 sau õỏy:
Baớng 4: Hoaỷt tờnh khaùng sinh cuớa 7 chuớng xaỷ khuỏứn
chi Micromonospora

Kờch thổồùc voỡng vọ khuỏứn (D - d, mm)
Kờ
hióỷu
E.coli ATCC
1283
K.pneumoniac
S.lutea ATCC
9341
B.subtitus
ATCC 6633
S. aureus ATCC
1228
F.oxysporeem
A.niger
P.oryzae
C.albicans
N
1
17 18 20 19 5
N
2
19 18 19 16
N
3
18 19 20 17
N

4
18 16 19 20 17 16 6
N
5
18 17 18 19 17
N
6
17 18 19 20 17 18 8
N
7
16 15 18 19 18 17 7
Kóỳt quaớ ồớ baớng 4 cho thỏỳy coù 04 chuớng N
1
, N
2
, N
6

vaỡ N
7
coù khaớ nng khaùng õổồỹc caùc vi khuỏứn Gram ỏm, vi
khuỏứn Gram dổồng vaỡ nỏỳm, taỷo voỡng vọ khuỏứn rỏỳt tọỳt cho
caùc nghión cổùu hoaỷt tờnh khaùng sinh cuớa xaỷ khuỏứn hióỳm
coù ồớ thaỡnh phọỳ aỡ Nụng.

4. Kóỳt luỏỷn
4.1. Tổỡ 40 mỏựu õỏỳt buỡn cuớa thaỡnh phọỳ aỡ Nụng,
õaợ phỏn lỏỷp õổồỹc 90 chuớng xaỷ khuỏứn hióỳm chi
Micromonospora. Sọỳ lổồỹng xaỷ khuỏứn trong 1 gam õỏỳt ồớ caùc
mỏựu õỏỳt khaùc nhau laỡ khaùc nhau. Caùc mỏựu õỏỳt buỡn

ruọỹng luùa ồớ Hoaỡ Phaùt, Cỏửu oớ, Sồn Traỡ coù sọỳ
lổồỹng xaỷ khuỏứn hióỳm trong 1 gam õỏỳt cao nhỏỳt so vồùi
caùc mỏựu õỏỳt nhổ buỡn ao, buỡn caùt ồớ Hoaỡ Khaùnh, Hoaỡ
Thoỹ, Myợ Khó vaỡ Khuó Trung, thaỡnh phọỳ aỡ Nụng.
4.2. Trong 90 chuớng xaỷ khuỏứn phỏn lỏỷp õổồỹc, coù 37
chuớng coù hoaỷt tờnh khaùng sinh vồùi ờt nhỏỳt mọỹt trong sọỳ
caùc vi sinh vỏỷt kióứm õởnh chióỳm 41,11%.
4.3. Tổỡ 37 chuớng xaỷ khuỏứn coù hoaỷt tờnh khaùng sinh,
õaợ tuyóứn choỹn õổồỹc 7 chuớng coù hoaỷt tờnh khaùng sinh,
khaùng õổồỹc ờt nhỏỳt vồùi 4 vi sinh vỏỷt kióứm õởnh. Trong
õoù coù 4 chuớng N
1
, N
4
, N
6
vaỡ N
7
coù khaớ nng khaùng
õổồỹc caớ vi khuỏứn Gram ỏm, vi khuỏứn Gram dổồng vaỡ Nỏỳm,
taỷo voỡng khaùng khuỏứn, khaùng nỏỳm cao. Coù thóứ duỡng caùc
chuớng tuyóứn choỹn coù hoaỷt tờnh khaùng sinh maỷnh naỡy
nghión cổùu sỏu hồn nhũm taỷo ra dởch khaùng sinh thọ hổợu
hióỷu phoỡng vaỡ chọỳng bóỷnh vi nỏỳm cho mọỹt sọỳ loaỷi cỏy
trọửng vaỡ vỏỷt nuọi taỷi thaỡnh phọỳ aỡ Nụng.


TAèI LIU THAM KHAO

[1] Nguyóựn Lỏn Duợng, Phaỷm Vn Ty, Dổồng ổùc Tióỳn, Mọỹt

sọỳ phổồng phaùp nghión cổùu vi sinh hoỹc tỏỷp II, Nxb
Khoa hoỹc vaỡ Kyợ thuỏỷt, Haỡ Nọỹi, 1972, tr.70 75.
[2] Nguyóựn Thaỡnh aỷt, Cồ sồớ sinh hoỹc vi sinh vỏỷt, Nxb
Giaùo duỷc, Haỡ Nọỹi, 1999.
[3] Egorov N.X, Thổỷc tỏỷp vi sinh hoỹc, (Ngổồỡi dởch:
Nguyóựn Lỏn Duợng), Nxb Mir Matxcồva, Nxb Khoa hoỹc vaỡ
Kyợ thuỏỷt, Haỡ Nọỹi, 1983.
[4] Ló Mai Hổồng, Nghión cổùu xaỷ khuỏứn sinh chỏỳt khaùng
sinh phỏn lỏỷp ồớ Haỡ Nọỹi vaỡ vuỡng phuỷ cỏỷn, Luỏỷn aùn
Tióỳn sộ Sinh hoỹc, 1993, tr. 48 52.
[5] Bióửn Vn Minh, Nghión cổùu khaớ nng sinh chỏỳt khaùng
sinh cuớa mọỹt sọỳ chuớng xaỷ khuỏứn phỏn lỏỷp tổỡ õỏỳt
Bỗnh Trở Thión, Luỏỷn aùn Tióỳn sộ Sinh hoỹc,
2000, tr. 7 32.
[6] Cao Vn Thu, Chu Thở Lọỹc, Lổồng ổùc Tuỏỳn, Goùp phỏửn
nghión cổùu mọỹt sọỳ loaỡi Micromonospora sinh tọứng hồỹp
chỏỳt khaùng sinh tổỡ buỡn, buỡn caùt Vióỷt Nam, Taỷp chờ
Dổồỹc hoỹc sọỳ 5, 1993, tr. 3 6.

×