Bài giảng : TIẾP CẬN VẤN ĐỀ PHÁT HIỆN TỒN DƯ KHÁNG SINH TRONG CÁC THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ ĐỘNG VẬT PART 5 pps

Nguyênlý“Test thậnBỉ”
Ưunhược điểm????
Ý tưởngkhắcphụcnhược điểm
Khôngdùngdịchthận, mẩuthậnmà
dùngmẫutáchchiết
Táchchiếtthế nào?
Lượngmẫubaonhiêu?
Làmthế nào để kiểmtra đượcchấtlượngtest??
Yêu cầuqui trìnhtáchchiếtthế nào?
p Tách đượcchấtcầntìmrakhỏimẫu
pĐảmbảođộ thuhồi
pCácchấtsửdụngkhông ảnhhưởng
đếnchấtcầntìmvàkếtquảđọc
p Nếucóthể hạnchếđượccácchất
gâydươngtínhgiả
Thích ứngPremi-Test
Lượngmẫubaonhiêu?
Xác định Độ mẫncảmcủa
VSV vớikhángsinh
KiểmsoátChấtlượngmôi
trường, Đĩacấyvsv
Xác địnhlượngKS ítnhất
cóthể tạovòngvôkhuẩn
(A)
Kiểmtralạiqui trìnhtách
chiết= kschuẩn
Xâydựngcôngthứctính
lượngmẫubénhấtcần
lấy(M)
M (g) = A * MRL
-1

Làmthế nào để kiểmtra đượcchất
lượngtest??
Đánhgiácácthamsốđộ mạnh
(LOD, Độ nhạy, Độđặchiệu, độ chínhxác)
Phạm Kim Đăng, Marie-Louise SCIPPO; Guy DEGAND;
Caroline DOUNY; Guy MAGHUIN-ROGISTER (2007):
Chuẩn hóa phương pháp sàng lọc định tính kiểm soát tồn dư
kháng sinh trong thực phẩm cónguồn gốc động vật theo qui
định số 2002/657/EC (bài tổng hợp). Tạp chíKHKT Nông
nghiệp, ĐHNN I, TậpV, Số 1/2007; Trang 24-30.
/>d=11&ID_S=20
Chuẩnbịthựchiện
Nguyênliệuvàhoáchât
- Dungdịchchuẩn (dung môi, chấtchuẩn)
- Giốngvisinhvật: Bacillussubtilis BGA
- Môi trường nuôi cấy
Standard IINutrient Agar for microbiology
- Mẫu“trắng”
- Dextrose, methanol, NH
4
OH 2M, NaOH1M, HCl1 và2M.
- Trimethoprime (TMP) 1 mg/ml
- Đĩagiấy đườngkính12 mm
- ĐĩaPetri
- Acetonitrile, Acetone
Dụngcụ
pMicropipet
p Cânphântích(gam, mg, µg)
p Nồihấptiệttrùng
p Nồihấpcáchthuỷ à45-47°C

p Vortex
p Máylắcđảo đầu
p Lytâm(2000-6000 vòng/phút)
p Hệ thốngbay hơi(lytâmchânkhôngor thổiNitơ)
p Tủấm30°C
Chuẩnbịmôitrường(1 lít)
§ Cân 25 g môi trường
§ Thêm 6 g dextrose = 0,6% (nếudùngdungdịch20% cần?)
§ Hoàtrong 1 lit nướccất(–số ml đường) (đunsôi, khuấy
liêntục, cẩnthậnkhi sắpsôi)
§ Chovàocáclọ(4x250 ml) (nắphơilỏng)
§ Tiệttrùngtrong15 phút ở 121°C +/-0,1.
§ Làmnguồivề47°C bằngnồicáchthuỷ (Nếuthạchdự
trữà90°C trong3h, làmnguộià47°C khoảng30 phút)
Chuẩnbịmôitrường(1 lít)
§ Môitrường đưavàosửdụngsaukhihiệuchỉnh
pH=7,2±0,1 ở 25°C bằngHClhoặcNaOH1M
§ Mỗilọ100 ml môitrường: 20µl TMP (1mg/ml) + 100
µldungdịchhuyềnphùB.subtilis đượcphaloãngtheo
hướngdẫnàlắcđều
§ Đổ 14 ml thạch/đĩa (dày2,2 mm) à (200 ml = 14 đĩa)
§ Sau khi để thạchcứng, đĩa baogóibaonilonplastic và
đượcbảoquản ở 4°C tối đa 1 tuần(úpnắpxuống)