Nghiên cứu phương pháp định lượng diltiazem trong huyết tương người bằng sắc ký lỏng khối phổ (LC MS)

ĐẶT VẤN ĐỀ
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pháp định lượng Diltiazem trong huyết tương người bằng sắc ký lỏng
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- 2 -
PHẦN 1. TỔNG QUAN
1.1. TỔNG QUAN VỀ DILTIAZEM
1.1.1. Đặc điểm cấu tạo và tính chất hóa lý [24,28]

a. Công thức cấu tạo
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b. Tính chất vật lý, hóa họcc
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1.1.2. Tác dụng dược lý, dược động học:
a. Tác dụng dược lý [3,4,5,21]
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b. Dược động học [16,23,25,26]:
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- 4 -

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c. Chỉ định và cách dùng By3a3xD
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d. Lưu ý khác khi dùng thuốc BWUD
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- 5 -
` Chống chỉ định:
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1.1.3. Một số phương pháp định lượng DTZ trong dịch sinh học
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- 6 -
Bảng 1.1:Một số phương pháp phân tích DTZ trong huyết tương
Stt Tài liệu Xử lý mẫu
Phương pháp
phân tích
Thời gian
phân tích mẫu
(phút)
LLOQ
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1.2. TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP LC/MS [10,11]
1.2.1. Khái niệm
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1.2.2. Phân loại
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1.2.3. Cấu tạo
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- 10 -
1.2.3.1. Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
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1.2.3.2. Mặt phân giới ion hóa (Ionization Interface)

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- 11 -
Hình 1.1. Mô hình hệ thống LC/MS
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1.2.3.3. Khối phổ (MS)
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* Máy phân tích khối và detector ion.
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- 12 -
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- 13 -
Hình 1.3. Bộ phận phát hiện ion
Hình 1.2. Dòng ion
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Dữ liệu và hệ thống kiểm soát
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- 14 -
Hình 1.4: Hệ thống MS/MS Triple-quadrupole
Hình 1.5. Hệ thống ghi dữ liệu
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1.2.4. Ứng dụng
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- 15 -
Hình 1.6: Sắc ký đồ tổng ion (a) và phổ m/z (b)
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1.3. PHÂN TÍCH THUỐC TRONG DỊCH SINH HỌC [17]
1.3.1. Các phương pháp chiết tách thuốc trong huyết tương[1,17]c

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a. Phương pháp chiết pha rắn (SPE) :
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,!IG2n&"e.%,RN);"
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 #T 3$9Q'" %)
b. Phương pháp kết tủa protein
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,,+3+,3k+wA3k+q> 9m,+,
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) Chiết lỏng – lỏngc
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- 16 -
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M'"6 , "#)
1.3.2. Định lượng thuốc trong huyết tương bằng sắc ký lỏng với các loại
detector BU]Dc
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- 17 -
1.3.3. Thẩm định phương pháp phân tích thuốc trong dịch sinh học BWXD:
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- 18 -
PHẦN 2. NGUYÊN VẬT LIỆU - ĐỐI TƯỢNG – NỘI DUNG

VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. NGUYÊN VẬT LIỆU DÙNG TRONG NGHIÊN CỨU
2.1.1. Nguyên liệu, hóa chất, dung môi
` Chất chuẩn và nội chuẩn:
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G2)
` Dung môi, hóa chất:
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,, +3`+J3)))N.""Ozƒ)
` Huyết tương trắng không có DTZ:
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2.1.2. Dụng cụ, thiết bị
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-Thiết bị phân tíchckZ/b#fTSQ Quantum Ultra:*+ ,
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-Thiết bị dụng cụ khác:
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- 19 -
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2.2. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
` Mẫu trắng: A"M?Z}FA"M(*"S "*”)
` Mẫu chuẩn hay mẫu thử tự tạo: A,=*h"O,"M?
ZP%2)
` Mẫu thử: A"M?*""#"#=*hE,Ri)
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.1. Xây dựng phương pháp phân tích
2.3.1.1. Xây dựng điều kiện khối phổ xác định DTZ và chuẩn nội
* Khảo sát lựa chọn chất chuẩn nội:
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•Tối ưu hoá điều kiện khối phổ xác định DTZ và nội chuẩn:
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- 20 -
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2)
`*#"S",$!IG2$,S"
f1)

`*#"$M,++,#f$
&,!IG2M7%LS"!
N!)
`s( 6f2,,"O%"O1
)
2.3.1.2. Xây dựng điều kiện sắc ký
o".E"" 6,3M6,S"Z/.
M71sq`k;_k;:TSQ Quantum Ultra – Thermo Scientific>i9%
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++,k;)
2.3.1.3. Khảo sát qui trình xử lý mẫu, đánh giá ảnh hưởng của nền mẫu
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M=*hl"M?0b n""O=*h,,
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,+3|",+>3,R" :k+wA3k+q>)
- 21 -
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2.3.2. Thẩm định phương pháp phân tích
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* Chuẩn bị mẫu chuẩn tự tạo:
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Bảng 2.1. Chuẩn bị các dung dịch chuẩn làm việc DTZ trong nước (S-W)
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Nồng độ (ng/mL) x] U]] Wx] x]] U]]] W]]] a]]]
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- 22 -
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Bảng 2.2. Cách chuẩn bị các mẫu chuẩn DTZ trong huyết tương
Ký hiệu
Nồng độ
(ng/mL)
Dung dịch S-W trong nước
Thể tích huyết
tương trắng
(µL)
Ký
hiệu
Nồng độ
(ng/mL)
Thể tích
(µL)
S1 5 ;`”U x] U]] X]]
S2 10 ;`”W U]] U]] X]]
S3 25 ;`”y Wx] U]] X]]
S4 50 ;`”a x]] U]] X]]
S5 100 ;`”x U]]] U]] X]]
S6 200 ;`”C W]]] U]] X]]
S7 400 ;`”V a]]] U]] X]]
S8 500 ;`”^ x]]] U]] X]]
* Chuẩn bị mẫu kiểm tra (QC):
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`*l"1"O,3 n"oqE"O=*h,
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:oq`”>?E"M?Z+,76W)a)
Bảng 2.3. Chuẩn bị các dung dịch trong nước (QC-W) để pha mẫu QC:
Ký hiệu soq`” koq`” Aoq`”
Nồng độ (ng/mL) Ux] Wx]] ax]]
V
WS
(mL) y U] U^
V
bình 1 E
(mL) U]] W] W]
Bảng 2.4. Chuẩn bị các mẫu QC trong huyết tương:
- 23 -
Ký hiệu
Nồng
độ
(ng/mL)
Dung dịch QC-W trong nước
Thể tích
huyết tương
trắng (µL)

Ký hiệu
Nồng độ
(ng/mL)
Thể tích
(µL)
LQC 15 soq`” Ux] U]] X]]
MQC 250 koq`” Wx]] U]] X]]
HQC 450 Aoq`” ax]] U]] X]]
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2.3.2.1. Thẩm định độ đặc hiệu – chọn lọc
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2.3.2.2. Xây dựng đường chuẩn và khoảng tuyến tính
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2.3.2.3. Xác định giới hạn định lượng dưới (LLOQ)
- 24 -
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2.3.2.4. Thẩm định độ đúng – độ chính xác trong ngày và khác ngày
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m%2J,)*21j !ˆ;=M
'"61, ‡P%,2!yG2")•
1ˆ;=6˜Ux‚3%m8 ,,6^x}UUx‚)
2.3.2.5. Xác định tỷ lệ thu hồi hoạt chất và nội chuẩn
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Wx]ax]_ s$E%"O,S n""M?4
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