Công nghệ ADN tái tổ hợp part 3 pptx

ĐIệN DI PHÂN TíCH AXIT NUCLEIC
Gel polyacrylamid ADN 1 1000 bp
Gel agarose ADN / ARN 20 bp 20 kb
PFGE ADN 10 kb 10 Mb
DGGE ADN/ARN Sai khác một vài nucleotit

Gradient biến tính

0%

70%

40%

Các giếng tra mẫu

Điện cực
13
Gradient biến tính

40%
70%

Chiều dịch chuyển của ADN

Thể đột biến 1
dễ biến tính hơn

Thể đột biến 2
khó biến tính hơn

ADN
kiểu dại
DGGE vuông góc

DGGE song song

Kh¸i niÖm chung
ADN t¸i tæ hîp ®−îc thùc hiÖn nh− thÕ nµo?
T¸ch chiÕt vµ tinh s¹ch c¸c axit nucleic
T¹o
vÐct¬
t¸i
tæ
hîp
Néi dung
14
T¹o
vÐct¬
t¸i
tæ
hîp
C¸c lo¹i enzym sö dông trong ADN t¸i tæ hîp
Nh©n dßng gen vµ x©y dùng ng©n hµng gen
Sµng läc c¸c dßng gen trong ng©n hµng gen
Về vectơ / thể truyền
Vectơ nhân dòng
Vectơ biểu hiện
1. Kích thớc càng nhỏ, kích thớc đoạn xen càng lớn.
2. Trình tự nucleotit đợc biết đầy đủ.
15

3. Có khả năng tự sao chép trong tế bào chủ.
Các đặc tính chung của véctơ
1. Kích thớc càng nhỏ, kích
thớc đoạn xen càng lớn.
2. Trình tự nucleotit đợc biết
đầy đủ.
3. Có trình tự khởi đầu sao chép
phù hợp tế bào chủ.
4.
Nhận
biết
nhờ
các
gen
chỉ
thị
Vectơ nhân dòng và Vectơ biểu hiện
16
4.
Nhận
biết
nhờ
các
gen
chỉ
thị
hoặc gen đánh dấu.
5. Có vị trí gắn phân tử ADN
ngoại lai (vị trí đa tách dòng
polycloning site / MCS).

C¸c ®Æc ®iÓm c¬ b¶n cña vÐct¬ t¸ch dßng
17
vÐct¬ plasmid
 KÝch th−íc 1 –
200 kb, sîi kÐp,
vßng.
 pBR332 do
Bolivar vµ
Rodiguez
18
pBR332
4363 bp
Rodiguez
(1977) thiÕt
kÕ cho phÐp
mang ®o¹n
ADN cµi ®Õn
6 kb.