Xây dựng quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E.coli DH5α

TÓM TẮT
PHẠM DUY, HUỲNH VĂN THÁI, Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh, “Xây dựng
quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E.coli DH5α”, 8-2005.
Giáo viên hướng dẫn: TS. Lê Đình Đôn.
Đế tài được thực hiện từ 01/03/2005 đến 15/08/2005 với các nội dung:
Xây dựng phương pháp chuẩn bị tế bào khả nạp theo phương pháp sử dụng hoá chất.
Hoàn thiện quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn E.coli DH5α..
Hoàn thiện quy trình chiết tách plasmid, phản ứng cắt plasmid để kiểm tra.
Thiết lập phản ứng chèn đoạn DNA vào plasmid pBluescript.
Thực hiện kiểm tra kết quả chèn bằng enzym cắt giới hạn và phản ứng PCR trên plasmid tái tổ
hợp với cặp primers T3 T7 dựa trên vùng trình tự T3 T7 PNA polymerase và cặp primers ITS4
ITS5 dựa trên vùng trình tự ITS của nấm Beauveria bassiana.
Kết quả thu được như sau:
Thiết lập được quy trình chuẩn bị tế bào khả nạp sử dụng hoá chất, tế bào khả nạp có
thể giữ ở -70
o
C với glycerol trong thời gian 2 tháng.
Biến nạp plasmid mang đoạn DNA vào vi khuẩn E.coli DH5α.
Chiết tách plasmid không lẫn tạp theo quy trình của Sambrook và cộng sự có sửa đổi.
Kết quả kiểm tra phản ứng nối bằng phương pháp PCR trên plasmid cho thấy đã chèn
được đoạn DNA (629bp) chứa gen mã hoá 2,4-diacetylploroglucinol (2,4-DAPG) trong vi
khuẩn Psedomonas fluorescens và đoạn DNA (580bp) trong vùng ITS của loài nấm
Beauveria bassiana vào plasmid.
ii